非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制

针对非洲猪瘟病毒（ASFV）P54基因建立荧光PCR检测方法,通过优化引物、TaqMan探针浓度及反应温度,研发了ASFV检测的荧光PCR检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及3种不同型号荧光PCR仪使用验证,所研发的试剂盒灵敏度为101copy/μL,适用于不同型号荧光PCR仪使用,可用于对非洲猪瘟病毒的快速检测。     

我国首例非洲猪瘟的确诊

2018年8月1日,辽宁省报告沈阳市一养猪户饲养的猪陆续发生不明原因死亡,病死猪剖检发现脾脏异常肿大,疑似非洲猪瘟病毒感染。国家外来动物疫病研究中心采集病料进行了检测,确诊为非洲猪瘟病毒核酸阳性,序列分析发现,其B646L/p72基因序列417个碱基与俄罗斯毒株100%匹配,与俄罗斯和东欧目前流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)属于同一进化分支。这是我国发现的首例非洲猪瘟。疫情来源有待进一步调查。     

非洲猪瘟及其防控措施

非洲猪瘟是一种急性传染病,发病时间较短,发病率和死亡率高达100%,2018年之前,我国从未出现过非洲猪瘟,2018年8月3日我国确诊首例非洲猪瘟疫情。该病是法定报告动物疫病,也是我国重点防控的一类动物疫情。猪场及养猪户应该意识到防范非洲猪瘟的严重性和重要性,因此,本文主要对非洲猪瘟及其防控措施加以综述。     

非洲猪瘟研究进展及防控措施

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种高致死率、高抵抗力、严格接触性的病毒性疾病,对所有年龄段的家猪和野猪均具有感染性。我国非洲猪瘟传入疫情的出现,对养猪生产构成严重威胁,必将冲击生猪产业的健康稳定发展。本文介绍ASF的病原、流行病学特点,并总结防控措施,以期为ASF的进一步防控提供参考。     

非洲猪瘟的流行特点及防控措施

自非洲猪瘟传入我国以来,给我国生猪养殖业造成了沉重打击。做好非洲猪瘟的安全防控工作,是每个养殖场恢复生产的重中之重。本文就非洲猪瘟致病机理、临床症状、暴发原因进行介绍,同时分析我国在非洲猪瘟疫情防控中存在的问题,并提出相关防控建议,旨在为养殖场做好非洲猪瘟防控工作提供参考。     

非洲猪瘟防控措施与难点

非洲猪瘟是一种高致死率的猪传染病,给养殖业带来了巨大的威胁和冲击,而且目前全球没有有效的疫苗和药物可以预防治疗。本文通过对非洲猪瘟的传染源、传播途径、病毒特性等方面的分析,为养殖场、政府部门等相关从业人员提供有效应对非洲猪瘟的防控措施,并对目前我国遇到的防控难点进行分析,有助于相关人员制定下一步防控非洲猪瘟措施。     

湖南省猪肉及相关产品非洲猪瘟监测与分析

2018年10-12月在湖南省内652个冷库、肉品加工厂及超市等场点,对1 356个批次的产品中随机抽取4 787份猪肉及其产品,使用荧光定量PCR方法进行非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)核酸检测。结果显示,有77份样品ASFV核酸阳性,阳性率为1.6%;阳性样品类型包括冻猪肉、肥膘、板油、冻猪肚、冻猪内脏、腊肉、香肠、水饺、冻猪舌等,至少有33份阳性样品来自外省,占总阳性数的42.9%,生产时间最早为2018年4月份;表明我省ASFV疫情的最早传播可能来自肉产品。     

非洲猪瘟的研究进展及防控措施

非洲猪瘟是一种致死率极高的猪烈性传染病,文中阐述该病病毒特性、临床症状、病理变化等特点,结合欧洲对该病的防控手段,提出对非洲猪瘟的防控策略,一方面严防严控该病进入国内,另一方面对疫病暴发要提前准备,迅速控制。     

猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光定量PCR方法的建立与应用

为了建立能够猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)双重荧光定量PCR方法,试验比对了CSFV与ASFV的基因组序列,针对CSFV 5′-UTR和ASFV B646L保守靶序列,分别设计2条特异性引物及1条TaqMan探针,通过优化扩增体系和程序,建立可同时检测CSFV和ASFV的双重荧光定量PCR方法,并建立该方法的标准曲线,同时用敏感性试验、特异性试验和重复性试验对该方法进行评价,最后检验该方法的应用效果。结果表明：CSFV和ASFV标准曲线的相关系数(R²)分别为0.999和1,线性关系良好;CSFV与ASFV的最低检测浓度分别为1.3×10⁰ copies/μL和2.4×10⁰ copies/μL;与其他常见猪只病原检测无交叉反应;批间与批内变异系数均小于2%,稳定性良好。试验建立的方法对44份临床样本的检测结果与《猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 27540—2011)和《非洲猪...     

非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

非洲猪瘟病毒p54蛋白在病毒感染与增殖过程中起重要作用.根据p54基因的核苷酸序列,设计并合成引物和用6-carboxy-fluorescein (6-FAM) 和tetramethyl-6-carboxyrhodamine (TAMRA) 荧光素标记Taq Man双水解探针,以构建的含p54基因的pET-p54重组质粒作为阳性模板,建立了ASFV检测的荧光定量PCR方法(已申请专利,专利号200910067620.6).结果表明,所建立的方法与含p54基因的模板质粒数呈现很好的相关性(R2=0.991),可检测出低于15个拷贝/μL的样品,灵敏度和特异性高,可作为出入境检验检疫部门对非洲猪瘟病毒的快速检测方法.     

多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒

为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法。根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT—PCR扩增后将产物回收,克隆至pMDl8-T构建pMDl8-T—CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMDl8-T—ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板时建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级．而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后．发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标。未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。     

非洲猪瘟相关检测及猪场生物安全防控研究进展

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染猪导致的一种急性、烈性、高度接触性传染病.各日龄猪均易感,因尚无安全有效的疫苗进行预防,感染致死率可达到100％,引起了重大生物安全问题.快速准确的诊断及消毒对于ASF防控有着重...     

野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立

为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的方法,针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针,优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法,并对方法的特异性、灵敏性及重复性进行评估。结果显示,优化后的多重荧光定量PCR检测方法的标准曲线线性关系良好,对PRRSV、PEDV、PRV、VSV、PCV、RNase-free水、重组质粒标准品进行特异性检测,特异性良好;重复性试验结果显示,变异系数均小于2%;对3种重组质粒的最低检测下限均为10² copies/μL。参照上述多重荧光定量PCR方法优化后的条件,进行多重ddPCR检测方法的建立,并且对该方法进行评价。结果显示,ddPCR检测方法标准曲线的线性关系良好;特异性及重复性良好;最低检测下限B646L为11.6 copies/μL、EP402R为13.3 copies/μL、DP96R为16.9 copies/μL;ddPCR的检测灵...     

非洲猪瘟的流行与防控

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性烈性传染病,猪只感染病毒后的发病率和死亡率可高达100%,对生猪养殖生产造成不可估量的损失。现阶段还没有有效的药物和疫苗来防控非洲猪瘟,对于养殖场来说,目前最有效的措施是做好生物安全防控。本文就非洲猪瘟的病原特性、流行病学及生物安全防控措施等方面进行阐述,加强养殖户对非洲猪瘟的了解,做好生物安全防控措施,为切断非洲猪瘟的传播扩散奠定基础。     

非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法

试验旨在建立一种非洲猪瘟病毒（ASFV）的荧光定量PCR检测方法,根据ASFV P72基因核苷酸序列,通过基因克隆技术在质粒载体中克隆一段ASFV P72基因片段,设计一对特异性引物以及探针,通过带有基因序列的重组质粒绘制曲线,构建了一种ASFV荧光定量PCR检测手段。结果显示,该方法具有较高的敏感度,标准曲线线性关系较好,相关系数达到0.999 8,重复性较佳,变异系数小;且以其他疾病核酸为模板均未出现扩增曲线,特异性较好。研究表明,该荧光定量PCR方法能够为ASFV的检测提供帮助。     

非洲猪瘟防控措施

非洲猪瘟是猪的一种急性、热性、传染性极强的高度接触性传染病。死亡率可高达100%。临床症状表现为皮红高热、食欲废绝、高致死率;病理特征表现为脾脏高度重大、淋巴结和内脏器官严重出血、水肿。该病不感染人,暂没有疫苗防控,也没有有效治疗药物,目前防控手段只能依赖生物安全、监测、扑杀等措施。     

实时荧光PCR检测非洲猪瘟病毒

非洲猪瘟(ASF)目前已对全球多个发病国家的养猪业造成了巨大的经济损失,是我国明确规定须重点防范的外来动物疫病之一,其对我国的威胁也与日俱增。本实验采用北京世纪元亨非洲猪瘟实时荧光PCR试剂盒,重点对来源于四川省阿坝、广元、巴中、达州、广安等边境高危地区的规模场及散养户的猪组织病料进行了检测,结果表明97份组织样本均为ASFV抗原阴性,四川境内尚未发现ASFV感染。     

非洲猪瘟病毒实时荧光RPA快速检测方法的建立

非洲猪瘟是一种跨境动物疫病,对世界养猪业危害严重。目前,该病的流行范围越来越广。为防止该病传入我国,当前急需建立快速、简便、可靠的检测方法。本研究通过分析非洲猪瘟病毒B646L基因保守区域,设计并合成了特异性引物和exo探针,建立了检测非洲猪瘟病毒的实时荧光RPA方法。利用该方法可在20 min内完成检测过程,最低可检测到16拷贝/反应;与猪的其他常见病原核酸无交叉反应;与荧光PCR方法具有相似的灵敏度和特异性;利用该方法对100份国内临床样品进行检测,结果均为阴性。本研究所建立的非洲猪瘟病毒实时荧光RPA检测方法具有简单、快速、敏感性高、特异性强的优点,在临床鉴别诊断、检验检疫和病原监测等方面具有广泛的应用价值。     

我国非洲猪瘟疫情现状及防控措施

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起猪的一种急性、热性、高传染性、出血性疾病,所有品种和年龄的猪均可感染,其发病率、致死率达100％.自2018年8月,我国首例非洲猪瘟疫情在沈阳发生后,据官方统计,截至2020年底,全国先后发生非洲猪瘟疫情181起,对我国生猪产业造成严重的影响.对目前我国非洲猪瘟的流行现...     

乡镇非洲猪瘟防控现状及措施

非洲猪瘟疫情对生猪养殖造成的影响严重,在短期内形成了区域性传播,全国多地都出现了非洲猪瘟的确诊病例。按照有关的法律规定,猪场一般都在郊区,尤其是在乡村地区,因此,开展乡镇非洲猪瘟的防控工作,是当前疫病防控的当务之急。在防控工作中,要以地方的实际情况出发,明确传播源头和传播途径,结合当地特征制定有效的防控措施,以保证防控工作的有效进行。