抗三种杀菌剂灰霉菌株可溶性蛋白和酯酶的电泳图谱研究

比较研究了对多菌灵、速克灵、乙霉威表现不同抗性的灰霉病菌菌株的可溶性蛋白和酯酶的电泳图谱。结果表明:对多菌灵、速克灵、乙霉威产生抗药性的田间突变菌株,其可溶性蛋白质电泳图谱中谱带数均比敏感菌株明显减少;抗多菌灵、速克灵的灰霉病菌田间突变菌株,其酯酶电泳图谱中酶带数均较敏感菌株减少。而对乙霉威表现抗性的灰霉病菌菌株,其酯酶电泳图谱类型均与其相应的敏感菌株的酯酶电泳图谱类似,两者间差异主要表现为个别酶带强弱的变化,酶带种类及酶带数差异很小;在灰霉病菌对多菌灵、速克灵抗性菌株的酯酶电泳图谱中都存在一些抗性菌株特有的酶带,Rf0.83酯酶带为抗多菌灵灰霉病菌菌株所特有,Rf0.45和Rf0.83两条三级酯酶带为抗速克灵灰霉病菌菌株所特有。这些酯酶带的出现与抗性的产生直接相关。     

核盘菌不同水平抗药性菌株可溶性蛋白和酸酶的电泳图谱比较研究

为寻找到快捷有效的生理生化抗药性检测方法,对供试的6株对速克灵具有不同抗性水平的核盘菌进行了可溶性蛋白和酯酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带的试验研究。结果表明:不同抗性水平的菌株间蛋白质及酯酶图谱存在明显差异,中抗菌株与敏感菌株可溶性蛋白的主带基本一致,但中抗菌株的带数略多于敏感菌株,Rf=0.14,Rf=0.53两条带为中抗菌株所拥有,而敏感菌株不具有,高抗菌株的谱带数又显著少于敏感菌株,Rf=0.53的谱带为抗性菌株所特有。酯酶电泳图谱中敏感菌株与抗性菌株均存在特异性酶带,敏感菌株在Rf=0.20处有一条主酶带是抗性菌株所没有的,Rf=0.22的主酶带则为抗性菌株中所特有而敏感菌株没有的。因此,认为Rf=0.20的酯酶带与核盘菌的抗药性有一定相关性。     

番茄叶霉病菌对多菌灵和乙霉威的抗药性与电导率关系的初步研究

敏感菌株TY4对多菌灵和乙霉威的最低抑制浓度分别是0.5和5μg/m l,抗性菌株LX13在1 000μg/m l的多菌灵或乙霉威的浓度下均能正常生长。5和10μg/m l多菌灵盐酸盐溶液和乙霉威丙酮溶液同时处理敏感菌株和抗性菌株的菌丝体,用电导仪测定溶液电导率的动态变化,结果表明:在敏感菌株存在时,多菌灵盐酸盐溶液和乙霉威丙酮溶液2 h后的电导率均降低,而抗性菌株存在的溶液中电导率则未见下降。     

江苏草莓灰霉病菌对5种杀菌剂的抗药性

为明确江苏草莓灰霉病菌对5种杀菌剂(嘧霉胺、多菌灵、异菌脲、腐霉利和乙霉威)抗药性现状,2011年和2012年在江苏5个草莓产区分别采集133个和206个草莓灰霉病菌(Botrytis cinerea)菌株,采用菌丝生长速率法测定其对嘧霉胺的敏感性,采用最低抑制浓度法(MIC)测定2012年206个草莓灰霉病菌菌株对多菌灵、腐霉利、异菌脲、乙霉威的抗药性。检测结果显示,2011年和2012年草莓灰霉病菌抗嘧霉胺的菌株比例分别达到77.4%和66.0%;2012年采集的206个菌株中,抗多菌灵、腐霉利、异菌脲和乙霉威的菌株比例分别达到80.6%、11.2%、64.6%和54.4%;不同地区草莓灰霉病菌对不同药剂的敏感程度不同。根据菌株对5种杀菌剂的抗、感表现,在江苏检测到17种抗性表现型;其中对腐霉利和乙霉威敏感及对多菌灵、异菌脲和嘧霉胺抗药的菌株占30.6%;对腐霉利敏感及对多菌灵、异菌脲、乙霉威和嘧霉胺抗药的菌株占21.8%;其他表现型菌株所占比例均在10.0%以下。表明,江苏草莓灰霉病菌对多菌灵、异菌脲、乙霉威和嘧霉胺均已产生抗药性,迫切需要筛选新的杀菌剂防治草莓灰霉病。     

北京地区不同寄主蔬菜菌核病菌抗药性比较

为明确北京地区不同科蔬菜菌核病菌对4种常用杀菌剂(多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲)抗药性现状,2011—2012年在北京郊区县蔬菜种植地区分别采集184个不同蔬菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)菌株,采用最小浓度抑制法测定184个不同蔬菜菌核病菌对4种杀菌剂的抗药性。检测结果表明:供试的184个菌株中,对多菌灵、乙霉威、腐霉利和异菌脲抗药性菌株比例分别达到90.22%、100.00%、37.50%和50.00%;不同科蔬菜的菌核病菌对不同药剂的敏感程度不同。根据菌株对4种杀菌剂的抗药性与敏感性表现分为8种抗性表现型;其中对多菌灵、乙霉威和异菌脲抗药三重抗药性菌株所占比例为33.86%,对多菌灵与乙霉威抗药二重抗药性所占比率为27.51%;4重抗药性菌株所占比例为15.87%;对多菌灵、乙霉威和腐霉利抗药三重抗药性菌株所占的比例为12.17%,其他表现型菌株所占比例均在10.0%以下。结果表明,北京地区蔬菜菌核病菌对供试的4种杀菌剂均已产生抗药性,迫切需要选择新型的杀菌剂或生防制剂防治。     

番茄灰霉菌的多重抗药性研究

从山东3个用药情况不同的保护地番茄上，采集番茄灰霉菌进行了番茄灰霉菌（B.cinerea）对3种不同类型杀菌剂的抗性监测，在用药历史长、水平高的寿光丰城，灰霉病对多菌灵、腐霉利、乙霉威产生多重抗性的菌株出现频率为53．7％，对多菌灵、速克灵产生双抗的菌株出现频率为100％；在泰安良庄，上述菌株出现的频率分别为6．8％和72．7％；在新建棚区新泰龙廷均为敏感菌株。所有的多菌灵抗性菌株均属高抗菌株（EC50＞100mg/L），速克灵抗性菌株均属低抗菌株（1mg/L＜EC50＜10mg/L），乙霉威抗性菌株均属低抗菌株（O．9mg/L＜EC50＜4mg/L）。在无药PDA培养基上连续培养8代后，对多菌灵、腐霉利、乙霉威的抗性程度并未降低。分别在PDA培养基和黄瓜子叶上进行了高体适合度和致病力的测定。     

黄瓜灰霉病菌对多菌灵、速克灵及乙霉威的抗性检测

为了明确山西省晋中地区黄瓜灰霉病菌对多菌灵、乙霉威及速克灵的抗性水平,运用组织分离法从太谷、祁县和平遥的罹病黄瓜上分离到30个灰霉病菌菌株(Botrytis cinerea Pers.),并用最低抑制浓度法(MIC)和菌落直径生长法分别测定了这30个菌株的抗性频率和抗性水平。结果表明,30个菌株对乙霉威、多菌灵和速克灵的抗性频率分别为70%,80%和90%;3种杀菌剂敏感菌株的平均EC50分别为0.036 9,0.057 4,0.269 2μg/mL;3种杀菌剂抗性菌株的平均抗性倍数分别为66.0倍、421.5倍和55.3倍。表明山西晋中地区黄瓜灰霉病菌对乙霉威和速克灵的抗性达到中抗,对多菌灵的抗性为高抗。建议在该地区生产中停止使用多菌灵,减少使用乙霉威和速克灵或与其他药剂混合使用。     

杭州地区草莓炭疽病病原鉴定及其对多菌灵和乙霉威的抗药性

草莓炭疽病是草莓育苗期和移栽后为害最严重的病害之一.对来自杭州市建德和下沙草莓基地的63个菌株进行培养性状、形态学和种特异性引物PCR鉴定,表明所有的菌株均属于胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc.).离体条件下评价了这些菌株对多菌灵和乙霉威的抗性,发现对多菌灵高抗菌株的比例达92.1%,对乙霉威高抗菌株比例高达93.7%,而同时抗这2种药剂菌株的比例高达87.3%.因此,建议杭州地区不应再使用多菌灵或甲基托布津等苯并咪唑类杀菌剂,或这类杀菌剂和乙霉威的混剂防治草莓炭疽病,以免影响防效.     

灰霉病菌对多菌灵和乙霉威抗性研究

从１９９６年３～４月辽宁省主要蔬菜种植区采集的番茄、黄瓜灰霉病果上,分离得到２８２个灰葡萄孢霉（ＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａＰｅｒｓ．）菌株,测定了其对多菌灵和乙霉威的敏感性。结果表明,８７．２％的菌株为抗性菌株（ＢｅｎＲ）,１２．８％的菌株为敏感菌株（ＢｅｎＳ）。中抗（ＢｅｎＩＲ）和低抗（ＢｅｎＷＲ）菌株为优势菌株。抗性菌株与敏感菌株在生长速率、产孢能力及致病力等方面无明显差异。作为苯并咪唑杀菌剂负交互抗性药剂而开发的Ｎ－苯基氨基甲酸酯杀菌剂乙霉威,对ＢｅｎＨＲ菌株具有优良的抑制作用,但对ＢｅｎＷＲ,ＢｅｎＩＲ和ＢｅｎＳ菌株的抑制作用很小。由多菌灵和乙霉威复配而成的多菌灵可有效控制ＢｅｎＨＲ和ＢｅｎＳ菌株对黄瓜子叶的侵染,但不能控制ＢｅｎＷＲ和ＢｅｎＩＲ菌株的侵染。     

核盘菌对几种杀菌剂的敏感性研究

为了选择防治菌核病的有效药剂,采用FAO推荐的菌落直径法研究了常用杀菌剂对核盘菌敏感性的差异。结果表明:山西五寨菌株WZ2对腐霉利、多菌灵、菌核净、福美双、乙霉威、乙烯菌核利高度敏感(EC50在0.117 0~4.965 4μg.mL-1之间);对异菌脲中度敏感(EC50为5.069 0μg.mL-1);对代森锰锌和百菌清最不敏感(EC50为20.760 0,32.107 6μg.mL-1)。内蒙古菌株NM15和NM17均对腐霉利、多菌灵、菌核净、福美双、乙烯菌核利高度敏感(EC50在0.064 0~3.059 0μg.mL-1);对乙霉威、异菌脲中度敏感(EC50为7.330 7~13.823 4μg.mL-1之间);对代森锰锌最不敏感(EC50分别为37.645 3,42.303 0μg.mL-1)。另外,菌株NM15对百菌清高度敏感(EC50为2.104 8μg.mL-1),而NM17则对百菌清中度敏感(EC50为11.777 9μg.mL-1)。并且这三个菌株对腐霉利、百菌清的敏感性差异较大,而对其他药剂的敏感性差异不大。     

辣椒疫霉可溶性蛋白和酯酶同工酶电泳分析

采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(SDS-PAGE)和PAGE电泳技术分别对安徽不同地区的46个辣椒疫霉进行可溶性蛋白和酯酶同工酶分析,从蛋白质和酶学水平上分析辣椒疫霉的生理生化特征。可溶性蛋白电泳表明,每个辣椒疫霉分离出了25~37条谱带,平均31.5条。其中具有多态性的条带共有24条,多态性比率达64.9%,可溶性蛋白图谱与地理来源相关,但与致病力不相关。酯酶同工酶PAGE电泳显示辣椒疫霉菌株各有1~8条条带,Rf值为0.05~1.00,不同辣椒疫霉菌株间某些同工酶谱带数和同一迁移率谱带的颜色和宽度差异显著,其中弱致病力菌株的条带数为1~3条,说明菌株的致病力差异可在酯酶同工酶水平上得到反映。     

棉花枯萎病菌同工酶电泳的研究

对棉花枯萎病菌的3、8和7号3个生理小种的标准菌株和新疆所采31个供试菌株采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了酯酶同工酶谱、过氧化物同工酶谱和可溶性蛋白质谱分析.结果表明,各生理小种间的谱带存在明显差异,过氧化物同工酶出现的谱带数较少,酯酶同工酶谱和可溶性蛋白质谱谱带数较多,同为7号小种的不同菌株间其谱带虽表现出多型性,但其谱带一致性较高.据此可以看出,同工酶谱和可溶性蛋白质谱对棉花枯萎病菌生理小种的鉴定具有重要的参考价值,其中以酯酶同工酶谱和可溶性蛋白质谱分析为好.     

禾谷镰刀菌的酯酶和酸性磷酸酯酶同功酶电泳分析

对来自不同小麦栽培区的38个禾谷镰刀菌菌株进行了酯酶、酸性磷酸酯酶的电泳分析，结果表明，禾谷镰刀菌具有3条标墀性酯酶带，根据其变化特点，供试菌株的酯酶同功酶谱可划分为5种类型，其中类型1为主体型，占总测菌株数的76.3%；其它类型为少数型，分别占总测菌株数的10.5%，2.6%，5.2%；类型5为新出现的谱型，禾谷镰刀菌具有2条标志性酸性磷酸酯酶酶带，以其出现与否划分为供试禾谷镰刀菌菌株为2种酶谱类型，分别占供试菌株总数的36.8%与63.2%。     

球壳孢目真菌同工酶电泳研究——Ⅰ.分类学意义的评价

对球壳孢目5属10种17个菌株进行了菌体可溶性蛋白、酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，不同培养时间样品的电泳图谱显示菌体培养时间的长短对实验结果有一定的影响，球壳孢目真菌以培养5－10d为宜;不同种的菌株的图谱差异显，而种内不同菌株间的谱带一致性较高，表明可溶性蛋白和同工酶电泳图谱对球壳孢目真菌种级水平的分类具有重要作用，尤以酯酶同工酶酶谱为好。     

抗戊唑醇草莓枯萎病菌ZY-W的诱导及其生物学特性

【目的】诱导获得草莓枯萎病菌对戊唑醇的抗性菌株,并比较敏、抗菌株在生物学特性方面的差异。【方法】在含戊唑醇PDA平板培养基上,对草莓枯萎病菌进行逐代处理,以诱导其抗性菌株;利用菌落直径测定法测定抗性菌株对其它一些杀菌剂的交互抗性,及其与敏感菌株之间生物学特性差异。【结果】敏感菌株选育至36代,对戊唑醇的抗性达34.22倍,抗性能够稳定遗传;抗戊唑醇菌株对三唑酮等7种药剂表现出了不同程度的交互抗性;抗性菌株与敏感菌株的适宜生长温度均为25℃,适宜pH值为9;敏、抗菌株在不同碳、氮源中,菌丝生长与产孢趋势有所不同。【结论】草莓枯萎病菌在环境中容易形成戊唑醇抗性群体,抗性风险较高,生产中需引起注意。     

取食不同寄主棉蚜的羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶特性比较

以棉花、木槿和南瓜3种寄主作物隔离饲养不同抗性程度的棉蚜（171B、RR1和RR2），取食不同寄主后棉蚜羧酸酯酶的米氏常数（Km)值无显差异，而各品系之间酶的最大反应速度（Vmax)差异显。与取食棉花的棉蚜各品系相比，取食木槿的各品系乙酰胆碱酯酶对甲胺磷的敏感性均有所下降；取食南瓜的各品系以其抗性不同有所差异，抗性最高的RR2品系的敏感性上升，而RR1品系的敏感性有所下降，171B品系的敏感性无显性变化。在不同处理之间，棉蚜AChE的酶学特性（Km值和Vmax)也发生不同程度的改变，中对可能导致这种变化的原因进行了讨论分析。     

四种不同植物病原真菌与多菌灵抗药性相关基因突变的比较

克隆了小麦赤霉病菌（Fusarium graminearum）、油菜菌核病菌（Scherotinia sclerotiorum）、辣椒炭疽病菌（Cal-letotrichum gloeosporiodies）和番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）4种病原菌的9个菌株的β－微管蛋白基因、进而与典型模式菌粗糙麦孢霉（Neurospora crassa）进行序列比较，结果表明，4种病原真菌β－微管蛋白序列与粗糙表孢霉具高度同源性；油菜菌核病菌、辣椒炭疽病菌和番茄灰霉病菌的β－微管蛋白198位氨基酸由Glu突变为Ala，是导致上述病原菌产生对多菌灵（MBC）抗药性的主要原因；突变位点和突变类型与其他抗多菌灵真菌一致，且与乙霉威（NPC）之间存在明显负交互抗性。但小麦赤霉病MBC^S和MBC^R菌株的β－微管蛋白序列完全一样，且与NPC之间不存在负交互抗性，有关小麦赤霉病菌产生抗药性的机制有待于进一步的研究。