西藏绵羊溶血性曼氏杆菌分离鉴定及药敏特性研究

为探究西藏自治区山南市某地农户饲养的绵羊大批死亡的原因,采集病死羊心脏、脾脏、小肠、肺脏、气管等病料,进行细菌培养、分离鉴定、PCR检测、血清型鉴定、毒力基因检测及药敏特性分析。结果显示:从病死羊肺脏病料中分离出一株溶血性曼氏杆菌,血清型为2型;特异性PCR检测为阳性,证明分离菌株为溶血性曼氏杆菌;药敏试验结果显示,分离的溶血性曼氏杆菌对大多数临床常用抗生素敏感;主要毒力基因lktA检测为阳性。该研究首次从西藏绵羊分离出溶血性曼氏杆菌,并研究了其药敏特性,为该病的诊断与治疗提供了参考。     

牛源荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

探明一起牛运输热的病原及生物学特性,本研究采集病死牛心血、肺脏,对其进行细菌分离、生化试验和PCR鉴定,并对分离株进行毒力基因检测、致病性研究。结果显示,该分离菌为革兰氏阴性菌,呈球状或短杆状、两端钝圆、两极浓染。生化试验结果显示,分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖、甘露醇、甘露糖、乳糖、木糖等碳水化合物,不发酵脲酶和吲哚,产生少量酸而不产气,符合溶血性曼氏杆菌的生化特性。PCR鉴定为荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,并完成了毒力基因的检测。结果表明,引起该批牛运输热的病原为携带毒力基因的荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,本研究结果为进一步研究溶血性曼氏杆菌的致病机制、防控措施等提供参考。     

云南羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

采用PCR鉴定、16S rDNA基因鉴定方法,对从云南某羊场病羊肺脏中分离到的1株革兰氏阴性小球杆菌进行系统鉴定,并对分离株的致病性和药物敏感性进行研究。鉴定结果表明:分离株溶血性曼氏杆菌PCR鉴定为阳性;分离株16S rDNA基因序列与GenBank上公布的其它溶血性曼氏杆菌同源性为96%~99%,与溶血性曼氏杆菌D171参考株同源性高达99%,因此将分离株系统鉴定为溶血性曼氏杆菌。致病性实验表明:分离株对小白鼠有致病性,该分离株对头孢呋辛、头孢曲松等头孢类抗生素和四环素最为敏感。本研究为我国南方省份曼氏杆菌病的防控和深入研究奠定了基础。     

多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌混合感染引起山羊肺炎的诊断

青海省湟中区某山羊场发生呼吸道疾病,为确定引起本次呼吸道疾病的病原,笔者对病死羊进行剖检,并进行病原分离、鉴定。同时,采用PCR方法,对多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体和丝状支原体等呼吸道相关病原进行分子检测。结果发现,患羊临床表现以咳嗽、呼吸困难、精神萎靡和鼻内有粘性分泌物为特征的肺炎,细菌分离获得多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌,未分离获得其他细菌性病原和支原体。PCR检测发现多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌阳性。根据临床症状、剖检变化和实验室检测,最后确诊为由多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌共同感染山羊引起的肺炎。     

绵羊肺脏中溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及其药物敏感性分析

为了对引起绵羊肺炎的病原进行分离、鉴定和耐药性分析,本研究通过无菌采集绵羊肺脏并对细菌进行分离纯化、生化试验和PCR鉴定,然后对所得到的溶血性曼氏杆菌分离株进行药物敏感性研究。结果显示,分离纯化得到的细菌为革兰氏阴性短杆菌,具有弱溶血性,经生化试验和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌;耐药性分析显示该菌株对恩诺沙星、庆大霉素、四环素等大部分药物敏感。本研究为绵羊溶血性曼氏杆菌感染的有效防制提供有用的信息和数据。     

山羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定

为研究重庆市某羊场羔羊肺炎的病原及筛选敏感的药物,笔者进行了细菌分离培养、染色镜检、生化试验、动物接种试验、16SrDNA基因扩增及测序、药物敏感试验。结果表明:分离的病原菌是溶血性曼氏杆菌,其基因序列与溶血性曼氏杆菌的同源性为99%;分离菌对大观霉素、头孢噻肟、环丙沙星、氟苯尼考、复方新诺明、氨苄西林、头孢唑林、恩诺沙星高度敏感。羊场选用头孢噻肟对发病羊紧急治疗,疫情得到了有效控制。     

一起藏绵羊溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染的实验室诊断

为查明2021年四川省甘孜州某藏绵羊养殖场呼吸道疾病的发病病因,本研究采用PCR方法对送检的5份深部鼻腔棉拭子进行了“山羊副流感病毒3型、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛冠状病毒、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体、丝状支原体簇成员”等常见呼吸道病原的检测。结果显示：多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌为阳性,其他病原为阴性;通过细菌分离培养成功获得5株溶血性曼氏杆菌和5株多杀性巴氏杆菌;分型结果显示5株溶血性曼氏杆菌为A2型,5株多杀性巴氏杆菌为D型。结合临床症状,确诊该场藏绵羊的呼吸道疾病是由A2型溶血性曼氏杆菌和D型多杀性巴氏杆菌混合感染所致。     

浅谈溶血性曼氏杆菌研究进展

正溶血性曼氏杆菌病是危害牛、羊等动物的重要呼吸道传染病,给养殖产业造成巨大的经济损失,其病原为溶血性曼氏杆菌。笔者从溶血性曼氏杆菌产生的危害、流行状况、毒力因子、致病机制、诊断技术和防控措施等进行概要简述,为进一步了解溶血性曼氏杆菌提供理论参考。     

某牛场犊牛呼吸道疾病的诊断与药敏试验

2017年3月份,黑龙江省五常市某规模化奶牛场发生犊牛急性肺炎,为了确诊其病因,无菌采取7份呼吸道症状犊牛鼻拭子进行细菌分离鉴定,同时进行生化试验、PCR鉴定和药敏试验。结果表明:共分离得到3株细菌,符合大肠杆菌、巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌生化特性;PCR引物能有效扩增巴氏杆菌OmpH基因、溶血性曼氏杆菌lkt A基因和大肠杆菌Sta基因;分离的大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿米卡星中敏,巴氏杆菌对恩诺沙星、阿莫西林、青霉素高敏,溶血性曼氏杆菌对阿米卡星、头孢唑林、青霉素高敏;经检查7份鼻拭子中大肠杆菌感染1份,溶血性曼氏杆菌感染1份,巴氏杆菌感染5份。说明该牛场细菌污染严重,应引起重视。     

肉牛溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为探究四川省某肉牛养殖场从外地引种的西门塔尔牛出现体温升高、咳嗽和呼吸困难等症状的病原,本实验采集24份病牛鼻腔棉拭子,随机挑取10份进行细菌的培养、分离鉴定以及分离菌株的耐药性分析;同时采用特异性检测溶血性曼氏杆菌的PCR方法对全部病牛鼻腔棉拭子进行检测。结果显示,从10份病牛鼻腔棉拭子中分离鉴定出10株溶血性曼氏杆菌,分型PCR方法结果显示其中8株为荚膜血清6型,其余2株未定型;药敏试验结果显示,溶血性曼氏杆菌分离株对大多数氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类药物敏感,对部分β-内酰胺类和酰胺醇类药物耐药;特异性检测溶血性曼氏杆菌的PCR方法从24份鼻腔棉拭子中检测出23份阳性样品,表明该群病牛溶血性曼氏杆菌的感染率很高。本研究为该牛场的呼吸道病的防控提供了参考。     

溶血性曼氏杆菌PCR检测方法的研究

溶血性曼氏杆菌是导致牛、羊呼吸道传染病的一种病原菌。为快速、准确诊断由本菌导致的疾病 ,从基因库中获得溶血性曼氏杆菌( M.haemolytica )的基因序列 ,再从其基因序列中获得与其它细菌包括 M.annheimiagranulomatis,M.varigena ,M.ruminalis,M.glucosidal ,M.annheimiaspp和多杀性巴氏杆菌等不同的基因片段 ,设计成引物 ,建立了特异性好、敏感性高的 M.haemolytica PCR检测方法。结果表明 ,除溶血性曼氏杆菌为阳性外 ,其余所有细菌均为阴性 ,特异性为 1 0 0 % ,最小检出量为 8× 1 0 2 cfu/ m L 曼氏杆菌或 1 / 1 0个单个菌落。检验人工感染牛 ,检出率为 75%。此PCR检测方法的建立 ,为 M.haemolytica提供了一个快速诊断方法     

1株黄牛源多源曼氏杆菌的分离鉴定与转铁结合蛋白B结构预测

为确定引起肺炎病死黄牛的病原，从牛鼻拭子中分离纯化得到1株细菌，经生化试验和分子生物学方法鉴定为多源曼氏杆菌。利用生物信息学软件MEGA7.0对巴氏杆菌科细菌的16S rDNA和巴氏杆菌科、奈瑟菌科细菌的转铁结合蛋白B(TbpB)进行系统进化分析，并对TbpB进行了结构预测。结果显示，分离株16S rDNA基因序列与牛曼氏杆菌ZY190616株、肉芽肿曼氏杆菌ATCC49244株、多源曼氏杆菌10299株相似性最高，位于同一簇内，相似性超过97%;分离株TbpB序列与溶血曼氏杆菌、多源曼氏杆菌相似性较高，位于同一簇内，但与其他菌的TbpB序列相似性较低；TbpB结构模拟显示其序列与已经测定结构的溶血曼氏杆菌TbpB序列相似性较高。药敏试验显示该菌氨基糖苷类、β-内酰胺类抗生素有较强的耐药性，对头孢哌酮和氟喹诺酮类药物敏感小鼠致病性试验证实该分离菌株致死量约为2×10⁹CFU。结果表明，该分离株为多源曼氏杆菌，其TbpB序列与溶血曼氏杆菌和多源曼氏杆菌相似性较高。本研究为后续毒力基因相关研究和疫苗开发提供了理论基础。     

贵州省某羊场魏氏梭菌病的诊断

为摸清贵州省某羊场羊只发病死亡原因,采用临床症状观察、病理解剖诊断、细菌分离培养及鉴定和PCR检测等方法,对该规模化羊场发病羊只进行诊断。结果表明:临床症状观察和病理剖检初步诊断该羊场发病羊疑似支原体和魏氏梭菌混合感染;支原体PCR检测未检测出支原体特异性阳性条带,细菌分离培养、生化特性鉴定确诊为魏氏梭菌感染,最终确诊造成该羊场羊只发病死亡的原因为魏氏梭菌感染。     

溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】构建溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素(LktA)原核表达系统,表达融合蛋白并进行纯化和鉴定,为溶血性曼氏杆菌检测方法的建立提供物质基础。【方法】设计并合成特异性引物,PCR扩增羊溶血性曼氏杆菌lkta截短基因;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对PCR产物和pET-28b(+)载体进行双酶切,用T4 DNA连接酶将溶血性曼氏杆菌lkta截短基因克隆到pET-28b(+)载体;使用IPTG诱导融合蛋白LktA的表达。通过Ni²⁺亲和层析纯化后采用SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行鉴定。用融合蛋白LktA免疫4月龄健康雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体,4次免疫完成后进行抗体效价测定。【结果】测序结果表明,构建的表达载体中溶血性曼氏杆菌lkta基因序列正确;融合蛋白LktA的分子质量约为30 ku,在大肠杆菌中高效表达并以包涵体形式存在,在变性条件下纯化融合蛋白LktA电泳图显示条带单一,确定其纯度>90%;纯化的融合蛋白LktA可与His抗体进行特异性结合。将纯化的融合蛋白LktA免疫新西兰大白兔后成功制备出多克隆抗体,抗体效...     

溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研制及初步应用

在溶血性曼氏杆菌PCR检测方法研究的基础上,进行溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研究及初步应用.结果表明,试剂盒特异性好,批内和批间的试剂盒无差异;试剂盒在-20℃可保存30个月,4℃可保存12个月;应用试剂盒从1000多份临床样品中筛选分离到6株溶血性曼氏杆菌.     

肉牛克雷伯氏菌和溶血性曼氏杆菌混合感染的实验室诊断

2017年12月,大庆安达市某牛场发生一起以30~50日龄哺乳犊牛呼吸困难、流鼻涕、食欲减退和高死亡率为特征的传染病,发病率为30%,死亡率达50%以上,给牛场造成了很大的经济损失。本试验通过临床症状观察、病畜剖检、细菌分离鉴定、PCR诊断等实验室诊断方法,最终确诊为牛流克雷伯氏菌与溶血性曼氏杆菌混合感染。并对分离细菌进行药敏试验,结果显示,硫酸链霉素、和氟苯尼考对溶血性曼氏杆菌和牛克雷伯氏菌高度敏感,而庆大霉素和卡那霉素耐药,从此次试验中总结出肉牛溶血性曼氏杆菌临床症状与多杀性巴氏杆菌症状有许多相似之处,所以必要时要进行实验室PCR诊断来确保万无一失,肉牛克雷伯氏菌在牛只应激抵抗力低下时极其易感,要做好预防措施,一旦发病及时治疗。     

溶血性曼氏杆菌致病机制的研究进展

曼氏杆菌病是牛、羊等反刍动物的重要呼吸道传染病,给养牛和养羊业带来较大的经济损失,溶血性曼氏杆菌是该病的病原,作者对其生物学特性、临床症状、毒力因子、致病机制等进行简要概述,为进一步深入研究提供参考。     

两株羊溶血性曼氏杆菌的分离及其生物学特性研究

为了分离新型曼氏杆菌并研究其生物学特性,试验对从两例山羊病例中分离出的相似细菌进行纯化培养,通过革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA基因序列测定、多位点序列分型法(MLST)鉴定、血清型鉴定、药敏试验等方法研究其生物学特性。结果表明:分离得到2株革兰氏阴性菌,2株细菌的生化试验和16S rDNA基因序列分析鉴定符合溶血性曼氏杆菌的特点,将其分别命名为201705YF和201805YS;对2株细菌进行血清型1型、2型和6型的多重PCR鉴定,201705YF为血清型2型,而201805YS的1型、2型和6型血清型检测为阴性;对2株细菌的7个管家基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf进行扩增并测序,菌株201705YF对应的7个管家基因的序列号为50,20,15,19,15,17,19,菌株201805YS对应的7个管家基因的序列号为1,2,20,2,1,1,1,这2株细菌的基因型为新基因型,即ST50和ST51;2株细菌对左氧氟沙星、卡那霉素、多黏菌素B、氟苯尼考、诺氟沙星、多西环素、美洛西林、环丙沙星、头孢哌酮等抗生素敏感,但201705YF对丁胺卡那耐药,201805YS对庆大霉素、新霉素、妥布霉素耐药。说明从送检病死山羊中分离出的2株细菌为不同血清型和新ST型的溶血性曼氏杆菌,为溶血性曼氏杆菌进化和流行病学关系研究提供了新的相关研究数据。     

江苏地区羊鼻腔7种病原体感染的调查

为了解江苏省羊鼻腔传染性疾病的病原分布情况,于2020年冬季(11月份)采集江苏省地区多个地级市11家羊场的269份鼻腔拭子,采用PCR方法对多种病原体进行检测,分析7种呼吸道病原体在鼻腔分布的特征。结果表明：269份鼻腔拭子中,7种病原体检出率分别为溶血性曼氏杆菌(243份,90.3%),绵羊肺炎支原体(197份,73.2%),乳链球菌(138份,51.3%),多杀性巴氏杆菌(44份,16.3%),羊口疮病毒(44份,16.3%),肺炎克雷伯菌(22份,8.2%)和山羊副流感病毒3型(6份,2.2%)。其中南通(海门)、南京和淮安等市与泰州和连云港等市相比鼻腔病原的阳性率更高,检出病原种类数量更多。另外,江苏地区羊鼻腔病原呈混合感染状态,混合感染率达到82.5%。对阳性病原进行相关性分析发现,溶血性曼氏杆菌和绵羊肺炎支原体有超过50%的几率存在显著的共存关系(R=0.756,P<0.000 1)。本研究结果初步明确了江苏地区冬季羊的鼻腔病原分布情况,为进一步对羊呼吸道病原感染的防控提供了参考。     

重庆地区羊传染性脓疱与病原菌混合感染的检测与分析

采集山羊口唇部痂皮,通过PCR检测、MDBK细胞培养、电镜观察、间接免疫荧光(IFA)检测对羊传染性脓疱病毒进行系统鉴定,同时,分离培养病灶部位主要病原菌,进行分子鉴定、致病性和药敏试验检测,初步分析病原特性。结果表明,共分离到1株羊传染性脓疱病毒,3种病原菌。通过对病原菌16SrDNA基因序列比对分析,发现其分别与多动物链球菌、金黄色葡萄球菌和溶血性曼氏杆菌同源性较高,在系统进化发育树中分别与其聚为一簇。致病性分析,发现多动物链球菌和溶血性曼氏杆菌对小鼠的致死率高达100%。3种病原菌主要侵染部位为小鼠心脏、肝脏和肺脏,能够引起肺脏和肝脏明显病变。药敏试验表明,3种菌均对舒巴坦、阿米卡星和培氟沙星等6种药物高度敏感。本研究首次从羊传染性脓疱病变部位分离到多动物链球菌、金黄色葡萄球菌和溶血性曼氏杆菌,为该病在重庆地区的流行特点和防治技术研究提供理论依据。