马铃薯黑痣病生防菌的筛选和鉴定及其生长条件的研究

从甘肃省景泰县条山农场不同连作年限的马铃薯地块中取根际土样品,分离筛选马铃薯黑痣病病原菌-立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)的拮抗菌。采用土壤平板稀释、对峙法筛选拮抗菌;结合形态特征、生理生化及16Sr DNA分子鉴定;采用单因素试验设计对G1菌株的生长条件进行初步试验。通过初筛和复筛,从108株细菌中获得1株对立枯丝核菌拮抗效果稳定、拮抗能力较强的细菌G1。采用平板对峙法测定其拮抗作用,抑菌带宽度达6mm,抑菌圈直径2.5 cm,抑菌率为66.7%。结合形态特征、生理生化及16Sr DNA分子鉴定,G1为类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.);采用单因素试验设计对G1菌株的生长条件进行初步试验。结果表明,菌株G1在4℃~45℃,p H 5~10,盐浓度0~50 g·L-1都能生长,碳源、氮源利用广泛,最适条件为:温度37℃,p H 7,蔗糖为碳源,蛋白胨为氮源,盐浓度为10 g·L-1。拮抗菌G1被鉴定为类芽孢杆菌,该菌株抑菌带较宽、抑菌效果稳定,生长条件与马铃薯生长的大田环境基本相符,具有作为一株优良生防菌的必要条件。     

烟草疫霉拮抗细菌B44R-1的筛选及其生防效果

为获得烟草疫霉Phytophthora nicotiana的优良拮抗菌,从烟草根际土壤和根系中分离对烟草疫霉具有较好拮抗作用的菌群,并从中筛选具有较强抑菌效果的拮抗菌株。通过形态学、生理生化试验、16S rDNA基因测序分析鉴定拮抗菌株种属,评价其防病效果及对烟草的促生作用。结果表明,从烟草根际土壤和根系分离得到拮抗菌群39个,并从中筛选得到拮抗效果较好的菌株B44R-1,初步鉴定其为皮特不动杆菌Acinetobater pittii。菌株B44R-1对烟草黑胫病的防效达到55.37%,对烟株根系生长发育影响明显,烟株鲜重、干重、株高、茎围、叶数和最大叶面积相比对照均有提高。本研究筛选获得对烟草黑胫病菌的拮抗菌不动杆菌,对烟草黑胫病防治效果和促生作用显著,具有较好的生防潜力。     

烟草黑胫病拮抗根际芽胞杆菌FB-16的筛选鉴定及其抑菌活性

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从健康烟草根际采集30份土壤样品,分离纯化得到347株细菌,经病原真菌定向筛选后得到1株对烟草黑胫病菌等病原真菌拮抗活性较好的细菌FB-16,其对烟草黑胫病菌的抑菌带宽为23mm。采用菌丝生长速率法、作用机制试验、温室防病试验测定FB-16的抑菌作用,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定。结果显示,菌株FB-16发酵液对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制率为95.96%;其代谢产物对烟草黑胫病菌菌丝有致畸作用;菌株FB-16为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliauefaciens(Gen-Bank登录号为JN245982);饱和度25%硫酸铵获得的抑菌物质对烟草黑胫病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达42.00 mm;FB-16活性产物处理的烟草植株在接种烟草黑胫病菌7天后的防治效果为69.96%。表明菌株FB-16在烟草黑胫病生物防治中具有潜在的利用价值。     

枯草芽孢杆菌SH7抑菌物质及其特性

应用芽孢杆菌Bacillusspp.防治病害是病害生物防治的热点,其中Bacillus subtilis因其菌体本身及其产生的抗菌物质在控制病害发生、促进植株生长等方面均有良好的表现[1-2],在植物病害生物防治中显示出了广阔的应用前景。作者从烟草根围土壤中分离到一株对烟草青枯病菌Ralstonia so-lanacearum有较强防病效果的拮抗细菌SH7菌株(经鉴定为枯草芽孢杆菌)[3],本试验对其分泌的抑菌物质进行提取,并测定其部分理化特性,为进一步纯化抗菌物质提供依据。1材料与方法1.1供试菌株SH7菌株(Bacillus subtilis)分离自烟草根围土壤;烟草青枯病菌Ralston…     

拮抗细菌B8对烟草黑胫病菌的抑制作用及其菌株鉴定

从烟草根际土壤中分离到对烟草黑胫病菌及其它植物病原菌具有抑制作用的菌株B8,平板对峙培养抑菌带内菌丝畸形、原生质凝集或外渗。其发酵原液和发酵液的无菌滤液均能抑制烟草黑胫病菌和蜡状芽孢杆菌;离体叶片接种法测定其发酵液对烟草黑胫病的防效,结果表明预防作用达100%。室内盆栽试验表明B8菌株发酵液对烟草黑胫病的预防作用可达78.1%,优于治疗作用。该菌菌体杆状,芽孢侧生、椭圆形,经形态学、生理生化性状和16S rDNA序列测定,将其鉴定为侧孢短芽孢杆菌。     

拮抗细菌Bs-208菌株鉴定及对几种植物病原菌的抑菌测定

从番茄田土壤中分离筛选获得的拮抗细菌Bs-208鉴定为枯草芽孢杆菌。采用不同方法测定了Bs-208菌株发酵液及分泌物滤液对番茄灰霉病菌、棉花黄萎病菌、棉花枯萎病菌及棉花立枯病菌的抑菌效果。结果表明，该菌株对供试植物病原菌具有很好的抑菌效果，并可在植物叶面定殖，有效排斥和干扰植物病原等杂菌在植物叶面上的定殖，达到抑菌防病效果。     

广谱生防菌对番茄枯萎病的防病效果及其机理

筛选于健康大豆植株根部的4株拮抗菌,室内平板对峙试验表明,其对番茄枯萎病病原菌Fusarium oxysporum f.sp.radicis lycopersic及其他多种病原菌有广谱抑菌能力,最佳抑菌率可达51.00%~86.81%,无菌滤液及挥发性气体亦有广谱抑菌效果。盆栽试验表明,其对番茄枯萎病有良好防控效果,发病程度降低了42.33%~51.33%,而菌株SR10和SR22处理与苯菌灵的防病效果无差异。16S r RNA种属鉴定其为多粘芽孢杆菌(SR10、SR11),油菜假单胞菌(SR21)和解淀粉芽孢杆菌(SR22)。代谢特性检测表明,4株菌均能产生蛋白酶、β-1,3葡萄糖酶、HCN、IAA、SA;不分泌几丁质酶;菌株SR10、SR11和SR22能够固氮;菌株SR21能水解产生磷酸盐;菌株SR21和SR22可以产生铁载体。抗生素合成基因检测显示3株芽孢杆菌属菌株(SR10、SR11、SR22)均具有杆菌溶素基因(bac A)和脂肽基因(srf AA),菌株SR10和SR22具有伊枯草菌素A基因(itu D),菌株SR22具有丰原素基因(fen D)和芽孢菌霉素基因(bmy B);假单胞菌属菌株SR21具有藤黄绿菌素基因(plt D)、硝吡咯菌素基因(prn D)和2,4-二乙酰藤黄酚基因(phl D)。     

菌株BM-24的分离鉴定及对香蕉枯萎病菌的抑菌活性

为了从饼肥发酵液中分离筛选出对香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cubense有良好拮抗效果的菌株,以香蕉枯萎病病原菌为指示菌进行拮抗菌分离筛选.筛选得到29株拮抗菌,其中分离自菜子饼的菌株BM-24拮抗效果最显著.利用平板对峙法测定菌株BM-24抑菌谱,根据形态特征、培养特征及生理生化特征和16S rDNA序列分析对其进行鉴定,并测定其发酵液不同处理的抑菌活性.经鉴定,此菌株为甲基营养型芽胞杆菌Bacillus methylotrophicus,该菌株对供试的12种植物病原真菌均有很强的抑制作用,尤其对香蕉枯萎病菌1号和4号小种菌丝生长抑制作用最强,抑菌率分别达到87.2％和80.4％,其发酵液对香蕉枯萎病菌具有很强抑菌效果,抑菌活性主要源于菌体竞争.     

一株烟草黑胫病高效拮抗菌的筛选、鉴定及生防潜力评价

采用稀释涂布平板法、对峙培养法和牛津杯法从烟草黑胫病土壤中分离和筛选出21株对烟草黑胫病有拮抗作用的细菌,其中,XCS007菌株拮抗作用最明显,运用微观形态学、生理生化特征及16Sr DNA基因序列鉴定其为一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。菌株XCS007菌液及其粗提物对烟草黑胫病病菌菌丝的抑制率分别是91.80%和97.11%;盆栽试验结果显示,其防治效果分别是83.18%和83.55%;大田试验结果显示,其防治效果分别达到78.64%和79.54%。     

油茶根腐病拮抗内生细菌的筛选及鉴定

为探讨防治油茶根腐病的高效拮抗菌的拮抗机制,采用研磨法从健康油茶根、茎、叶、果等组织中分离内生菌,通过平板对峙试验和抑菌谱检测试验筛选对油茶根腐病菌具有高效拮抗作用的内生菌,并进行形态观察、生理生化指标测定和16S rRNA序列分析.结果显示:从油茶中分离获得内生细菌75株,对油茶根腐病菌有拮抗作用的菌株18株,其中抑菌圈半径在5 mm以上的6株.这6株细菌的发酵液对油茶根腐病菌等6种供试病原真菌均有拮抗作用,其中菌株R6的抑菌效果最好,对各病原菌的抑菌圈半径均在10 mm以上.根据对R6的形态观察和生理生化指标测定,以及16S rRNA序列分析结果,初步鉴定其为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.     

沙葱内生菌的分离鉴定及抑菌活性

以荒漠植物沙葱为材料,分离筛选出对植物病原菌具有较强拮抗活性的内生菌,可为生防菌剂的开发提供材料。采用多种培养基通过稀释涂布法从沙葱根、茎、叶不同组织中分离出内生菌,进行形态学观察、分子生物学鉴定和抑菌活性研究。分离出的9株内生细菌均为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）菌株,其中的ZT4、ZT5、ZT10和ZT14对7种植物病原真菌表现出较强的拮抗作用,以ZT14的拮抗作用最强,抑菌率均在65%以上。以ZT14为目标菌,研究其生物学性状与抑菌活性,发现该菌株在系统进化树上与解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）聚在同一分支,同源性为100%,由此将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌;但ZT14次生代谢产物的抑菌活性较低,推测该菌株可能通过与病原菌竞争生长空间和营养而发挥抑菌作用。     

小麦纹枯病生防芽孢杆菌的筛选及鉴定

从河南、北京等地采集小麦植株,分离得到202株内生芽孢杆菌,平板拮抗测定获得27株对小麦纹枯病菌拮抗效果明显的菌株。温室盆栽测定了27个菌株对小麦纹枯病的生防效果,其中菌株M-1、W-2和W-3的防治效果分别为60.4%、59.4%和56.6%。对3株生防菌株进行了分类学鉴定,M-1为多粘类芽孢杆菌,W-2为地衣芽孢杆菌,W-3为枯草芽孢杆菌。     

0702和GP7-13对植物细菌性青枯病的防治和增产作用

本实验室近年从我国植物细菌性青枯病流行地区植物根围分离到了800余株细菌菌株。经室内测试,其中有2株芽孢杆菌(Bacillusspp.)菌株,在温室盆栽试验中对番茄青枯病[Ralstoniasolanacearum(Smith)Yabuuchietal]表现出较好的防治效果,并对植株有较强的促进生长作用。在湖北、四川和北京郊区的田间试验中,表现出良好的青枯病防效和对马铃薯的增产作用。本文将报道这方面研究结果。1　材料与方法1.1　供试拮抗菌和青枯菌接种体的准备　无菌条件下从原菌种管矿油斜面上分别挑取芽孢杆菌菌株GP7 13、0702菌苔少许,在NA平板上划线,30℃条件下培…     

利用芽孢杆菌在温室环境中控制番茄青枯病

 在离体条件下测试了81株芽孢杆菌分离物抑制番茄青枯病菌的能力,有4个菌株(B2、B5、B7和B8)显示了较好的抑菌效果,经细菌生物学性状、Biolog和16S rDNA序列分析,B2菌株鉴定为短短小芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),B5、B7和B8鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。在温室环境中,4个菌株都能不同程度的促进灭菌土和自然土的番茄生长,并能减轻番茄青枯病的发生。B2菌株显示了显著的抑菌作用,在灭菌土和自然土中分别降低了80.0%和87.4%的番茄青枯病发生率。     

葡萄灰霉病优势拮抗细菌的筛选与鉴定

以葡萄灰霉病病菌为供试菌,采用平板对峙法,研究了葡萄果穗附生细菌对葡萄灰霉病的拮抗效果。同时,进行生理生化、16S r DNA序列鉴定与同源性分析。结果表明,在分离得到的13株附生细菌中,其中11株对葡萄灰霉病有不同程度的拮抗作用,且拮抗菌的保护作用优于治疗作用。其中,B5和B12对葡萄灰霉病病菌孢子的抑菌率均为100%,对葡萄灰霉病病菌菌丝的抑菌率分别为14.49%和15.17%,显著高于其他拮抗菌(P0.05)。B5、B12菌株具有良好的拮抗和离体抑制效果,拮抗菌鉴定与同源性分析结果表明,B5属于芽孢杆菌属,B12属于枯草芽孢杆菌。     

烟草叶围细菌Tpb55菌株的鉴定及其抑菌活性

Tpb55是从烟草叶面生境中分离获得的一株拮抗细菌,本研究从形态、生理生化、16S-23S rDNA转录间隔区PCR（ITS-PCR）分析,初步明确了该菌株的分类地位。光学显微镜下观察到Tpb55菌体为杆状,革兰氏染色均匀,鞭毛周生,产芽孢,各项生理生化测试指标与枯草芽孢杆菌菌株表现一致;16S-23S rDNA ITS-PCR分析结果表明,Tpb55与枯草芽孢杆菌同源性达到99.75%。Tpb55代谢产物对7种病原真菌和3种病原细菌均有不同程度的抑菌作用,表明该菌株代谢产物具有较高的抑菌活性和较广的抑菌谱。进一步研究发现,该菌株代谢产物对有机溶剂、蛋白酶、热和pH值都有很高的稳定性,是具较好开发潜能的生防菌株。     

广东马铃薯黑胫病的病原鉴定

 通过对分离自马铃薯黑胫病的病原菌在选择性CVP培养基上菌落形态观察、致病性测定及16S rDNA序列比较,鉴定出引起广东省冬种马铃薯黑胫病的病原为γ-变形菌门肠杆菌科果胶杆菌属黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum)。生理生化试验表明,该病原菌菌株不能在37℃生长,能使明胶液化,具有运动性、耐盐性(5％NaCl),对红霉素不敏感;过氧化氢酶和蔗糖还原试验反应均为阳性,氧化酶、吲哚产生和磷酸酶活性试验均为阴性;可利用乳糖、麦芽糖、棉籽糖、蜜二糖、纤维二糖、柠檬酸盐和α-甲基酮葡萄糖苷,不能利用山梨醇、d-阿拉伯糖和丙二酸盐。研究结果可为广东冬种马铃薯黑胫病的综合防治提供科学依据。     

马铃薯干腐病菌和黑痣病菌拮抗芽胞杆菌的筛选及鉴定

从甘肃国营条山农场马铃薯连作试验田的96个小区以五点取样法采集根际土样,稀释平板法在LB培养基上分离得到625株芽胞杆菌菌株。统计分析表明,土壤中总芽胞杆菌的数量正茬〉连作2年〉连作4年,但连作6年的土壤中总芽胞杆菌的数量又有上升的趋势。以马铃薯干腐病菌接骨木镰刀菌FusariumsambucinumFSM、茄病镰刀菌FsolaniFSI、黑痣病菌立枯丝核菌RhizoctoniasolaniRSl和RS2为靶标病原菌,平板对峙培养法筛选有抑菌效果的拮抗芽胞杆菌,发现抑菌带宽度大于2mm的拮抗芽胞杆菌的数量随连作年限的增加而减少。以形态学特征、生理生化特性为基础,结合gyrB基因序列分析,将筛选出的2株拮抗效果较好且不引起马铃薯块茎腐烂的芽胞杆菌Bacillusspp．D1—0—1和D1—0—2鉴定为萎缩芽胞杆菌B．atrophaeus。     

TasA抑菌蛋白对烟草黑胫病的防治效果研究

【目的】烟草黑胫病是烟草疫霉菌侵染形成的一种严重危害烟草根茎的土传性疾病,给全球烟草种植业造成严重的经济损失。研究通过构建TasA蛋白原核表达重组菌,研究TasA对烟草黑胫病的抑制效果;并通过改变TasA蛋白的异源表达水平,以期提高该蛋白对烟草黑胫病的抑制效果。【方法】通过PCR扩增技术获得枯草芽孢杆菌抑菌蛋白TasA基因,构建大肠杆菌重组菌;并以烟草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）为指示菌,研究TasA蛋白对烟草黑胫病的抑制效果。此外,通过改变克隆载体的拷贝数,研究TasA蛋白的表达量对其抑菌作用的影响。【结果】成功构建了三株大肠杆菌重组菌（pACYC-Tas A、pCDF-TasA及pT7473-TasA菌株）,且TasA蛋白在三株重组菌中都成功进行了异源表达,分子量为35 ku左右。pACYC-TasA菌株、pCDF-TasA菌株及pT7473-TasA菌株对烟草疫霉菌菌丝体均有抑制效果,抑制率分别为14.85%、25.55%及13.45%。【结论】抑菌蛋白TasA对烟草黑胫病具有显著抑制效果,且过表达pCDF-TasA重组质粒的工程菌对烟草黑胫病抑制效果...     

4种生防菌对烟草黑胫病的防治作用

烟草黑胫病是烟草生产中分布广泛、最具毁灭性的世界性土传病害,其病原菌可以侵染烟草的任何生育阶段,主要为害大田期烟株。概述芽孢杆菌、假单胞杆菌、放线菌、木霉菌4种生物防治菌对烟草黑胫病的防治进展,为烟草黑胫病生物防治提供参考。