滇重楼稻曲拟盘多毛孢叶斑病病原鉴定及其生物学特性测定

为明确滇重楼Paris polyphylla var. yunnanensis (Franch) Hand.-Mazz一种新的叶斑病病原菌, 以云南省丽江市玉龙纳西族自治县中药材种植基地内发现的一种新真菌性病害为供试研究材料, 经单孢分离培养?形态特征观察?致病性测定?多基因系统发育分析(ITS?tub2?tef1)和生物学特性测定, 对病原物进行分类鉴定?研究结果表明, 病原物CL107形态符合Pestalotiopsis sp.种属典型特征; 菌株CL107-ITS(accession no. MK156295)?CL107-BT(accession no. MN015425)?CL107-EF1(accession no. MN022941)与参比标准菌株P.oryzae CBS 353.69同源性分别为100.00%?100.00%?98.92%, 可将稻曲拟盘多毛孢P.oryzae确定为滇重楼叶斑病病原物?生物学特性研究表明, PDA培养基?pH 8.0?28℃?全黑暗条件有利于菌株CL107菌丝生长和分生孢子形成, 以葡萄糖为碳源有利于纯化菌株菌丝生长和产孢; 以酵母提取物为氮源有利于纯化菌株菌丝生长, 以牛肉膏为氮源有利于纯化菌株产孢?本研究首次报道稻曲拟盘多毛孢P. oryzae可侵染滇重楼植株, 引起真菌性叶斑病, 明确影响病害发生的环境因子, 为该叶斑病的诊断与防治提供科学依据和理论指导?     

枯斑拟盘多毛孢菌的生物学特性研究

 实验表明引起松赤枯病的桔斑盘多毛孢菌(Pestalotiopsis funerea (Desm.) Stey)菌丝生长的适宜温度为19℃-25℃,最适温度斑22℃。在PDA、CDA加酵母粉及麦芽膏琼胶培养基上生长发育良好。孢子萌发最适温度为22℃,相对湿度低于85%时不萌发。孢子萌发率在自来水中为17%,在寄主表面为8%,在麦芽膏营养液内为73%。95%相对湿度条件下在寄主枝条上产孢数量最多。病菌在光照下方能产生子实体,3600Å波长的光线对产孢具有促进作用。病菌对水培及盆栽的寄主枝叶具侵染作用。多菌灵、代森锌锰、抑菌灵、Prochloraz和lprodione五种药剂均对菌丝生长有抑制作用,其抑菌中量及完全抑菌最低剂量分别为:多菌灵0.0352,0.1075ppm;Prochloraz 0.0071,0.1102ppm;lprodione 3.2917,110.1827ppm;代森锌锰37.5238,98.4069ppm;抑菌灵抑菌中量为11.6580ppm。药剂对孢子萌发的抑菌中量和完全抑菌最低剂量为抑菌灵0.7877,4.4791ppm;Prochloraz2.4434,10.0511ppm;代森锌锰20.1575,120.5289ppm。     

刺葡萄棒状拟盘多毛孢叶斑病病原菌的分离鉴定及其防治药剂筛选

葡萄叶斑病是一种严重影响葡萄产量的病害。为了明确引起刺葡萄叶斑病的病原菌种类及筛选有效防治药剂,本研究从福建农林大学实践教学基地采集刺葡萄‘高山二号’10片典型叶斑病病叶片,对分离得到的菌株进行形态学和分子鉴定。结果表明,通过形态学特征结合rDNA-ITS(ITS)、β-tubulin和EF-1α序列分析确定分离到的菌株均为棒状拟盘多毛孢Pestalotiopsis clavispora。防治药剂筛选的结果显示,不同的防治药剂对炭疽病菌的抑制效果不同,60%唑醚·代森联水分散粒剂和25%嘧菌酯悬乳剂对该病原菌菌丝生长的抑制效果最好,其EC_(50)分别为0.119 mg/L和0.178 mg/L;其次为80%波尔多液可湿性粉剂,其EC_(50)为1.766 mg/L;抑制效果最差的药剂为50%多菌灵可湿性粉剂,仅表现出轻微的抑制作用。防治棒状拟盘多毛孢菌丝生长和孢子萌发的最佳药剂是60%唑醚·代森联水分散粒剂和25%嘧菌酯悬乳剂,可作为备选药剂进行田间刺葡萄叶斑病防控试验。     

河南省草莓棒孢叶斑病病原菌鉴定及其生物学特性

为明确河南省草莓棒孢叶斑病病原菌,采用组织分离法对其进行分离纯化,通过形态学和分子生物学手段对其进行鉴定,并对其致病性、寄主范围及生物学特性进行测定,同时对其前期侵染过程进行显微观察。结果表明,从草莓病叶中共分离得到5株形态特征一致的菌株,其菌落中央略隆起,呈浅灰褐色,边缘呈白色,气生菌丝绒毛状且致密;分生孢子呈圆柱形或倒棍棒形,大小为30～252μm×5～10μm,呈半透明至浅棕色,假隔膜6～17个,基脐加厚;基于ITS、EF-1α和TUB序列的系统发育分析结果显示,代表菌株ZM170455与不同寄主来源的多主棒孢霉Corynespora cassiicola聚为同一分支;该病原菌寄主范围广,除草莓外还能侵染黄瓜、辣椒和空心菜等10种经济作物,形成典型病斑。根据形态学特征和分子生物学特征将河南省草莓棒孢叶斑病病原菌鉴定为多主棒孢霉C. cassiicola。多主棒孢霉侵染前期,其分生孢子萌发产生芽管,而芽管顶端可在远离气孔的位置形成类似附着胞的结构。多主棒孢霉最适温度范围为25～30℃,最适pH为6～10,在光暗交替条件下菌丝生长最快,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为KNO_3<...     

黄脉爵床棒孢霉叶斑病病原菌及其生物学特性鉴定

 明确黄脉爵床棒孢霉叶斑病病原菌及其生物学特性,为防控提供理论依据。通过病原菌分离、形态特征观察、致病性测定、rDNA-ITS序列分析、生物学特性及寄主范围测定等研究,证明该病病原菌为山扁豆生棒孢Corynespora cassiicola;菌丝生长及产孢适宜温度20℃~28℃,孢子萌发适宜温度24℃~32℃,菌丝致死温度49℃处理10 min;菌丝生长适宜pH 6~10,产孢适宜pH 4~8,孢子萌发最适pH 8;光暗交替适合菌丝生长与产孢,连续光照可抑制菌丝生长;菌丝生长量由少到多培养基顺序为CA、PCA、PDA、CMA、OA,而PDA上产孢最多;刺伤接种,病菌可侵染喜树(Camptotheca acuminata)等植物。黄脉爵床棒孢霉叶斑病病原为山扁豆生棒孢C. cassiicola,病菌易产孢,寄主广,潜育期短。该病菌侵染黄脉爵床为首次报道。     

橡胶狗尾草平脐蠕孢叶斑病病原菌鉴定及生物学特性研究

为明确采自西双版纳景洪地区疑似橡胶麻点病的病原菌,采用组织分离法进行病原菌分离,活体接种法进行致病性测定,通过形态学观察结合rDNA-ITS和GAPDH两个核苷酸片段序列分析,将病原菌确定为狗尾草平脐蠕孢Bipolaris setariae。通过单因子变量试验,对病原菌进行生物学特性研究,结果表明：菌丝生长最适温度为30℃,最适pH为7～8,最适培养基为PDA,菌丝致死温度为53℃,10 min。该病原菌能有效利用多种碳源和氮源,碳源以可溶性淀粉利用率最高,最适氮源为蛋白胨。24 h黑暗条件下培养更有利于菌丝生长。分生孢子萌发的最适温度为28～35℃,最适pH为7～8,28℃黑暗培养2 h后萌发率达到最大,为95.5%,分生孢子致死温度为60℃,10 min。     

蓝莓叶斑病病原菌鉴定及其生物学特性

为明确山东省蓝莓叶斑病病原菌的种类及其生物学特性,采用组织分离法获得菌株B1,通过形态学特征并结合r DNA-ITS序列分析对该菌株B1进行鉴定,以离体和活体叶片接种法测定菌株B1的致病性,并对其生物学特性进行研究。结果表明,菌株B1菌落呈白色绒毛状,背面淡黄色,分生孢子纺锤形,5个细胞,中间3个细胞为褐色,具有2～4根顶端附属丝;菌株B1的ITS序列与GenBank中棒状拟盘多毛孢Pestalotiopsis clavispora的相似性达99%以上,结合形态特征与rDNAITS序列分析将病原菌鉴定为棒状拟盘多毛孢,GenBank登录号为MG009201。菌株B1接种蓝莓叶片后产生褐色病斑,后期密生黑色分生孢子盘,与蓝莓田间自然发病症状一致。该菌株在5～35℃、pH 5～11范围内均可生长,最适温度范围为25～30℃,最适pH范围为5～9;但仅在25～30℃时产生分生孢子,最适产孢温度为25℃;光照条件对菌丝生长无明显影响,但连续黑暗有利于产孢;以葡萄糖为碳源时利用率最高,对乳糖利用效果最差;最适氮源为硝酸钠、硫酸铵和蛋白胨,几乎不能利用尿素。     

燕麦叶斑病病原菌鉴定及其生物学特性

为明确内蒙古、河北地区燕麦叶斑病病原菌种类及其生物学特性,采用组织分离法对病原菌进行分离,通过形态学特征及18SrDNA序列分析进行分类鉴定,以离体和活体叶片接种进行致病性测定,并采用十字交叉法对病原菌的生物学特性进行研究。结果表明,共分离到3株菌株R1、H44和B8,根据形态学特征和18SrDNA序列分析将3株菌株均鉴定为燕麦内脐蠕孢菌Drechslera avenacea(M.A.Curtis ex Cooke)Shoemaker,有性态为燕麦核腔菌Pyrenophora avenae S.Ito et Kurib.。3株菌株均为致病菌,在离体和活体叶片上均能产生腐烂坏死病斑。3株菌株的菌丝在5~30℃、pH 5~11范围内均可生长,其中菌株R1和H44的最适生长温度为25℃、最适生长pH为8,菌株B8的最适生长温度为20~25℃、最适生长pH为7~8。3株菌株对碳源的利用效果中均以淀粉最好,对乳糖利用效果最差;菌株R1的最适氮源是硝酸铵,对蛋白胨和尿素利用效果最差;菌株H44和B8的最适氮源是蛋白胨,菌株H44对硫酸铵利用效果较差,3株菌株都不能利用碳酸铵,且菌株B8也不能利用尿素。     

茶轮斑病病原菌(Pseudopestalotiopsis camelliae-sinensis)生物学特性研究

采用室内培养方法对贵州省惠水县茶轮斑病病原茶假拟盘多毛孢(Pseudopestalotiopsis camelliae-sinensis)进行了病原生物特性研究。结果表明,茶假拟盘多毛孢在PDA、OA和MEA培养基上均能生长和产孢,生长速率由快到慢依次为MEA、PDA、OA,产孢能力存在差异。在PDA培养基上产孢时间最早,且产孢最多。同时,菌株在PDB培养基中生长,其菌丝干重为线性增长,生长期为36~120 h。碳素营养和氮素营养均影响菌丝的生长及色素形成,28℃是菌株适宜生长温度,菌株在pH 5~8能较好地生长,最适pH为6左右,其生长速率和菌丝丰度最大。     

烟草叶斑病病原菌的鉴定及其生物学特性

为明确贵州省新发现的烟草叶斑病病原菌种类和生物学特性,2019年自田间采集具有典型发病症状的烟叶,采用组织分离法对其进行分离纯化,对分离菌株进行致病性测定,观察病原菌形态学特征,基于ITS、LSU、tub2和rpb2基因序列进行分子生物学鉴定,同时对病原菌的生物学特性进行测定。结果显示,烟草叶斑病病斑呈圆形或椭圆形,病斑中间呈浅褐色,边缘呈棕色,周围环绕黄色晕圈。经分离纯化共获得3株病原菌,形成的菌落为深褐色,气生菌丝呈白色;分子孢子器呈球形或扁球形,为深褐色,大小为79.3～91.7μm×148.4～167.3μm;分生孢子呈椭圆形,光滑,无隔膜,具0～3个油球,大小为3.5～5.6μm×1.7～2.9μm。根据形态学特征和分子生物学特征将其鉴定为Didymella segeticola。该病原菌菌丝生长适宜温度为20～25℃;适宜pH为6～10,最适碳源为乳糖,最适氮源为蛋白胨,通气和光暗交替环境有利于其生长。     

进口美国苹果上拟盘多毛孢菌的鉴定

从进口的美国华盛顿州红帅(reddelicious)苹果中分离到一种引起苹果果实腐烂的病原真菌,根据该真菌的菌落及分生孢子的形态特征,以及该真菌DNA的ITS序列,将其鉴定为拟盘多毛孢菌(Pestaloti-opsissp.)。该真菌菌丝生长和孢子萌发的最适温度是25℃。分生孢子长梭形直立或稍弯曲,15·6~22·2(18·8)μm×4·8~7·1(5·7)μm,5个细胞,4个隔膜均为真隔膜,中间3个细胞暗褐色,两端细胞淡色,3个有色细胞中第1、2个有色细胞颜色较深,茶褐色;第3个有色细胞淡褐色;分隔处稍缢缩;孢子顶端有2~3根不分支的附属丝,长7·0~19·5(11·9)μm,基细胞具短柄,长0·4~3·2(1·4)μm。分生孢子梗较长,呈淡色,不分支,无隔膜。用ITS区通用引物PM1/PM4对该真菌DNA进行PCR扩增和测序,获得了525bp的ITS区序列。     

番茄棒孢叶斑病病原鉴定及生物学特性研究

本研究采用PSA培养基对上海地区的番茄棒孢叶斑病的病原菌进行分离、培养及致病性测定,通过形态学和分子生物学方法鉴定病原菌,并对该病菌的生物学特性进行研究。结果表明:番茄棒孢叶斑病病原菌菌落呈灰褐色,菌丝质地致密、绒毛状;分生孢子单生或串生,圆柱形或倒棍棒形、顶端钝圆,基部平截,呈半透明至浅褐色,假隔膜4～10个,直或稍弯曲,基脐加厚,深褐色。结合病原菌rDNA ITS序列测定、比对后,确定该病原为多主棒孢Corynespora cassiicola。该病菌的菌丝生长最适温度为25～30℃,最适pH范围为4～8,产孢的最适温度约为25℃,最适pH范围为5～9,麦芽糖和乳糖为碳源的培养基适宜菌丝生长,可溶性淀粉和乳糖溶液中孢子萌发率最高,光暗交替条件适宜菌丝生长,孢子在水滴中极易萌发。这是该病在上海地区的首次报道。     

黑龙江水稻胡麻叶斑病病原菌的分离鉴定及生物学特性

对水稻胡麻叶斑病病原菌进行了分离和形态学观察结果表明,其分生孢子呈褐色,直立或弯曲,脐部稍突出,表面光滑,纺锤形或圆柱形,有5～10个假隔膜;分生孢子梗褐色,弯曲,部分有分枝。分子鉴定得出病原菌ITS区序列与稻平脐蠕孢有性态(Cochliobolus miyabeanus)序列相似程度达到99%。确定该病原菌为稻平脐蠕孢(Bipolaris oryzae)。其生物学特性研究结果表明,水稻胡麻叶斑病病原菌生长最适条件为光暗交替、酸碱度中性、25℃、碳氮源为可溶性淀粉和甘氨酸。     

茄子棒孢叶斑病病原菌鉴定及致病性研究

 本研究对茄子棒孢叶斑病的症状进行系统的描述,采用致病性试验、形态学观察及分子生物学的方法对茄子棒孢叶斑病的病原菌进行鉴定。致病性试验证实病原菌对茄子的致病力显著高于黄瓜。显微观察发现同一病原菌在茄子上形成的孢子以圆柱形为主,孢子体较窄;而在黄瓜上形成的孢子具有圆柱形和倒棍棒形两种形态,且较宽。对病原菌rDNA ITS区进行PCR扩增和序列测定。综合形态特征、致病力和分子序列分析结果,确定茄子棒孢叶斑病病原菌为Corynespora cassiicola。     

纳米抑菌材料的合成及对茶拟盘多毛孢的抑制活性

茶轮斑病是中国茶园的重要病害,易造成叶片脱落甚至使植株死亡,对茶叶产量和品质造成重大影响。本研究采用组织分离法获得病原菌,通过科赫氏法则验证、形态学观察和分子水平鉴定,确定了病原种类;采用共沉淀法制备了纳米氢氧化镁 [nano-Mg(OH)₂],采用溶胶-凝胶法制备了纳米二氧化硅 (nano-SiO₂) 和纳米二氧化钛 (nano-TiO₂),利用X-射线粉末衍射 (XRD) 和扫描电镜 (SEM) 对纳米材料的尺寸和外观形貌进行表征;采用菌丝生长速率法比较了3种纳米材料在质量浓度为25 mg/mL时对茶轮斑病病原菌的抑制活性。结果表明:分离所得菌株与茶拟盘多毛孢Pseudopestalotiopsis theae聚在同一分支中,自检支持率达99%,可以确定引起茶轮斑病的病原菌为茶拟盘多毛孢。所合成的nano-Mg(OH)₂、nano-SiO₂和nano-TiO₂分别呈花瓣状、球状以及聚集状的纳米颗粒,在水中的粒径分别为4342.72、1199.05和654.95 nm,且均具有一定的团聚行为。供试纳米材料对茶拟盘多毛孢的活性高低依次为nano-Mg(OH)₂ > nano-SiO₂ > nano-TiO₂,其中nano-Mg(OH)₂的抑菌效果最佳,150 mg/mL的 nano-Mg(OH)₂施用后3 d抑菌率最高,可达85.14%。研究结果可为茶轮斑病的有效防治提供新的思路和途径。     

引起中国杨梅叶片坏死病的拟盘多毛孢的鉴定

Red bayberry (Myrica rubra) possesses great economic importance in eastern and southern China; however, it is affected by many diseases. A survey of leaf diseases on M. rubra cv. Biqi was conducted at Cixi, Zhejiang Province, China. Typical symptoms observed were red to red-brown necrotic lesions on the leaf tips or margins. Four Pestalotiopsis isolates from leaf lesions and three Pestalotiopsis isolates from healthy barks were collected. These isolates were identified as P. sydowiana, P. microspora, and P. disseminata on the basis of morphological characteristics. The identification was verified by internal transcribed spacer analysis of rRNA. Isolates of P. sydowiana and P. disseminata induced leaf necrosis as observed in the field while isolates of P. microspora were not pathogenic to red bayberry cv. Biqi. These pathogens were reisolated consis-tently from inoculated plants, confirming Koch’s postulates. This is the first report of traditional and molecular methods of identification and characterization being used for Pestalotiopsis spp. on red bayberry in China.     

红花酢浆草叶斑病病原菌生物学特性研究

引起红花酢浆草叶斑病的假尾孢属真菌红花酢浆草假尾孢(Pseudocercospora oxalidis Goh&;Hsieh)适合生长的培养基有红花酢浆草叶片煎汁+葡萄糖20 g、V₈汁和Richard培养基。pH3～12适合菌落生长,最适宜pH4～6,适宜温度为20～25℃。病原菌对麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和对牛肉膏的利用好于其他碳源或氮源。分生孢子萌发的温度为20～25℃,pH4～6,分生孢子萌发的相对湿度为98%～100%,营养对孢子萌发有促进作用。     

绿豆叶斑病病原鉴定及生物学特性研究

对绿豆叶斑病菌进行形态学和分子特征鉴定,结果表明,分离物在V8培养基上菌落近圆形,菌落边缘泛紫色,分生孢子无色;用通用引物18SF和28SR扩增6个分离物的rDNA-ITS部分序列和测序,并到GenBank(登录号:KM435076)数据库进行比对,6个分离物与变灰尾孢分离物序列相似性为99%,基于形态和分子特征将绿豆叶斑病病原菌鉴定为变灰尾孢。致病性测定结果表明,6个分离物对绿豆‘中绿一号’叶片均致病且存在致病力差异。不同培养基、温度和pH对病原菌生长的影响研究表明,V8培养基最适宜该病菌生长,病菌生长的最适温度为25℃,最适pH为6。     

茶扁叶蝉 Chanohirata theae (Matsumura)的生物学特性

茶扁叶蝉Chanohirata theae(Matsumura)近年来在贵州部分茶园中偶有发生甚或暴发成灾,为了解这一害虫的生物学特性,通过室内饲养和野外调查对其形态特征、生活史、发育历期、生活习性等进行了研究。结果显示:茶扁叶蝉在贵州一年发生2代,第一代发生于4月上旬至9月下旬,第二代发生于7月中旬至翌年5月中旬;若虫共5龄,以5龄若虫在茶树中下部叶片上越冬;发育历期受温度影响明显,温度越高发育速率越快,第一代卵期(23.42d)明显长于第二代(15.73d),相反,第一代若虫历期(56.33d)明显短于第二代(218.28d);成、若虫均喜静伏于叶片正面取食,交配多于白天进行,雌成虫一般由叶片正面将卵产入叶肉组织内;成虫具较强的趋光、趋黄的特性。建议于成虫盛期悬挂黄板或开灯诱杀,于若虫1~2龄盛期施药进行防治。     

高粱链格孢叶斑病菌生物学特性研究

为明确高粱链格孢叶斑病菌Alternaria alternata的生物学特性, 本文采用生长速率法研究了不同营养及环境条件对该病菌生长的影响。试验结果表明:不同培养基上菌丝生长有明显差异, 其中马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)最适合菌丝生长和孢子产生; 不同碳、氮源条件下菌丝的生长有显著差异, 其中最适宜菌丝生长碳源为葡萄糖, 氮源是蛋白胨; 该病原菌最适宜营养生长的温度为28℃, pH为7; 菌丝的致死温度为47℃; 光照时间对高粱叶斑病菌丝的营养生长没有影响。