蚕种催青中几个关键胚胎的鉴定

蚕种胚胎解剖鉴定是蚕种催青工作中极为重要的一环,所有的催青技术处理都要根据解剖鉴定情况来决定。这就要求对胚胎的发育进度作出准确判断,从而给予相应的技术处理。在蚕种催青中,丙2、戊3、己3、己4等几个胚胎对蚕种整体发育至关重要,是蚕种发育进程中的关键胚胎,需给予其它胚胎显著不同的温度、光线等环境条件,如果鉴定不准确,导致催青技术处理不当,将严重影响胚胎的发育整齐度,降低一日孵化率。本文作者根据多年催青经验,归纳总结了这几个关键胚胎的重要特征,有助于蚕种关键胚胎的准确鉴定。     

猪胚胎冷藏前途光明

美国农业部的科学家成功地完成了几项有关保存猪胚胎的试验,取得了科学上的突破。生理学家ＪＲＤｏｂｒｉｎｓｋｙ报告,美国农业部农业研究服务中心的研究人员经过多年的研究首次从经过稳定处理法冷藏过的胚胎生产出了活仔猪。其过程是,将胚胎置于一塑料细管,浸入液氮之中。为防止胚胎细胞在冷藏过程中被破坏,胚胎要经过稳定化处理,然后将其冷冻为一种固态,但不能结成冰晶(玻璃化)。经过不定期的贮存后,对装有冷冻胚胎的塑料细管加温,取出其中的胚胎,将其植入受体母猪。在验证这一过程的第一个试验中,共对5头受体母猪植入了冷冻胚胎,其中二…     

进口奶牛冻胚一步解冻移植效果的研究

冷冻胚胎移植效果不仅能检验胚胎冷冻保存技术的可靠性,且直接影响牛胚移技术的普及应用与商业利益。与传统的胚胎冷冻一解冻处理技术相比较,牛冷冻胚胎解冻后立即移植给受体牛更适于现场操作,简化了移植前胚胎的分步脱甘油处理,具有省时、不需专门仪器设备等优越性。如果直接移植效果接近或超过冷冻精液人工授精技术水平（情期受胎率平均55％）,则对提高冷冻胚胎的利用率,增进国际问的引种,以及形成胚胎产业化、推动胚胎移植技术商业化具有重要意义。     

热应激对小鼠胚胎细胞HSP70表达和超微结构的影响

本研究旨在确定体外培养的小鼠胚胎细胞合成HSP70的时期,研究热应激对该阶段胚胎细胞超微结构的影响.将合子和体外发育至2-细胞、4-细胞、8～16-细胞及囊胚阶段的胚胎分别进行37、39和41℃的热应激处理,用免疫荧光细胞化学法检测胚胎细胞中HSP70的诱导表达;将体外培养至早期囊胚的小鼠胚胎分别施以39℃2h和41℃2h处理,分别在热应激后0和2h时收集胚胎,制作超薄切片,用电子显微镜观察胚胎细胞的超微结构变化.在各细胞期胚胎中,37℃组胚胎HSP70表达阴性(一);39℃组胚胎,从8～16-细胞开始呈现弱表达(+),囊胚呈阳性表达(++);41℃组的胚胎从4-细胞开始呈现弱阳性表达(+),8～16-细胞胚胎和囊胚呈阳性表达(++).39和41℃热应激处理的小鼠早期囊胚超微结构和对照组均发生明显的变化,但经37℃恢复培养2h后,39℃组胚胎的各细胞器超微结构恢复正常,而41℃组胚胎未能恢复.结果表明,小鼠胚胎从4-细胞期有HSP70的诱导合成,在囊胚期诱导合成最多;热应激使胚胎亚细胞结构出现退行性变化,轻度退行性变化是可逆的.     

Scriptaid对猪移植体细胞核在胚胎外发育的影响

组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)是调控基因的关键蛋白酶,乙酰化是一种可逆的蛋白共价修饰。组蛋白去乙酰化酶可以改变特定基因的转录和表达水平,诱导细胞的分化和凋亡。为了检测一种低毒新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid对克隆猪胚胎发育的影响,进行了不同浓度和不同时间的处理,并在体外检测了胚胎分裂率和囊胚发育能力。研究以对照试验作为基础,以凌源禾丰种猪场长白猪胎儿成纤维作为供体细胞,然后通过体细胞核移植(SCNT)技术获得体外发育胚胎。将重构胚胎以不同浓度(0、200、500、700、900 nmol/L)Scriptaid处理后,并进行不同时间(0、15、36、72 h)的培养,然后通过观察不同处理浓度和处理时间下胚胎在2细胞阶段分裂率和囊胚发育率。再通过Real-time PCR检测2细胞阶段未处理组与Scriptaid处理组的Oct4、Sox2两个因子的相对表达变化。通过统计学分析发现,与未处理组相比,500 nmol/L Scriptaid处理15 h囊胚发育率显著增加(P0.05),但2细胞阶段分裂率基本不变,而未处理组克隆胚胎在囊胚期Oct4基因表达的倍数明显低于经过Scriptaid处理的克隆胚胎在囊胚期的表达倍数(P0.05),这说明经过500 nmol/L Scriptaid处理后,克隆胚胎的Oct4表达量明显提高。未经过处理的克隆胚胎在囊胚期Sox2基因的表达倍数和经过Scriptaid处理的克隆胚胎在囊胚期Sox2基因的表达倍数有差异但是差异不明显,这说明经过500 nmol/L Scriptaid处理之后,基因Sox2表达虽然有提高,但总体来说和未处理的胚胎相比差异不大(P0.05)。     

细胞松弛素B对猪孤雌胚胎和体外克隆胚胎发育能力的影响

为探讨细胞松弛素B（cytochalasin B,CB）对猪孤雌胚胎和克隆胚胎发育能力的影响,本研究通过在猪体外胚胎培养基中添加不同浓度CB以及不同孵育时间的处理,筛选出CB对猪早期胚胎发育的最适浓度和最佳孵育时间,同时通过Hoechst33342染色检测猪体外囊胚孵化期的细胞数差异,进一步研究CB对孤雌胚胎和克隆胚胎发育的影响。结果显示,培养基中添加CB浓度为7.5 μg/mL时孤雌胚胎和克隆胚胎的卵裂率分别为85.00%和90.23%,囊胚率为35.68%和42.58%,均显著高于其他各组（P < 0.05）;采用7.5 μg/mL CB处理电激活后的孤雌胚胎和克隆胚胎,孤雌胚胎孵育4 h组的卵裂率（83.80%）和囊胚率最高（35.39%）,与其他各组差异显著（P < 0.05）,而克隆胚胎孵育6 h组的卵裂率（83.98%）和囊胚率最高（55.62%）,与其他各组差异显著（P < 0.05）。此外,Hoechst33342染色结果显示,未添加CB处理的孤雌胚胎在囊胚孵化期的细胞平均数为28个,CB处理组的孤雌胚胎和克隆胚胎细胞平均数分别为36和52个,处理组和未处理组细胞数差异显著（P < 0.05）。结果表明,猪体外孤雌胚胎用7.5 μg/mL CB 处理4 h可获得较高的卵裂率和囊胚率;体外克隆胚胎用7.5 μg/mL CB 处理6 h卵裂率及囊胚率最高,且囊胚期内细胞团细胞总数最多。CB处理有利于体外胚胎早期发育,提高克隆胚胎移植受孕率。     

细胞松弛素B对猪孤雌胚胎和体外克隆胚胎发育能力的影响

为探讨细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对猪孤雌胚胎和克隆胚胎发育能力的影响,本研究通过在猪体外胚胎培养基中添加不同浓度CB以及不同孵育时间的处理,筛选出CB对猪早期胚胎发育的最适浓度和最佳孵育时间,同时通过Hoechst33342染色检测猪体外囊胚孵化期的细胞数差异,进一步研究CB对孤雌胚胎和克隆胚胎发育的影响。结果显示,培养基中添加CB浓度为7.5μg/mL时孤雌胚胎和克隆胚胎的卵裂率分别为85.00%和90.23%,囊胚率为35.68%和42.58%,均显著高于其他各组(P0.05);采用7.5μg/mL CB处理电激活后的孤雌胚胎和克隆胚胎,孤雌胚胎孵育4 h组的卵裂率(83.80%)和囊胚率最高(35.39%),与其他各组差异显著(P0.05),而克隆胚胎孵育6 h组的卵裂率(83.98%)和囊胚率最高(55.62%),与其他各组差异显著(P0.05)。此外,Hoechst33342染色结果显示,未添加CB处理的孤雌胚胎在囊胚孵化期的细胞平均数为28个,CB处理组的孤雌胚胎和克隆胚胎细胞平均数分别为36和52个,处理组和未处理组细胞数差异显著(P0.05)。结果表明,猪体外孤雌胚胎用7.5μg/mL CB处理4 h可获得较高的卵裂率和囊胚率;体外克隆胚胎用7.5μg/mL CB处理6 h卵裂率及囊胚率最高,且囊胚期内细胞团细胞总数最多。CB处理有利于体外胚胎早期发育,提高克隆胚胎移植受孕率。     

胰蛋白酶处理不影响牛体外受精胚胎的活力

本研究按国际通用的方法用０．２５％胰蛋白酶溶液清洗牛体外受精胚胎，然后冷冻或在室温下短期保存胚胎，检查胚胎在体外和体内的发育率，结果表明胰蛋白酶处理的胚胎与未处理胎的发育相似，说明这样的处理对胚胎活力无不良影响。     

小鼠胚胎DNA氧化损伤模型的建立

为了研究胚胎DNA损伤修复机制,试验以H2O2为DNA损伤诱导剂,建立小鼠胚胎DNA氧化损伤模型,采用不同浓度H2O2培养小鼠受精卵,观察其对小鼠胚胎发育能力的影响;再通过免疫荧光方法检测γH2AX和ρATM蛋白的表达状况,以判断H2O2处理所导致的胚胎DNA损伤情况及较适宜的诱导条件。结果表明:1.5~2.4μmol/L H2O2处理对小鼠胚胎发育能力具有影响,与KOSM(-)对照组相比,H2O2处理组小鼠胚胎的分裂率、囊胚率呈下降趋势,其中1.8~2.4μmol/L H2O2处理组的胚胎分裂率、囊胚率呈显著下降趋势(P0.05)。免疫荧光法检测发现KOSM(-)对照组中,2-细胞期胚胎的γH2AX焦点数多于1-细胞期胚胎,ρATM在两个时期的胚胎中未检测到。γH2AX和ρATM在1.5,1.8μmol/L H2O2处理组的1-细胞期胚胎中均未检测到;2-细胞期胚胎表达γH2AX,未检测到ρATM。2.1,2.4μmol/L H2O2处理组的1-细胞和2-细胞期胚胎均有γH2AX和ρATM表达,其中2.4μmol/L H2O2处理组两个时期胚胎的γH2AX焦点数多于2.1μmol/L H2O2处理组。说明1.5~2.4μmol/L H2O2处理会影响小鼠胚胎体外发育能力,2.1,2.4μmol/L H2O2处理可诱导小鼠胚胎发生DNA双链断裂现象。     

牛胚胎回收、移植及体外受精器具的开发

1牛胚胎回收与移植器具器材牛的胚胎移植技术由供体牛的超数排卵、胚胎回收、胚胎形态学鉴定、胚胎保存以及受体牛的同期发情处理与胚胎移植等技术组成。现将有关应用于这一过程中的胚胎回收和移植器具器材介绍如下。1．1子宫颈粘液除去器牛胚胎一般是在受精后第7～8d用非手术法灌流子宫后回收的。这一时期,为防止外界异物侵入     

曲古抑菌素(Trichostatin)A对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育能力的影响

曲古抑菌素A（Trichostatin A,TSA）是一种组蛋白去乙酰化抑制剂,用TSA处理鼠核移植胚胎可显著提高胚胎的囊胚率。检验TSA对猪卵母细胞体外成熟以及孤雌胚胎发育的影响。在猪卵母细胞体外成熟液及胚胎培养液中添加TSA,比较不同浓度TSA对卵母细胞成熟的影响,不同浓度TSA对孤雌胚胎发育能力的影响以及TSA处理不同时间对孤雌胚胎发育能力的影响。结果发现：（1）5nmol／LTSA处理对卵母细胞体外核成熟无显著影响,却显著提高了卵母细胞孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率（P〈0．05）;（2）50nmol／LTSA处理显著提高了孤雌胚胎的卵裂率及囊胚率（P〈0．05）;（3）50nmol／LTSA处理24h能显著提高胚胎的卵裂率及囊胚率（P〈0．05,82．1％&#177;2．6％和37．4％&#177;3．1％）。结果表明TSA对猪卵母细胞的体外成熟及孤雌胚胎发育具有显著的促进作用。5nmol／L的添加量对卵母细胞的体外胞质成熟具有促进作用;胚胎培养基中添加50nmol／LTSA处理24h能提高孤雌胚胎的发育能力。     

超数排卵对家兔早期胚胎体外发育的影响

为探讨超数排卵对家兔早期胚胎体外发育能力的影响,收集自然发情组和超数排卵处理组交配72 h后家兔胚胎,对经筛选合格的胚胎以小鼠成纤维细胞为饲养层进行体外培养,以自然发情交配的家兔胚胎为对照,观察培养96 h贴壁情况和内细胞团传代能力.超数排卵处理的家兔交配后经筛选所获得的可用胚胎数量增多;其96 h贴壁率和成功传代内细...     

氯化铝对非洲爪蟾胚胎神经发育的影响

为探讨氯化铝对非洲爪蟾胚胎神经发育的影响,以不同浓度(1和2 mmol/L)AlCl3溶液处理原肠期的胚胎,采用免疫组化方法检测铝处理对胚胎体节发育的影响;采用整胚原位杂交方法检测神经发育标志基因Sox3、NeuroD的表达;利用BrdU掺入法检测细胞增殖;利用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果显示:氯化铝处理的胚胎体轴弯曲、缩短,神经褶未完全融合。铝处理后胚胎体节发育未受明显影响;神经发育相关基因sox3、neuroD的表达明显减少;细胞增殖减少,凋亡增加。结果提示:氯化铝通过抑制增殖,促进凋亡而影响非洲爪蟾胚胎神经发育。     

预热诱导HSP70表达对高温引致胚胎损伤的保护作用

用37℃2 h条件下体外培养的小鼠囊胚作为对照,将体外培养至囊胚期的小鼠胚胎分别施以38℃2 h、39℃2 h、40℃2 h的预热应激处理,以观察热休克蛋白70(HSP70)表达对高温所致胚胎损伤的影响。用W estern-b lot技术检测小鼠胚胎内HSP70的表达,然后分别将预热胚胎和对照组胚胎置于42℃高温下处理3 h,用台盼兰拒染法检测胚胎存活率,判断HSP70表达对胚胎抵抗高温损伤有无保护作用。结果显示:39℃热应激处理2 h后,HSP70表达量达到最高水平,与对照组差异极显著(P<0.01);38℃热应激处理2 h和40℃热应激处理2 h组HSP70表达与对照组相比均有显著(P<0.05)增加;预热诱导组胚胎存活率明显(P<0.05)高于对照组,其中以39℃2 h组最高。提示HSP70的高表达可以抵抗胚胎对外界不良因素的刺激。     

胚胎冷冻

在最近5年中,冷冻胚胎技术的进展提高了胚胎移植的成功率,使养牛业更广泛地采用了这项技术。最近一年半对胚胎一次解冻给了很大的注意。这样就减少了解冻时间。这种快速解冻过程,可使移植者不需处理胚胎,因而减少了移植冻胚的成本。     

牛胚胎移植技术及其主要影响因素

胚胎移植（ET）是继人工授精技术之后家畜繁殖技术领域的又一次革命。胚胎移植是指将供体早期胚胎从其体内取出或体外生产的胚胎,移植到另一头同种且与胚胎发育阶段相符的受体子宫内，使之继续妊娠发育为新个体的过程。基本程序包括：供体和受体的选择、超数排卵处理、供体母畜的配种、胚胎的收集、胚胎的检查、胚胎的保存与培养、胚胎的移植、供体和受体的术后观察及饲养管理。     

家兔胚胎细胞周期的调控

本实验用化学药物对家兔胚胎细胞周期进行调控,以建立细胞周期同期化的方法.实验结果表明(1)用1.00μg/ml噻氨酯哒唑(nocodazole)处理家兔16-细胞胚胎12h,可使胚胎细胞完全同期化于M期;(2)细胞周期同期化于M期的家兔胚胎细胞用0.20μg/ml阿菲迪霉素(aphidicolin)处理8h,可完全抑制DNA的合成,使胚胎细胞同期化于G1期;(3)细胞周期同期化于M期的家兔胚胎细胞在体外培养8h后,然后用1.00μg/ml环己酰胺(cycloheximide)处理8h,可使胚胎细胞同期化于G2期.本研究的结果还表明细胞周期同期化处理不影响胚胎的体外发育,但胚胎移植后的产仔率明显低于对照组(P＜0.05).     

甘氨酸对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响

本实验旨在探究甘氨酸(Gly)对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响。实验分为对照组、H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组,对照组胚胎不经H_2O_2处理培养于M16培养液中;其他2组胚胎均置于25μmol/L的H_2O_2中孵育30 min,然后,H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组分别在M16培养液和最佳浓度Gly的培养液中进行培养。通过2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定胚胎内部的活性氧水平和巢式PCR法检测内源抗氧化酶基因的表达。结果表明:胚胎经不同浓度Gly处理后,4 mmol/L Gly处理组的4-cell发育率(P0.05)和囊胚发育率(P0.05)均高于对照组;氧化应激胚胎经4 mmol/L的Gly处理后,胚胎的4-cell发育率(P0.01)和囊胚发育率(P0.05)显著高于H_2O_2处理组;H_2O_2+Gly处理组的活性氧水平显著低于H_2O_2处理组(P0.05);Gly能上调CAT(P0.05)和SOD1(P0.01)基因的表达,而对SOD2基因的表达无影响(P0.05)。综上可知,添加Gly可以有效提高胚胎的抗氧化能力,在胚胎体外培养过程中添加Gly的最适宜浓度为4 mmol/L。     

杜泊绵羊胚胎移植技术在哈密地区应用效果观察

2014年在新疆哈密地区伊吾县喀尔里克公司进行绵羊鲜胚移植。受体羊采用两次注射PG法同期发情处理本地哈萨克母羊460只,发情389只,同期发情率为84.5%。供体羊采用PG与阴道栓埋置法同期发情处理,结合FSH递减法超排处理。结果显示:79只供体羊冲出可用胚胎485枚,冷冻胚胎42枚,移植可用胚胎443枚,移植受体羊375只,移植A级胚胎302枚,B、C级胚胎141枚。通过移植,A级胚胎利用率与受胎率明显高于B、C级胚胎,差异均显著(P0.05);71只羊采用PG法,8只羊CIDR法同期处理超排可用胚胎6.24枚与5.25枚,差异不显著(P0.05);供体羊平均超排可用胚胎6.1枚,移植受胎率达76.2%,羔羊成活率为95%。     

不同处理方法对萨福克肉羊超排回收效果的影响

对119只萨福克肉羊进行超排处理,其中48只为首次超排处理,71只为第二次超排处理。结果表明,首次超排胚胎回收率显著高于二次超排胚胎回收率(P＜0.05);首次超排和二次超排间供体羊平均黄体数、胚胎可用率均差异不显著(P＞0.05);供体羊经第二情期或埋栓同期发情处理后均能达到预期的效果,但首次超排和二次超排供体羊胚胎回收率均差异显著(P＜0.05)。