茶叶抗菌肽粗提物的抑菌活性及其对冷却肉保鲜的影响

为了制备茶叶抗菌肽粗提物并将其应用在冷却肉保鲜上,以龙井茶叶为材料提取茶叶抗菌肽粗提物,采用平板抑菌法检测茶叶抗菌肽粗提物的抑菌活性,通过细胞膜渗透率、磷离子泄漏、DNA结合和透射电子显微镜等指标分析茶叶抗菌肽粗提物对细菌的作用机制,通过微生物菌落数量和pH值两个指标评价茶叶抗菌肽粗提物对冷却肉的防腐保鲜效果。结果表明:提取的茶叶抗菌肽粗提物主要包括分子量小于18.4 ku的多肽,其对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均具有抑菌活性,可造成细菌细胞膜渗透率增强,引起细菌细胞外磷离子浓度增加,造成细菌细胞膜不完整、出现破损,但不与细菌基因组DNA结合。茶叶抗菌肽粗提物可以显著抑制冷却肉中微生物的生长,延缓pH值上升,延长保鲜时间,对冷却肉具有防腐保鲜作用,具有较高的开发利用价值。     

鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法的建立

【目的】建立鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法。【方法】通过腹腔注射酪蛋白生理盐水,从鸡人工腹水中得到白细胞;将收集的白细胞,通过超声波反复破碎、体积分数10%乙酸浸提、低温高速离心、旋转蒸发除去乙酸和冷冻干燥等方法,得到抗菌肽粗提物;将得到的粗提物,经CM-Sepharose Fast Flow弱酸性阳离子交换层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化,收集分离的各组分,使用微量琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性和最小抑菌浓度。【结果】共获得鸡抗菌肽粗提物0.270 g,经RP-HPLC分离纯化,抗菌肽离子交换阳性组分共分离出18个峰,其中6个峰对3种细菌均表现较强的抑菌活性,对鸡大肠杆菌E.coliO78(峰13)、金黄色葡萄球菌S.au-reus1056MRSA(峰15)和白色念珠菌C.albicansATCC10231(峰15)的最小抑菌浓度分别为0.627,0.001和0.035μg/mL。【结论】该法可以在实验室中用于鸡抗菌肽的提取及活性鉴定。     

哈氏弧菌诱导布氏石斑鱼头肾提取物的抗菌活性研究

以致病性哈氏弧菌（Vibrio harveyi）腹腔注射布氏石斑鱼（Epinephelus bleekeri）18h后,取布氏石斑鱼头肾制备头肾粗提物,并对该粗提物的抗菌活性进行研究,结果表明：布氏石斑鱼经哈氏弧菌诱导后,其头肾粗提物不仅对金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）等革兰氏阳性菌有良好抑制作用,而且对大肠杆菌D31（Escherichio coli D31）、哈氏弧菌和溶藻弧菌（V.alginolyticus）等革兰氏阴性菌也有良好抑制效果;利用电泳凝胶琼脂糖弥散法检测发现,头肾粗提物中具有多种对大肠杆菌D31有较强作用效果的蛋白类抗菌物质;切胶回收AU—PAGE凝胶上的抗菌组分,利用SDS—PAGE凝胶检测各抗菌活性组分的分子质量大小依次约为：10．9KD,10．0KD,8．1KD,7．2KD,6．3KD,由于这些抗菌活性成分可被蛋白酶破坏,且分子质量均接近或低于10KD,可初步将其认定为抗菌肽。     

留兰香提取物体外抗猪细小病毒的作用

通过观察病毒引起的细胞病变效应(Cytopathogenic effect,CPE)和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测留兰香提取物抗猪细小病毒(PPV)活性,计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50％inhibitingconcentration,IC50),并从药物预防给药(抗病毒吸附)、直接杀灭及治疗给药(抑制病毒在细胞内的生物合成)3个方面分析留兰香提取物抗PPV活性的作用机制。结果显示：留兰香挥发油在这3种作用方式中对PPV均有抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.008 0 mg/ml、0.001 9 mg/ml、0.003 6 mg/ml,治疗指数(TI)分别为25.88、108.95、57.50;留兰香水提液和粗提物对PPV直接杀灭的半数有效浓度(IC50)分别为0.034 0 mg/ml、0.356 0mg/ml,治疗指数(TI)分别为79.18、8.37;留兰香水提液和粗提物抑制病毒在细胞内生物合成的半数有效浓度(IC50)分别为0.043 0 mg/ml、0.063 0 mg/ml,治疗指数(TI)分别为62.60、47.27,留兰香水提液和粗提物均无抗病毒吸附作用。表明留兰香挥发油在对PPV的3种作用方式中均有安全高效活性,留兰香水提液和粗提物对PPV侵入细胞无阻止作用,但在直接灭活和抑制其在细胞内的增殖方面均有较高的活性。     

抗菌肽的活性机制及其在养殖业中的应用研究进展

抗菌肽是一类生物体内产生的具有多种生物活性的小分子多肽,具有广谱的抑制细菌、真菌、病毒、寄生虫甚至肿瘤细胞、癌细胞的生物学活性。因其具有良好的抗菌活性和独特的杀菌机制,在养殖业中的应用越来越广泛。综述了天然抗菌肽的活性机制及其在畜(猪)、禽、反刍动物和水产养殖业中的应用进展,旨在为抗菌肽的功能开发及推广应用提供参考。     

鳄龟不同组织抗菌肽粗提物的初步研究

采用2种不同的方法从诱导后的稚鳄龟组织内分离抗菌肽,其中5%乙酸浸提法成功地分离出了具有抗菌活性的抗菌肽粗提物。此外,还研究了鳄龟体内产生抗菌肽的能力及抗菌效果。     

1株天然抗菌肽的纯化及活性检测

从牛血液中制备血红蛋白粗提物,运用离子交换层析和反相高压液相色谱法纯化抗菌肽,用琼脂糖弥散法测定其抗菌活性.结果表明:通过离子交换层析获得的阳离子峰具有抗菌活性,通过反相高效液相色谱对阳离子峰进行分离,获得6个峰,其中F1、F2、F4和F6峰对大肠杆菌具有活性,F1、F2和F6对金黄色葡萄球菌具有活性,仅F2对白色念珠菌具有活性,表明F2抗菌肽具有较为广谱的抗菌活性.     

苦豆子蛋白粗提物抗菌活性的初步研究

苦豆子种子经硫酸铵分级沉淀得到苦豆子蛋白粗提物.分别采用平板扩散法对苦豆子蛋白粗提物进行了抑制2种典型真菌(意大利青霉菌和交格链孢菌)的活性实验.结果表明,0.5 g/mL 30;、40;和50;硫酸铵沉淀的苦豆子蛋白粗提物对两种真菌都有很好的抑制作用.凝集活性检测实验表明,苦豆子种子抗菌蛋白有可能是凝集素.苦豆子蛋白粗提物的提取和抗真菌活性的研究可为以后抗菌药物的研制以及培育抗菌转基因植物提供基础资料.     

3种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

为研究板蓝根、甘草和鱼腥草3种中药粗提物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,采用体外细胞培养法,在Marc-145单层细胞上,对3种中药粗提物进行直接抗PRRSV活性试验.结果表明,板蓝根和甘草粗提物阻断PRRSV的最佳质量浓度分别为3.125、0.391mg/mL,抑制PRRSV感染的最佳质量浓度分别为3.125、0.782mg/mL,直接灭活PRRSV的最佳质量浓度分别为1.563、0.782mg/mL;鱼腥草粗提物质量浓度为0.782mg/mL时,阻断和抑制PRRSV感染的效果最好,但对PRRSV没有直接灭活作用.3种中药粗提物均有不同程度的体外抗PRRSV活性作用,其中板蓝根的效果最好.     

灰葡萄孢菌不同发酵方式次生代谢产物的生物活性

对灰葡萄孢菌固体和液体发酵后的次生代谢产物乙酸乙酯粗提物进行抑菌、杀虫活性研究,结果表明:用于测试的5种真菌病原菌中,固体发酵粗提物对烟草赤星病菌和稻瘟病菌的菌丝生长有很高的抑制活性,对番茄早疫病菌、菜豆炭疽病菌、梨黑星病菌和稻瘟病菌的孢子萌发有很高的抑制活性;液体发酵粗提物对番茄早疫病菌、梨黑星病菌的菌丝生长和菜豆炭疽病菌的孢子萌发有非常高的抑制率.对2种细菌病原菌烟草野火病菌和白菜软腐病菌,固体、液体发酵粗提物抑制生长率均高达80%以上,但固体稍高于液体发酵粗提物;在杀虫方面,固体发酵粗提物对桃蚜触杀作用明显高于液体发酵粗提物.     

益生菌增加IPEC-J2细胞表面半乳糖在抑制RV感染中的作用

轮状病毒通过识别细胞表面糖链附着于肠上皮细胞,一些肠道内常驻菌群可以修改细胞表面糖链。以3种益生菌上清孵育猪小肠上皮细胞IPEC-J2,猪轮状病毒(PRV)感染细胞。采用凝集素荧光技术测定各处理组IPEC-J2细胞表面半乳糖,检测对应轮状病毒滴度和RV含量变化。结果表明,对照组PRV TCID_(50)·0.1 mL~(-1)为10~(-7.15±0.14),干酪乳杆菌组TCID_(50)·0.1mL~(-1)为10~(-3.875±0.125),食淀粉乳杆菌PRV TCID_(50)·0.1 mL~(-1)为10~(-4.125±0.138),枯草芽孢杆菌PRV TCID_(50)·0.1 mL~(-1)为10~(-4.16±0.144)。3组益生菌上清组在RV感染48 h内,RV量显著低于未处理组。凝集素荧光标记表明,3株益生菌上清均可改变细胞表面半乳糖含量。干酪乳杆菌、食淀粉乳杆菌和枯草芽孢杆菌上清可增加IPEC-J2细胞表面半乳糖含量,提高细胞抗RV感染能力,阻断RV黏附,保护肠道上皮细胞。     

短短芽胞杆菌FJ AT-0809-GXL代谢产物活性物质提取方法的优化

为分析短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX代谢产物中的活性物质成分,对其提取方法进行了优化,大孔树脂提取法为最佳的提取方法,其活性物质得率为1.593 g·L-1,且抑菌活性高于氯仿萃取法所得的活性物质的活性.确定了短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX代谢产物活性物质收集的最佳方案为:将短短芽胞杆菌FJAT-080...     

猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救

 【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50?mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)不能检测出病毒。【结论】成功构建了猪瘟病毒C株感染性克隆;拯救C株时以SK6细胞电转较好;带毒细胞传代培养C株有利于获得较高滴度的病毒。     

小单孢菌227所产生物活性物质的抑菌特性研究

[目的]研究小单孢菌227所产生物活性物质的抑菌特性。[方法]分别从小单孢菌227摇瓶发酵液的上清液和菌丝体的乙醇提取液中提取生物活性物质,分别对其进行抑菌活性的测定。[结果]小单孢菌227所产生物活性物质对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌均有较强的抑制作用。该菌所产抗菌活性物质是既有脂溶性又有水溶性的多组分物质。用乙醚萃取脂溶性物质的萃取效果分别优于正丁醇、乙酸乙酯和正乙烷。对小单孢菌227菌丝体乙醇提取液与离心上清液抑菌能力比较结果表明小单孢菌227所产生物活性物质属胞外产物。[结论]小单孢菌227所产生物活性物质具有较强抑菌效果。     

柞蚕杀菌肽对桉树青枯病假单胞菌的杀菌作用

桉树、木麻黄青枯病是广东省林业主要病害、近年为害猖獗导致严重损失。本文报道柞蚕杀菌肽Ｄ对桉树、木麻黄青枯病假单胞菌的杀菌作用。以荧光黄染料隅联的杀菌肽作用于青枯病假单胞菌，用电镜及激光共焦扫描显微镜观察，发现杀菌肽能迅速地将菌体包围，作用于细胞膜，造成许多小孔并进入胞内，尔后损伤的小孔扩大形成喇叭口，内含物由此泄出胞外，最后菌体变成空囊而死亡。     

球形芽孢杆菌Bs-8093发酵上清液对青枯雷尔氏菌的抑菌作用

研究发现球形芽孢杆菌Bs-8093菌株的发酵上清液对青枯雷尔氏菌强致病力菌株有抑制作用,不同配方发酵上清液对青枯雷尔氏菌强致病力菌株F．1．2-010618-07V的校正抑制率不同,最高达82．94％,最低44．93％。采用正交试验对球形芽孢杆菌Bs-8093菌株发酵培养基进行筛选,结果表明:棉籽粉、牛肉浸膏和初始pH对 Bs-8093菌株活菌数及其发酵上清液对青枯雷尔氏菌的校正抑制率都有显著影响。试验获得的最佳摇瓶配方为: 棉籽粉5．0％、牛肉浸膏0．3％(质量分数),初始pH 7．4。     

Biological activity of peptide extracts of medicinal plants against phytopathogenic fungi and oomycetes

The biological activity of eight peptide extracts of medicinal plants is tested under laboratory conditions with the use of a number of test systems to determine their ability to inhibit growth and development of a number of phytopathogenic fungi and oomycetes. A multicomponent extract consisting of individual extracts of field horsetail, elecampane, and greater celandine is the most effective.     

香蕉枯萎病内生生防菌H4-3抑菌蛋白提取及抑菌活性研究

铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa H4-3菌株是福建省农科院农业生物资源研究所微生物研究中心从香蕉植株中分离到的一株内生菌,该菌株对香蕉枯萎病病原菌具有很强的抑菌活性,初步判断其活性物质为大分子蛋白.采用硫酸铵沉淀方法提取H4-3菌株的抑菌蛋白,研究不同硫酸铵浓度对H4-3菌株抑菌活性的影响,结果表明：随着硫酸铵浓度的提高,H4-3菌株抑菌蛋白粗提液的抑菌活性逐步提高,其盐析后的上清液抑菌活性则逐步降低,70％饱和度的硫酸铵处理即可完全沉淀.     

基于血清药理学方法的头花蓼抗炎有效提取物筛选

[目的]通过血清药理学方法,研究头花蓼不同提取物及热淋清颗粒含药血清对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)释放炎症因子的影响,筛选出头花蓼抗炎有效提取物。[方法]采用头花蓼血清药理学评价方法,10 ng/m L脂多糖(LPS)建立RAW264.7细胞炎症损伤模型,MTT法检测细胞存活率,Griess试剂法检测细胞上清液中NO的释放量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TNF-α和IL-6的释放量,以考察头花蓼水提物、水提醇沉提取物、水提醇沉沉淀物及热淋清颗粒含药血清(WEPS、PCWEPS、DPCWEPS、RLQS)对巨噬细胞释放炎症因子的影响。[结果]与模型组比较,WEPS、PCWEPS、DPCWEPS、RLQS均能显著抑制LPS刺激的RAW 264.7细胞释放炎症因子NO、TNF-α和IL-6,PCWEPS组抑制细胞释放NO、TNF-α和IL-6的作用最强。[结论]头花蓼水提醇沉提取物为头花蓼主要的抗炎有效提取物。     

Synthetic CD4 peptide derivatives that inhibit HIV infection and cytopathicity

Synthetic peptide segments of the CD4 molecule were tested for their ability to inhibit infection of CD4+ cells by the human immunodeficiency virus (HIV) and to inhibit HIV-induced cell fusion. A peptide mixture composed of CD4(76-94), and synthesis side products, blocked HIV-induced cell fusion at a nominal concentration of 125 micromolar. Upon high-performance liquid chromatography, the antisyncytial activity of the peptide mixture was found not in the fraction containing the peptide CD4(76-94) itself, but in a side fraction containing derivatized peptide products generated in the automated synthesis. Derivatized deletion and substitution peptides in the region CD4(76-94) were used to demonstrate sequence specificity, a requirement for benzyl derivatization, and a core seven-residue fragment required for antisyncytial activity. A partially purified S-benzyl-CD4(83-94) peptide mixture inhibited HIV-induced cell fusion at a nominal concentration of less than or equal to 32 micromolar. Derivatized CD4 peptides blocked cell fusion induced by several HIV isolates and by the simian immunodeficiency virus, SIV, and blocked infection in vitro by four HIV-1 isolates with widely variant envelope gene sequences. Purified CD4(83-94) dibenzylated at cysteine 86 and glutamate 87 possessed antisyncytial activity at 125 micromolar. Derivatization may specifically alter the conformation of CD4 holoreceptor peptide fragments, increasing their antiviral efficacy.