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利用MT选择性培养基从来自日本的菜豆种子样品上分离到1株细菌分离物(编号1160),对该分离物进行培养性状观察、特异引物PCR检测、多位点序列分析、烟草过敏性反应和致病性测试。结果表明:该分离物菌落在MT上呈白色、略扁平、无水解圈,经菜豆晕疫病菌(Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola,Psp)特异引物PHA19/PHA95及P5.1/P3.1扩增,获到437 bp及500 bp目的条带,并与Psp菌株LMG2245及GenBank中Psp(基因登录号:AB237164、CP000058)的序列相似性均为100%。选择gap1、gltA、gyrB、rpoD 4个看家基因进行多位点序列分析(MLSA),系统发育树显示分离物1160与Psp菌株LMG2245、1448A聚在同一分支。该分离物人工接种菜豆叶片能引起典型的黄色晕疫病害症状,接种菜豆荚果引起水渍及褐变病害症状;接种烟草叶片可产生过敏性反应。根据上述试验结果,将分离物1160鉴定为菜豆晕疫病菌。这也是全国首次从进境商品中截获菜豆晕疫病菌。 相似文献
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利用双抗夹心 酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)和反转录 聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对来自韩国的番茄种子进行种传病毒检测。结果表明,在该批番茄种子中检测到番茄花叶病毒(ToMV)和烟草花叶病毒(TMV)。PCR产物测序结果表明,ToMV特异引物(ToA/ToB)与TMV特异引物(TA/TB)扩增的片段均为ToMV的外壳蛋白(CP)基因及3′非编码区(3′ UTR),该片段与其他ToMV分离物的核苷酸序列相似性为98.2%~99.9%。本研究利用重新设计合成TMV和ToMV特异引物对该批种子进行RT PCR检测,仅ToMV特异性引物(ToMf1/ToMr1)扩增到670 bp的预期片段,TMV特异引物(TMf1/TMr1)则未出现特异性扩增,表明重新设计的引物可准确区分ToMV和TMV。以上结果证实该批番茄种子仅携带ToMV。 相似文献
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为研究国家作物种质库中保存菜豆种质携带种传菜豆普通花叶病毒(BCMV)的状况,根据BCMV的印基因序列设计一对特异性引物,从BCMV侵染的菜豆叶片上扩增出与理论大小一致的714bp的片段。在此基础上,应用改进CTAB法从菜豆干种子中提取总RNA并特异性扩增出相同大小的片段。对目的片段进行克隆、测序和序列同源性比较,结果表明,扩增片段的序列与其它BcMV的印基因序列同源性达88%-98%,确证该方法可以从莱豆干种子申直接检测BCMV。利用建立的方法,分别从单粒菜豆种子样本和30粒菜豆种子样本中检测到BCMV,其检测灵敏度较ELISA方法更高。来自河北的紫芸豆单粒种子带毒率高达100%,而在不同地理来源的6份菜豆种质中,4份被检出携带BCMV,表明入库保存的菜豆种质和种子已普遍为BCMV所侵染。 相似文献
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对经甘肃口岸进境的30批菜豆Phaseolus vulgaris种子进行了普通细菌性疫病菌的检测,利用选择性培养基MT从波兰进境菜豆种子上分离到1株细菌597,对该分离物进行菌落形态特征观察、致病性测定、16S rDNA及16S-23S rDNA ITS序列分析和特异性PCR检测。结果表明,该分离物在MT培养基上菌落呈黄色、圆形、黏稠、表面光滑向外隆起、菌落周围有水解圈。分离物597接种菜豆幼苗后导致叶片枯萎,接种点干枯。结合菌落形态、16S-23S rDNA ITS序列、特异性PCR检测结果,将分离物597鉴定为地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种Xanthomonas axonopodis pv.phaseoli。 相似文献
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从进境的美国高粱样品中分离到一株与葡萄茎枯病菌Didymella glomerata相似的菌株4358-17。其菌落形态和显微特征均与葡萄茎枯病菌一致。多个位点(LSU、ITS、TUB2、ACT)序列比对显示菌株4358-17与GenBank登录号为KT389718、FJ427004、FJ427115、FJ426896的葡萄茎枯病菌相似性均达到100%。系统发育分析结果表明菌株4358-17与葡萄茎枯病菌株聚集在同一个分支上,支持率为99%。菌株4358-17接种高粱和小麦叶片,4d后接种部位出现明显症状。根据上述试验结果,将进境美国高粱样品中分离的菌株4358-17鉴定为葡萄茎枯病菌。 相似文献
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根据南方菜豆花叶病毒(SBMV)两株系B和C的核酸序列设计两对引物,利用RT-PCR可以特异地区分纯化的和0.2g病叶中的两株系,RT-PCR检测SBMV-B的灵敏度为10pg。 相似文献
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南方菜豆花叶病毒酶联试剂盒的测评 总被引:1,自引:0,他引:1
南方菜豆花叶病毒酶联检测试剂盒,采用直接双抗体夹心法。主要由已包被特异性的酶联板、碱性/磷酸酯酶标记的抗体、对硝基苯磷酸盐底物以及浓缩清洗液等几部分组成。该试剂盒的检测灵敏度可达8ng/ml提纯病毒。检测大豆病叶可达1:1000。检测大豆病种子可达1:100,与黄瓜花叶病毒,马铃薯Y病毒,烟草环斑病毒,烟草花叶病毒呈阴性反应,同时选用大柬告示5和阴性对组,OD值读数均较低,背景反应好,未出现假阳性 相似文献
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本研究针对南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)保守序列设计了特异性PRA引物,建立了快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增检测技术(RT-RPA),采用SBMV,BPMV,SMV,Ar MV和TRSV共5种病毒评价该方法的特异性,并对其灵敏度进行评价。结果显示,建立的RT-RPA方法特异性强;灵敏度达到0.1 ng。本研究建立的RT-RPA方法检测SBMV特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室或者现场快速检测。 相似文献
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南方菜豆花叶病毒(Southem bean mosaic virus,SBMV)是我国二类检疫性有害生物,以南方菜豆花叶病毒日本分离物(SBMV-J)总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增病毒外壳蛋白基因及其上游基因的cDNA片断并将其克隆到pMD18.T载体上。序列分析结果表明:SBMV-J cp基因由801个核苷酸组成,编码266个氨基酸,SBMV.J与其它分离物及株系印基因的核苷酸序列同源性为83%-97%,氨基酸序列同源性为86%-97%。由于SBMV各分离物及株系印基因的同源性较低,难于设计出较长的普通PCR引物。通过较短引物设计和TaqMan-MGB探针技术,建立了SBMV的实时荧光RT-PCR一步检测方法。该方法的检测低限是0.16pg,最佳检测总RNA的量是0.16ng。 相似文献
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南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)是我国二类检疫性有害生物,以南方菜豆花叶病毒日本分离物(SBMV-J)总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增病毒外壳蛋白基因及其上游基因的cDNA片断并将其克隆到pMD18-T载体上。序列分析结果表明:SBMV-J cp基因由801个核苷酸组成,编码266个氨基酸,SBMV-J与其它分离物及株系cp基因的核苷酸序列同源性为83%~97%,氨基酸序列同源性为86%~97%。由于SBMV各分离物及株系cp基因的同源性较低,难于设计出较长的普通PCR引物。通过较短引物设计和TaqMan-MGB探针技术,建立了SBMV的实时荧光RT-PCR一步检测方法。该方法的检测低限是0.16 pg,最佳检测总RNA的量是0.16 ng。 相似文献
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为建立南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,SBMV)的快速、简便、高通量检测技术,加强该病毒的口岸检验检疫,以提纯的SBMV粒子为免疫原免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤技术获得3株杂交瘤细胞株19C3、19H9和20G4,其分泌的SBMV腹水单抗效价均达到10-7,且3个单抗与感染SBMV大豆叶片组织粗提液有强烈的特异性免疫反应,而不与感染南方豇豆花叶病毒(southern cowpea mosaic virus,SCPMV)的豇豆、健康的大豆、毛豆、豌豆、蚕豆和菜豆叶片组织粗提液发生免疫反应。以制备的单抗为核心,建立了检测植物中SBMV的ACP-ELISA和dotELISA两种血清学方法。3个单抗中19H9单抗的检测灵敏度最高,以其建立的ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测大豆病叶粗提液的灵敏度分别达到1∶163 840和1∶10 240稀释浓度。利用建立的dot-ELISA方法可从上海口岸截获的大豆种子中检测出SBMV,且该检测结果得到RT-PCR方法验证。表明制备的SBMV单抗及建立的SBMV血清学检测技术可有效用于我国SBMV的口岸检验检疫。 相似文献
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从进口日本豇豆中随机挑选种子在隔离温室内种植。出苗后,发现有典型花叶症状的植株。对该病株进行电镜观测,发现有线条形病毒粒体,大小约为750nm×13nm。设计特异性引物(BL-5/BL-6),对该样品进行黑眼豇豆花叶病毒的反转录(RT)PCR分子检测。电泳检测表明,扩增出一条特异性的目标条带,大小为338bp。对该样品的RT-PCR产物进行测序,结果表明该序列与黑眼豇豆花叶病毒(GENEBANK登录号:AY575773)的序列有4个碱基差异,同源性为98.8%。鉴定该病毒为黑眼豇豆花叶病毒(Blackeye cowpea mosaicvirus)。 相似文献