用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒，减蛋综合症病毒等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７Ｃ孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗，进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＴＢＤＶ、ＩＬＴ     

单抗介导的间接荧光抗体技术快速诊断鸡传染性支气管炎的研究

用筛选的一株反应谱较广的抗传染性支气管炎病毒单克隆抗体ＭＣ做一抗，建立了间接荧光抗体技术论断鸡杂性支气管炎的方法。采病鸡肺和肾做压印片按常规方法进行间接荧光法染色、镜检、阳性者可见肺或肾细胞呈黄绿色荧光，阴性者则无染色反应。     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒

鸡传染性支气管炎病毒具有高度的传染性，能给雏鸡和防护较差的鸡群造成很高的死亡率。     

单抗免疫过氧化物酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒

以抗鸡传染性支气管病毒（ＩＢＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）的单抗株６ＤＨ８作为一抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠ＩｇＧ作为二抗,建立了检测石蜡切片中ＩＢＶ抗原的单抗免疫过氧化物酶技术（Ｍｃ－ＩＰ）,并对人工攻毒鸡及临床ＩＢＶ感染疑似鸡进行了检测。在ＩＢＶＭ４１株人工攻毒鸡,用该技术于１～１２ｄ从气管、２～７ｄ从肾脏可以检测到ＩＢＶ抗原,阳性染色集中于气管粘膜上皮细胞及肾小管上皮细胞胞浆;临床疑为ＩＢＶ感染的病鸡,以Ｍｃ－ＩＰ技术和单抗免疫荧光试验（Ｍｃ－ＩＦＡ）同时进行检测,结果阳性率分别为９０．３％及８３．９％。     

直接荧光抗体技术检测鸡肾型传染性支气管炎病毒

以纯化的鸡传染怀支敢管炎病毒肾型Ｔ株，反复免疫；家兔收获高免备清、ＤＥＡＥ－纤维柱层析纯化后，用ＦＩＴＣ直接标启蒙为光抗体效价Ｆ／Ｐ克分子１．４１，标佳工作浓度为１：２５。经未标记抗体阻断试验，相关病毒交叉试验及已知鸡肾型Ｔ株病毒检测试验，证明荧光标记抗体用于病毒检测效果良好。经对健康鸡庆及传染性支 管炎病鸡组织触片直接荧光标记抗体检测病毒证明，，病气管炎病鸡组织触片直接荧光标记抗体检测病毒证明，     

单抗介导的银加强金标免疫技术检测传染性支气管炎病毒

利用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG,建立了一种银加强金标免疫技术(SECGA)检测IB抗原.检测抗原时先将抗原点样于硝酸纤维素膜(NCM)中央,封闭后浸于1:40 IBV单抗中作用10 min,洗涤后再浸于1:4金标羊抗鼠IgG液中作用1 h,银染10 min后观察,在膜上出现灰黑斑点的为阳性结果,反之,不出现斑点为阴性结果.SECGA对IB抗原最低检测量为0.703 ng/点(2 μL),对含毒尿囊液的最低检测量为102.9 EID50,检测IBV M41在鸡胚中繁殖时以36～54 h含毒量最高;检测SPF鸡气管粘液,至少于感染后3 d内检出病毒.结果表明,SECGA检测抗原可用于IBV早期诊断,具有群特异性、快速、敏感、简便,不需特殊设备、结果易判定等优点,尤适于基层实验室或现场应用.     

单抗夹心ELISA法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

利用常规法建立分泌抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的单抗细胞株，选其中特异性强、稳定性好、分泌抗体效价高的两株单抗２（１）和２（４），用于建立单抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＢＶ，该方法仅与ＩＢＶ，呈阳性反应，而与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊炎病毒、禽腺病毒、鸡传染性喉气管炎、鸡支原体等病原体均呈阴性反应。１４日龄ＳＰＦ鸡接种ＩＢＶ后，用本方法对其两周内的口腔棉拭样品进行跟踪检测，结果检出率为８０％。将     

间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗体

间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗体江国托，徐宝春，王永坤（扬州大学农学院２２５００１）目前，鸡传染性支气管炎（ＩＢ）已成为国内养鸡业的主要疾病之一，虽然已建立的检测ＩＢＶ及其抗体的方法很多，如琼脂扩散试验、细胞中和试验、ＥＬＩＳＡ、血凝和血凝抑...     

鸡传染性喉气管炎病毒的荧光抗体检测

建立了一种鸡传染性喉气管炎(ILT)的荧光抗体检测技术，用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体，对15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和10份健康鸡的气管分泌物进行了检测，并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示，人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达100％，ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为0；该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高。     

用电镜技术检出鸡传染性支气管炎病毒

鸡传染性支气管炎病毒（IBV）属于冠状病毒科冠状病毒属的代表成员[1]。该病毒能引起码急性高度接触性传染病。此病早在1930年发现在美国北部的达科他训（Dakota），1936年Beach和Schaik证实由病毒引起，1937年Bearudette和Hudson首次在鸡胚上复制成功，1941年分离到马萨诸塞（     

原位杂交检测鸡传染性支气管炎病毒

本文以鸡传染性支气管病毒 Ｈｏｌｔｅ 株 Ｓ１ 基因为基本材料制备 Ｄｉｇ 标记的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,首次以原位杂交技术检测了肾病型传染性支气管炎病毒感染鸡体内的 Ｉ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 分布情况。结果表明,病毒感染后第３～７ 天, Ｉ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 主要分布于肾脏,且主要位于肾小管上皮细胞核内, Ｉ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 在其它器官中分布甚少。 Ｉ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 的分布数量与所在器官的组织病变有一定关系。     

应用进口鸡传染性支气管炎ELISA试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体

鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒引起鸡的一种急性高度接触性的呼吸道传染病,是严重危害我国乃至世界养鸡业的重要疾病之一。已有多种血清学方法可用于IB抗体检测,我国目前常用的方法有琼脂扩散试验(AGP)、血清中和试验(SN)、间接血凝试验(IHA)等。国内很多学者先后建立了ELISA方法检测IB抗体均取得理想结果,但仅限于实验室检测,在基层推广应用还有一定困难。     

鸡传染性支气管炎血清抗体的检测

鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科的禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起的急性、高度接触性传染病.在我国,邝荣禄于1972年首次报道在广东省发生鸡的IB,随后国内大部分省份都有本病发生的报道.     

鸡传染性支气管炎血清抗体的检测

鸡传染性支气管炎（IB）是由冠状病毒科的禽传染性支气管炎病毒（IBV）引起的急性、高度接触性传染病。在我国，邝荣禄于1972年首次报道在广东省发生鸡的IB，随后国内大部分省份都有本病发生的报道。目前流行的IB主要有吸型、肾型、肠型、腺胃型等几种类型，其特征为病鸡咳嗽、喷嚏和气管发生啰音，在雏鸡还可出现流涕，产蛋鸡产蛋减少和质量变劣，有的剖检可见肾肿大，有尿酸盐沉积。鸡传染性支气管炎可使各种年龄、     

鸡传染性支气管炎间接ELISA方法的研究——Ⅱ.应用 ELISA 检测鸡传染性支气管炎病毒抗体

应用 ELISA、SN 和 AGP 试验对人工感染鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗体消长规律的比较测定表明,ELISA 比 SN、AGP 敏感。应用 ELISA 对 SPF 鸡群和普通鸡群检测,并与 SN、AGP 试验比较,取得了满意的结果.在 ELISA 中,观察到二种不同血清型 IBV 的毒株之间存在着较为明显的交叉反应,证明 ELISA 试验具有较强的群特异性。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.     

鸡传染性支气管炎病毒的快速检测

本试验建立了一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒的通用性PCR方法。通过对纯化后IBV核蛋白基因进行的直接PCR及套式PCR扩增表明，两次PCR产物的大小为0.7kb和0.5kb，与实际设计相符。而对照的NDV主IBDV的PCR扩增产物均为阴性。用IBV HB（华北）株感染SPF鸡后，应用我们所建立的PCR方法去检测不同时期所采集的肾脏、气管、盲肠扁桃体、肺脏和肝脏中的IBV，在SPF鸡感染IBV后的21天仍然能够检测到IBV的基因组，Southern blot杂交试验证明了我们获得的PCR产物为IBV的核蛋白基因。对30份自然感染病料的检测表明，本实验所建立的PCR方法检测阳性数为15份，阳性率为50％（15／30）；鸡胚接种检测的阳性数为17份，阳性率为56．7％（17／30）；IFA检测的阳性数11 ，阳性率为36．7％（11／30）。PVR检测法与鸡胚接种方法的阳性符合率为93．3％（14／15），统计学分析表明，P＞0．05，差异不显著，而PCR检测法与IFA的阳性符合率为60％（9／15）。结果证明本实验所建立的PCR检测方法具有敏感、特异、快速等特点，适用于不同来源及不同血清型IBV的检测。     

应用间接荧光抗体染色法监测鸡传染性支气管炎抗体的研究

本文对间接荧光抗体染色法监测鸡传性支气管炎抗体进行了研究。试验结果表明感染鸡性染性支气管炎病毒的鸡成纤维细胞（ＣＥＦ）不适宜做ＩＦＡ方法的抗原，而感染ＩＢＶ后３６－４８小量的鸡胚肾细胞制做ＩＦＡ抗原效果很好。应用１０％犊牛血清封闭并适当改进洗涤条件要非特异性荧光。本试验将所建立的ＩＦＡ方法与美国ＫＰＬ生产的ＩＢＶ－ＥＬＩＳＡ进行了比较。应用ＩＦＡ方法第七天查出血清抗体。通过对十二个鸡群进行流行病调