1株肠炎沙门氏菌噬菌体的污水分离及生物学特性研究

Using double-layer plate method, a phage against Salmonella enteritidis was isolated from sewage water, and its biological characteristics were studied. The plaques of isolated phage were transparent with clear boundary, and were about 2 mm in diameter at 12 h. The morphological properties of phage were examined by electron microscope, and showed that the phage had an isometric polyhedral no-enveloped head with diameter of about 54 nm, and a long noncontractile tail with size of about 110 nm. The test of optimal multiplicity of infection showed when MOI equaled 2, the number of phage offspring was higher. One-step growth kinetics was determined according to the results of one-step growth experiment, which showed that the latent period was about 10 min, the rise period was about 100 min, and the average bust size was about 61. The phage against S.enteritidis was successfully isolated from the sewage water in this study, which would provide materials for the further biological control researches of S.enteritidis using corresponding phage.     

云南地方乌鸡肠炎沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究

为鉴定云南某地方乌鸡场疑似沙门氏菌感染的病原菌并研究其生物学特性,通过细菌分离纯化、染色镜检、生化试验、血清分型、PCR检测、16S rRNA基因测序分析进行鉴定,并进行了药敏试验、耐药基因、毒力基因检测,以及致病性试验和动物回归试验。结果显示：分离株经纯化后在SS培养基上为圆形,半透明,中心黑色或全黑色光滑菌落;革兰氏染色镜检可见无芽孢、无荚膜的阴性短杆菌;综合沙门氏菌属血清凝集试验、生化试验、PCR检测、16S rRNA基因测序及遗传进化分析结果确定该菌株为肠炎沙门氏菌,命名为SE001株。动物试验表明：该菌株对试验小鼠致病性强,按照0.2 mL/只剂量接种小鼠(菌液浓度1×10⁴ CFU/mL),24 h内死亡率为50%;对不同品种雏鸡致病性存在差异,按照0.2 mL/只剂量(菌液浓度1×10⁸ CFU/mL)接种白羽蛋鸡雏鸡,7 d内全部死亡;而接种茶花鸡雏鸡不会引起死亡,但剖检可见心脏明显病变。药敏试验结果表明：该菌株对阿莫西林、头孢氨苄、庆大霉素、阿奇霉素、恩诺沙星等20种药物敏感;对红霉素、克林霉素中度敏感;对土霉素、四环素、强...     

沙门氏菌高效价宽谱噬菌体的分离纯化及生物学特性测定

为探索控制沙门氏菌感染的新途径,本试验进行了高效价宽裂解谱噬菌体的分离。首先利用点斑试验和成斑率（EOP）测定法对环境样品进行了沙门氏菌噬菌体的分离纯化及裂解效价和裂解谱的测定,然后对其中1株效价较高、裂解谱较广的噬菌体进行了电镜形态特征观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线测定及温度、pH和紫外线敏感性的测定。结果显示,该株噬菌体对不同沙门氏菌的裂解率不同,裂解效价在10⁹~10¹² PFU/mL;对检测的32株沙门氏菌菌株的裂解率为59.4%;透射电镜下观察到该噬菌体为头部直径约70 nm、尾部长约140 nm的长尾噬菌体;以鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028为宿主菌测得最佳感染复数为0.01;在宿主菌鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028中的一步生长曲线显示,潜伏期为20 min,暴发期为100 min,暴发量为113 PFU/cell;在40~60 ℃效价稳定在10¹⁰ PFU/mL,pH 5.0~13.0效价在10⁶ PFU/mL以上,紫外线照射50 min效价仍有10⁶ PFU/mL。综上可知,该株噬菌体分离株具有效价高、裂解谱宽且对温度、pH、紫外线稳定性良好等特性,符合噬菌体制剂的相关特征,具备作为噬菌体制剂后备菌株开发的潜力。     

噬菌体对鸡肠炎沙门氏菌的防治研究

肠炎沙门氏菌是全球食源性疾病暴发的主要病原菌之一,可引起禽类发病死亡,造成巨大的经济损失.噬菌体是一种细菌病毒,具有严格的宿主特异性.在耐药菌日益增长、抗生素使用受限的情况下,可考虑将噬菌体作为消除病原体的替抗药物.因此,文章就噬菌体对肠炎沙门氏菌的防控及其应用前景展开综述,同时为其他耐药菌的治疗防控提供新的策略.     

1株宽噬菌谱鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

本研究采用双层琼脂平板法从现代化肉鸡养殖场采集的粪便、污水和垫料样品中分离宽噬菌谱鸡白痢沙门氏菌烈性噬菌体,并通过透射电子显微镜观察、噬菌谱分析、热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数及一步生长曲线等对分离纯化的噬菌体进行生物学特性分析。结果显示,试验成功分离纯化出一株鸡白痢沙门氏菌噬菌体,命名STP98-a。该噬菌体噬菌斑直径4~5 mm,圆形透明,无晕圈,其头部偏椭圆形,长径约61 nm,横径约67 nm,尾长约112 nm,直径约10 nm,属于长尾噬菌体科;能裂解不同血清型鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌肠亚种,噬菌谱宽;在30~60℃保持高活性;在pH 3.0~12.0稳定;最佳感染复数为0.001;一步生长曲线结果显示,其感染宿主菌潜伏期为5 min,裂解期为135 min,裂解量为93。综上所述,STP98-a为一株宽噬菌谱鸡白痢沙门氏菌烈性噬菌体,可用于鸡白痢沙门氏菌噬菌体制剂的研发。     

一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了分离一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体,对抗多重耐药细菌,试验从健康鸡粪便中分离富集噬菌体,采用双层琼脂平板法纯化、增殖,超速离心法浓缩,利用透射电镜观察噬菌体形态,通过提取噬菌体基因组、酶切、电泳确定核酸类型,同时测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱及热稳定性等生物学特性。结果表明：从鸡粪中分离得到1株裂解性噬菌体,命名为PSP2-22。该噬菌体头部直径为(60±5)nm,尾部长为(130±5)nm,为长尾噬菌体科;核酸类型为双链DNA。该噬菌体不仅能裂解鸡白痢沙门氏菌,还可裂解鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌;最佳感染复数为0.1;平均裂解量约为136 pfu/cell,效价最高可达9.83 lg pfu/mL;在pH值6～11时相对稳定,70℃作用60 min之后仍具有一定活性。说明噬菌体PSP2-22是一株对不同温度和pH值有较强适应能力的双链DNA噬菌体,宿主谱相对较宽,具有潜在的应用价值。     

某鸡场大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性研究

为了探究大肠杆菌噬菌体的形态特征和生物学特性,本研究以实验室保存的55株禽致病性大肠杆菌为宿主菌,通过双层琼脂平板法从某鸡场污水和淤泥中分离纯化得到1株宽裂解谱的大肠杆菌噬菌体,命名为Bp16,用2%磷钨酸负染后于透射电镜观察其形态结构,采用双层琼脂平板法测定其温度和pH稳定性、最佳感染复数（MOI）及一步生长曲线等生物学特性。透射电镜观察结果显示,分离得到的宽裂解谱噬菌体Bp16的头部为正二十面体结构,有尾且有尾丝,体长约为220 nm,根据《病毒分类——国际病毒分类委员会第9次报告》的分类特征,该噬菌体为有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科的成员;以实验室保存的55株禽致病性大肠杆菌为指示菌,其裂解效率仅为12.73%;温度稳定性结果显示,在37~60 ℃作用30 min或1 h噬菌体效价基本保持不变,且在80 ℃作用1 h后效价仍能达到1×10⁴ PFU/mL以上,说明该噬菌体对温度的变化不敏感,具有耐热的特性;pH稳定性结果显示,在pH 5.0~10.0之间效价基本保持不变,对酸碱较耐受;最佳感染复数为1;根据最佳感染复数来绘制一步生长曲线,测得其潜伏期为20 min,暴发期为50 min,裂解量为73 PFU/cell。综上所述,噬菌体Bp16具有热稳定性、酸碱稳定性及裂解能力强等优点,为后续试验研制大肠杆菌噬菌体制剂奠定了基础。     

番鸭感染肠炎沙门氏菌的分离鉴定

某番鸭养殖场鸭群发生一种高发病率、高死亡率的传染病 ,本试验从该场的病死鸭内脏中分离到 1株细菌 ,经鉴定为肠炎沙门氏菌。毒力试验和药敏试验表明细菌毒力很强 ,但对丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素等敏感     

鸭源沙门氏菌的分离及其生物学特性测定

1999年12月，江西某鸭场饲养的1400只天府肉鸭父母代，从7日龄开始陆续发病，表现为拉稀、缩颈、软脚，死前多出现神经症状，如角弓反张、神经性颤抖等。病程1～2天。至15日龄时，共死亡200多只。剖检病死鸭可见纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎，脾脏肿大出血，胰腺有出血点，肠粘膜出血。从送检的4只病死鸭脏器分离到4株沙门氏菌。用该分离株人工感染10日龄雏鸭，试验鸭人工感染后表现的症状及病理变化与自然病例一致。并对分离菌株的部分微生物学特性进行了测定。现报告如下。1 材料和方法1.1 材料试验鸭：从南昌某鸭场购进8日龄雏鸭18只…     

种番鸭肠炎沙门氏菌的分离鉴定

自表现产蛋异常(产畸形蛋、产蛋量下降)种番鸭群的死亡种番鸭肝脾中分离到1株细菌,经鉴定为肠炎沙门氏菌(抗原结构式为1,9,12∶g,m∶-)。通过毒力试验,结果表明其对雏鸭和小鼠致病性很强,经药敏试验测得该菌对丁胺卡那霉素和环丙沙星敏感。     

一株大肠杆菌噬菌体的分离鉴定与系统进化分析

本试验从污染噬菌体的大肠杆菌发酵液中分离到一株烈性噬菌体,通过生物学特性和系统进化分析,得出其最佳感染复数为0.01,潜伏期约为20 min,繁殖周期为80 min。测序分析显示与Escherichia phage vB_EcoS_SH2（NC_047828）具有高度同源性（97%),进化树分析显示属于Drexlerviridae（科）,Tunavirus（属）。[关键词] 噬菌体|分离鉴定|生物学特性|进化分析     

一株鸡大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及治疗试验

为探究大肠杆菌噬菌体的生物学特性及其治疗效果,本研究采用双层平板法分离纯化大肠杆菌噬菌体,并测定噬菌体的效价、温度稳定性、p H稳定性、感染复数(MOI)、一步生长曲线等生物学特性,以及噬菌体治疗大肠杆菌病的效果。结果显示分离的噬菌体Bp1805最佳MOI为1时,其效价可达2.4×10^10 pfu/m L;噬菌体Bp1805对温度的耐受范围较广,在p H5~p H10范围内非常稳定,该噬菌体潜伏期为20 min,裂解期为50 min。大肠杆菌病治疗试验结果显示,注射噬菌体比口服噬菌体治疗效果好,大肠杆菌病的防治效果与噬菌体治疗方式和治疗时间有关;噬菌体治疗大肠杆菌病效果优于恩诺沙星和硫酸庆大霉素。噬菌体Bp1805能够裂解致病性大肠杆菌,为临床大肠杆菌病的噬菌体防治提供参考依据。     

一株撒坝猪源大肠杆菌噬菌体的生物学特性研究

为了解撒坝猪源大肠杆菌噬菌体分离株的生物学特性.自撒坝猪源大肠杆菌中分离到一株裂解性噬菌体,利用PCR扩增噬菌体衣壳蛋白gp23基因,并通过同源性比对及遗传进化分析来鉴定噬菌体.经增殖纯化培养后测定噬菌体的效价和对菌株的裂解效应,而后测定其最佳感染复数、热稳定性、pH稳定性及绘制生长曲线以探究该噬菌体的生物学特性.结果...     

1株沙门氏菌噬菌体的分离鉴定和特性分析

【目的】分离有效裂解沙门氏菌的噬菌体,为探索新的沙门氏菌防控方法提供理论依据和参考。【方法】以鸡白痢沙门氏菌X-1014为宿主菌,通过双层琼脂平板法从污水中分离并纯化出噬菌体。采用噬菌斑与电子显微镜观察、宿主谱测定、生物学特性测试、体外抑菌试验及噬菌体的全基因组测序分析方法评估该噬菌体。【结果】分离纯化出1株能裂解沙门氏菌和大肠杆菌的裂解性噬菌体,命名为ZH5(GenBank登录号：OM864357.1)。双层平板法结果显示,噬菌斑透亮且边缘清晰。电镜观察显示,噬菌体ZH5头部呈二十面体、头部直经约50 nm,尾部长度约20 nm。宿主谱分析结果显示,噬菌体ZH5能裂解3株沙门氏菌和1株大肠杆菌。生物学特性结果显示,最佳感染复数为10,潜伏期和爆发期分别为20和60 min,裂解量约为139 PFU/cell;酸碱耐受范围为pH 4.0～10.0,且在温度为4～50℃的环境中能存活30 min。体外抑菌结果显示,当感染复数为10时,噬菌体ZH5对沙门氏菌X-1014和CVCC 1806抑制效果最佳。全基因组分析结果显示,该噬菌体全长为42 949 bp, GC含量为51.41%,其中已...     

一株沙门菌噬菌体的分离及其生物学特性

应用双层平板噬菌斑试验,从养殖场粪便、污水中分离到85株能裂解沙门菌的噬菌体,并筛选到1株裂解性强、噬菌谱广的噬菌体SQC73。随后测定了其酸碱耐受性、热稳定性、最佳感染复数和一步生长曲线。结果表明,SQC73酸碱耐受性和热稳定性良好,最佳感染复数为100∶1,潜伏期为20 min,暴发期为70 min,平均裂解量为25.3;灭菌效果试验显示SQC73可以有效消灭平板上99%以上的沙门菌,模拟污染试验表明可以有效消灭96%以上的沙门菌,具有作为环境灭菌剂的潜力。     

鸭肠炎沙门氏菌分离鉴定与药敏试验

某番鸭养殖场鸭群发生一种高发病率、高死亡率的传染病 ,从病死鸭内脏分离到肠炎沙门氏菌。分离菌毒力很强。根据中、西药体外抑菌试验和中草药体内筛选试验结果 ,用此药和两个复方制剂对人工感染肠炎沙门氏菌病鸭作治疗保护试验 ;结果复方制剂 高、中、低 3个剂量组和制剂 高剂量组及氟甲砜霉素对照组对人工感染肠炎沙门氏菌病鸭均有较好的治疗作用 ,与感染对照组的自然保护率 (72 .7% )比较 ,差异极显著 (P <0 .0 1 ) ,制剂 中、低剂量组的疗效显著。试验各组之间鸭的增重差异不显著     

1株鸡源肠炎沙门氏菌的分离鉴定及致病性分析

【目的】确定云南某蛋鸡场送检的疑似沙门氏菌病病料中的主要病原菌种类,并测定其致病性及药物敏感性。【方法】通过细菌分离培养、形态观察、生化试验、血清学鉴定及分子学方法进行细菌分离鉴定;通过对鸡的致病性试验及毒力基因检测分析分离菌的致病性;通过药物敏感性试验检测分离菌耐药情况。【结果】分离菌株在沙门氏菌显色培养基上形成紫色菌落,镜检为革兰氏阴性短杆菌,疑为沙门氏菌,命名为S2;生化试验结果显示,菌株S2赖氨酸脱羧酶、硫化氢、卫矛醇试验结果均为阳性;靛基质、尿素酶、氰化钾、山梨醇、水杨苷、β-半乳糖苷、丙二酸盐生化试验结果均为阴性,判断菌株S2为典型沙门氏菌属;血清学鉴定结果显示,菌株S2属于D群肠炎沙门氏菌,其抗原式为1,9,12:g,m;遗传进化分析结果显示,菌株S2与肠炎沙门氏菌MT621365处于同一分支,自展值为99%;致病性试验结果表明,分离菌株对雏鸡有较强的致病性,感染6 d后雏鸡全部死亡(10/10);毒力基因检测结果显示,菌株S2携带invJ、hilA、ssaB、misL、mgtC、orf319、sopB、spvA、spvB、spvC、spvR、stn和fimA毒力基因,不携带sopA、fliC毒力基因;菌株S2对多数抗菌药敏感程度很高,对阿莫西林-克拉维酸、头孢西丁、四环素等12种抗菌药均敏感,对甲氧嘧啶、复方新诺明和林可霉素耐药。【结论】本研究分离到了1株肠炎沙门氏菌,其毒力较强,可造成雏鸡较高的死亡率,对大部分常用抗菌药敏感,对甲氧嘧啶、复方新诺明和林可霉素具有耐药性。本研究结果可为沙门氏菌病的临床诊断和药物有效性评价提供一定参考依据。     

大肠杆菌噬菌体的分离及其生物学特性

早在1917年,人们就对噬菌体用于治疗进行了探索性的研究,初步证实噬菌体可作为细菌性疾病的一种有效治疗因子[1].20世纪40年代,抗生素在治疗细菌性疾病方面表现出快捷、高效、简便的优势,从而使噬菌体治疗不再受到重视,有关噬菌体治疗方而的研究基本陷于停滞状态.目前,抗生素的使用面临一个非常棘手的问题,即大量耐药菌株的出现使抗生素在细菌病治疗方面越来越无能为力,于是噬菌体治疗重新受到了人类的关注.     

乳酸菌噬菌体的分离及生物学特性鉴定

为了解乳酸菌噬菌体的生物学特性,并为制定乳酸菌发酵生产过程中噬菌体污染的防控措施提供试验数据和参考,本研究通过斑点试验和双层琼脂平板法,以干酪乳杆菌（L. casei） ATCC 393、戊糖乳杆菌（L. pentosus） KLDS 1.0413、短小乳杆菌（L. brevis） ATCC 367为指示菌从乳制品、泡菜样品中分离乳酸菌噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体形态,噬菌体基因组限制性内切酶作用分析其包装机制,并进行宿主范围和一步生长曲线的测定,SDS-PAGE分析噬菌体结构蛋白,对获得的噬菌体进行生物学特性鉴定。结果显示,分离获得3株烈性乳酸菌噬菌体,依次命名为Lc、Lpen和Lbre。电镜结果显示,噬菌体Lc、Lpen均由多面体头部和非收缩性尾部组成,而噬菌体Lbre由多面体头部和收缩性尾部组成。根据形态学分析,Lc和Lpen属于长尾噬菌体科（Siphoviridae）,B1类,Lbre属于肌尾噬菌体科（Myoviridae）,A1类。噬菌体基因组经限制性内切酶作用后,核酸电泳结果显示,噬菌体Lc、Lpen基因组均为异质平末端,其包装机制属满头包装,即pac-型,而Lbre含有黏性末端,其包装机制属于cos-型。宿主范围测定结果显示,噬菌体Lc、Lbre对宿主专一,而Lpen宿主谱较广。一步生长曲线显示,噬菌体Lc、Lpen和Lbre潜伏期分别为60、45和150 min,裂解期分别为45、90和105 min,裂解量分别为47、24和30 PFU/cell。SDS-PAGE分析显示,噬菌体Lc结构蛋白有7个,主要结构蛋白分子质量约为50 ku;噬菌体Lpen和Lbre结构蛋白均有5个,主要结构蛋白分子质量分别约为55和50 ku。综上,本研究分离获得3株乳酸菌烈性噬菌体,并对其主要生物学特性进行鉴定,对了解乳酸菌噬菌体及后续乳酸菌噬菌体污染的防治提供了试验数据和理论依据。     

鸡肠炎沙门氏菌病的病原分离与鉴定

某“南海黄”鸡养殖场鸡群发生一种高发病率、高死亡率的传染病。从病死鸡肝脏分离到1株细菌，经分离鉴定为肠炎沙门氏菌。经毒力试验和药敏试验，结果表明，细菌毒力很强，但对丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素等敏感。