烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)ISSR反应体系的优化及遗传多样性分析

以烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)基因组DNA为模板,采用单因素和正交设计L_(16)(4~5)相结合的方法对影响ISSR-PCR反应的主要因子进行优化,并对采自东北三省烟区的20个烟草靶斑病菌菌株进行ISSR分析,建立了适宜于病菌的ISSR分子标记的最佳反应体系,即20μL的反应体系中含有模板DNA 30ng,Mg~(2+)浓度2.0mmol·L~(-1),d NTP浓度0.20 mmol·L~(-1),Taq酶1.0U,引物浓度0.4μmol·L~(-1)。利用优化的反应体系从20个ISSR引物中筛选出13个多态性和重复性好的引物,对20个烟草靶斑病菌菌株进行ISSR分析,共扩增出132条带,多态条带比率为73.48%,在相似系数0.74处将其划分为3个类群,其中LTL-7、HLK-1、HBX-2、HBX-4、LFC-9、LTL-5、LTL-9和JLH-1共8个菌株被划分在IGⅠ中;IGⅡ中包括LTL-6、LKD-8、HLK-3、LTL-115、LTL-2、LFC-4和LTL-8共7个菌株;其余5个菌株分别为LTL-66、LTL-111、HLK-4、JLH-3和LTL-22被划分到IGⅢ中。分析结果表明ISSR遗传聚类组群与菌株的地理来源具有一定的相关性,而与菌株的致病性无明显的相关性。     

云南烟草靶斑病(Rhizoctonia solani Kühn)病原鉴定及其融合群研究

2016年云南省普洱市和临沧市烟草种植区大面积发生叶部病害,经鉴定为烟草靶斑病(Rhizoctonia solani Kühn),此病为云南烟区首次发现。广泛采集2个市的烟草靶斑病病叶标本59份,采用常规组织分离法获得58个菌株,将所获菌株分别与立枯丝核菌标准融合群菌株AG-1-IA、AG-2-1、AG-3、AG-4-HGⅡ、AG-5、AG-6GV、AG-8和AG-9进行载玻片对峙培养,并进行菌丝融合观察,结果表明:58个菌株均属于立枯丝核菌AG-3标准融合群,且不与其他标准融合群发生融合反应。随机选取云南省6个地区各1个代表性菌株,以待测菌株的基因组DNA为模板,利用真菌核糖体基因转录间隔区(ITS)通用引物ITS1和ITS4对病菌rDNA ITS序列进行PCR扩增,扩增产物序列在Gen Bank中进行BLAST同源性检索比对。应用MEGA 6.06软件和NeighborJoining法,分别计算遗传距离及构建系统发育进化树分析亲缘关系。基于5.8S rDNA-ITS区序列的系统发育树进一步分析,结果表明,Rhizoctonia solani菌株的ITS序列可明显的分为2个支系,同一菌株的不同ITS序列可分别存在不同的分支中,但所有菌株的序列均隶属相同的融合群即AG-3,且隶属相同融合群的不同菌株之间其序列的一致性可高达99%~100%。     

“嘧肽菌净”对烟草靶斑病的抑菌作用及田间药效试验

目的观察云南省墨江县烟田中烟草靶斑病的发病情况,探究烟草靶斑病菌形成担孢子的环境条件及担孢子在活体烟草上的侵染能力。方法温湿度自动记录仪监测田间形成担孢子的环境条件,收集田间担孢子回接,通过融合群鉴定和分析ITS序列的方法明确烟草靶斑病病原菌的归属关系,田间接种分析担孢子的致病性。结果明确引起烟草靶斑病的病原菌为立枯丝核菌AG-3,田间担孢子主要在5：00—9：00及20：00—23：00形成,环境条件为相对湿度100%,温度约20 ℃。田间接种试验发现担孢子可快速侵染叶片形成病斑。结论担孢子重量轻、数量大,可通过气流快速传播引起再侵染,是烟草靶斑病菌侵染的主要手段。     

7.2亿CFU/g嘧泰多抗复合微生物菌剂对烟草靶斑病和野火病的防效研究

为研究新生防制剂7.2亿CFU/g嘧泰多抗复合微生物菌剂对烟草靶斑病和野火病的防效,开展了不同药剂室内抑菌试验和田间药效试验。结果表明,7.2亿CFU/g嘧泰多抗复合微生物菌剂300倍液对烟草靶斑病病原菌和野火病病原菌的室内抑菌率均在60%以上;第3次药后,7.2亿CFU/g嘧泰多抗复合微生物菌剂300倍液对烟草靶斑病和野火病的田间防效均在65%以上,持效期长。7.2亿CFU/g嘧泰多抗复合微生物菌剂可作为兼防烟草靶斑病和野火病的推荐生防药剂。     

嘧肽霉素对烟草赤星病菌的抑制作用

研究了嘧肽霉素对烟草赤星病菌的抑制作用.结果表明:在PDA培养基上共同培养时,抑菌圈直径为47.1mm;嘧肽霉素作用方式是抑制孢子萌发,使病菌菌丝生长受到限制,原生质聚集,后菌丝畸形,出现大量原生质外渗;该药液作用位点在菌体的细胞膜上,菌体失去侵染力.     

松苗猝倒病(Rhizoctonia solani Kuhn)生物防治的研究

八种供试菌和制霉菌素在平板拮抗测定中发现,23～16,49～10,绿色木霉,疣孢漆斑菌和制霉菌素对立枯丝核菌均有拮抗作用,并以23～16最明显。 苗期试验的结果表明,23～16,扩展青霉,49～10,绿色木霉防治以立枯丝核菌为主要病原的松苗猝倒病有较好的效果。23～16防效最佳,扩展青霉次之。 23～16防治松苗猝倒病的作用机制主要是阻止病原菌丝的入侵,其次是对已侵入的菌丝产生抑制作用。     

嘧肽霉素对烟草赤星病菌的作用方式与防效研究

对新型农用抗生素嘧肽霉素对真菌病害烟草赤星病的抑菌机制及田间防治效果进行了研究.结果表明,4%嘧肽霉素稀释5 000倍对烟草赤星病菌具有很强的抑制效果,对病原菌孢子萌发和形成、菌丝的生长和形态均有很明显的抑制作用;当稀释500倍时,对病原菌孢子萌发抑制率达到99%,对病原菌孢子形成抑制率在96%以上,处理48 h后对菌丝生长抑制率达到84.6%,经药液处理后菌丝出现断裂、畸形、原生质外渗,菌丝形态完全被破坏.田间防效试验表明,4%嘧肽霉素稀释100倍对烟草赤星病的防效达到80.09%,与对照药剂70%甲基托布津600倍液和0.3%科生霉素300倍液防效相当,表明嘧肽霉素作为抗病毒农药的同时也是较好的杀真菌农用抗生素.     

令箭荷花感染丝核菌(Rhizoctonia solani Kuehn)的研究

 令箭荷花(Epiphyllum ackermunnii Haw,简称令箭)属仙人掌科植物,因其叶状变态茎酷似古代的令箭,开花又如睡莲而得名令箭,有较高的观赏价值,深受花卉爱好者喜爱.生长期间,遭受丝核菌感染,观赏价值大受影响,甚至造成死亡.本文是作者1988年至1989年对该病菌所引起的症状、病原、发病的环境条件和防治措施的调查研究.     

令箭荷花感染丝核菌(Rhizoctonia solani Kuehn)的研究

令箭荷花(EpiphyllumackermunniiHaw,简称令箭)属仙人掌科植物,因其叶状变态茎酷似古代的令箭,开花又如睡莲而得名令箭,有较高的观赏价值,深受花卉爱好者喜爱。生长期间,遭受丝核菌感染,观赏价值大受影响,甚至造成死亡。本文是作者1988年至1989年对该病菌所引起的症状、病原、发病的环境条件和防治措施的调查研究。     

4种杀菌剂对烟草靶斑病菌的抑菌活性

【目的】评价菌核净、苯醚甲环唑、嘧菌酯和代森锰锌对靶斑病菌的生物活性,为防治烟草靶斑病寻找新的高效替代药剂提供参考。【方法】采用菌丝生长速率法测定苯醚甲环唑、菌核净、嘧菌酯、代森锰锌4种杀菌剂对烟草靶斑病菌菌丝生长和菌核形成的抑菌活性,并评价其田间药效。【结果】10%苯醚甲环唑WP、25%嘧菌酯SC、40%菌核净WP和80%代森锰锌WP 4种杀菌剂对靶斑病菌菌丝生长和菌核形成均表现不同抑菌活性。其中,对菌丝生长抑制最强的是菌核净,其平均EC50值为1.72 mg/L,其次为嘧菌酯（15.71 mg/L）和苯醚甲环唑（16.80 mg/L）,最弱为代森锰锌。对菌核形成抑制最强的是菌核净,2.5 mg/L处理抑制率达100%,其次为嘧菌酯和苯醚甲环唑,代森锰锌最弱。40%菌核净WP 120 g/667m2、25%嘧菌酯SC 40 mL/667m2、10%苯醚甲环唑WG 60 g/667m2及80%代森锰锌WP 200 g/667m2处理,9 d后防效分别为90.59%、61.76%、52.12%和13.41%;对病斑抑制率分别为53.55%、75.10%、64.09%和7.31%。【结论】苯醚甲环唑、嘧菌酯可作为烟草靶斑病防控的优选药剂。     

烟草靶斑病菌毒素对烟草防御酶及丙二醛含量的影响

采用烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)粗毒素原液处理6叶期烟草幼苗,测定12、24、36、48、60、72h后烟草叶片中过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性和丙二醛(MDA)含量.结果表明,经烟草靶斑病菌粗毒素处理后的烟草POD、PAL的活性及MDA含量都高于对照,并呈现一定的波动性;PPO和CAT先升高后下降,始终高于对照;而SOD酶的活性表现为持续下降.     

6%抗坏血酸水剂抗烟草马铃薯Y病毒的作用机制

为了解6%抗坏血酸水剂对PVY的室内活性抑制效果,采用半叶枯斑法及常规汁液摩擦方法,测定了6%抗坏血酸水剂抗PVY的生物活性,检测了施用6%抗坏血酸水剂后接种PVY的烟草叶片中丙二醛、脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白及硝酸还原酶等相关生理指标的变化。结果表明:6%抗坏血酸水剂对烟草有较高的抗PVY保护活性,施用6%抗坏血酸水剂后接种PVY烟草叶片中的丙二醛、脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白等重要化学物质的含量变化呈现有利于烟草品质的提高;硝酸还原酶的活性均较对照处理的高。6%抗坏血酸水剂能够诱导烟草产生对PVY的抗性并对感染PVY的烟草起到保护作用。     

木霉菌(Trichoderma sp.)对棉立枯病菌(Rhizoctonia solani kühn)抑制作用的初步研究

木霉菌(Trichodermasp.)对棉立枯病菌(Rhizoctonia solani kuhn)具有较强的抑制作用。施用木霉菌不仅能压低棉立枯病的发病率,而且对减轻棉立枯病的严重程度有显著作用。此外,尚有促进棉苗生长发育的良好效果。     

不同药剂对烟草靶斑病的抑菌作用及田间药效研究

[目的]筛选防治烟草靶斑病的高效药剂.[方法]采用室内抑菌试验和田间防效试验研究10％井冈霉素水剂、20％噻氟酰胺(满穗)SC、70％甲基硫菌灵WP等12种不同药剂对烟草靶斑病的防治效果.[结果]10％井冈霉素和20％噻氟酰胺(满穗)SC等9种药剂对烟草靶斑病菌的室内抑制效果较好.10％井冈霉素水剂和20％噻氟酰胺(满穗)SC对烟草靶斑病的田间防效最好,相对防效达到70％以上.[结论]10％井冈霉素水剂和20％噻氟酰胺(满穗)SC可以作为防治烟草靶斑病的推荐药剂.     

不同药剂对烟草赤星病和靶斑病的防控效果

务川县为贵州省烟叶主产区之一,赤星病和靶斑病是影响当地烟叶生产的主要病害。为务川县烟叶生产防治赤星病和靶斑病提供技术参考,开展不同药剂对烟草赤星病和靶斑病防控效果的比较试验。结果表明：使用40%菌核净和46%氢氧化铜对烟草赤星病和靶斑病进行常规防治虽具有一定效果,但持续性差,且弱于使用8%井冈霉素+38%吡唑醚菌酯·啶酰菌胺和8%井冈霉素200 g/L氟唑菌酰羟胺·苯醚甲环唑的绿色防控方式。同样采用绿色防控,80%波尔多液+38%吡唑醚菌酯·啶酰菌胺对烟草赤星病和靶斑病的防效均优于80%波尔多液+200 g/L氟唑菌酰羟胺·苯醚甲环唑。建议防治中使用80%波尔多液+38%吡唑醚菌酯·啶酰菌胺防治,以实现更好的防效并保障烟叶生产安全。     

新疆南疆棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani Kühn)菌丝融合群及其营养体亲和群研究

从采自南疆主要植棉区的4地(州)18县(市)的棉花立枯病病株上分离得到455个病原分离物,从中鉴定出345个立枯丝核菌(Rhizotonia solani Kühn)菌株。采用菌丝融合性判定方法判明345个立枯丝核菌菌株分属于AG-1,AG-4和AG-5三个菌丝融合群,其出现频率分别为3.76%,91.88%,4.35%。其中AG-4在所有立枯丝核菌菌株中出现频率最高(91.88%),是南疆棉花立枯丝核菌的优势菌群。营养体亲和性判别结果表明,各菌丝融合群均有营养体亲和群分化,其中判定为AG-4的317个菌株分属于3个营养体亲和群,判定为AG-1的13个菌株和判定为AG-5的15个菌株各自分属于2个营养体亲和群。     

42.8%氟菌·肟菌脂悬浮剂防治黄瓜靶斑病效果研究

为更加有效防治黄瓜靶斑病,开展42.8%氟菌·肟菌脂悬浮剂等防治黄瓜靶斑病的田间药效试验。试验结果表明,42.8%氟菌·肟菌脂悬浮剂对黄瓜靶斑病有明显的防治效果,且对黄瓜生长发育无不良影响。建议在生产实践中使用42.8%氟菌·肟菌脂悬浮剂250 mL/hm2防治黄瓜靶斑病。     

茂丰6%抗坏血酸水剂对烟草花叶病毒活性及生化机制的影响

采用半叶法测定了经茂丰6%抗坏血酸水剂处理的烟叶抗烟草花叶病毒(TMV)的活性-钝化、保护及治疗的作用,检测了经茂丰诱导后烟叶中抗性相关酶系-苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)的活性及叶绿素含量。结果表明,其抗性相关酶系及叶绿素含量的增加与茂丰诱导的抗病作用密切相关,即茂丰具有抗TMV活性和明显的治疗、保护作用。     

4种诱抗剂对烟草靶斑病的诱抗性

【目的】探明水杨酸、芸苔素内酯、S-诱抗素和黄腐酸诱导烟草抗靶斑病的效果,为生产上防控烟草靶斑病提供依据。【方法】采用室内盆栽试验方法,测定黄腐酸、S-诱抗素、水杨酸、0.01%芸苔素内脂可湿性粉剂4种诱抗剂对烟草靶斑病的抗病性、防御酶活性及农艺性状的影响。【结果】4种诱抗剂均能提高引起烟草靶斑病的立枯丝核菌的抗性,其中S-诱抗素和水杨酸诱导抗病效果最佳,分别为61.62%和56.61%;S-诱抗素显著增强烟叶苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及可溶性蛋白质含量,其MDA含量及相对电导率显著降低,能减少致病菌对烟叶细胞膜的损伤程度;4种诱抗剂都能促进烟株生长,其中S-诱抗素和水杨酸对烟株农艺性状改善效果最佳。【结论】诱抗剂通过提高烟叶防御酶活性、提高烟叶可溶性蛋白含量以维持细胞渗透平衡,同时促进烟株生长以提高其抗病性,S-诱抗素和水杨酸对烟草靶斑病的诱抗效果最佳。     

生物菌肥对烟草靶斑病及烟叶农艺性状的影响

探明不同生物菌肥对烟草靶斑病的防控效果及烟叶农艺性状的影响,为烟草靶斑病的绿色防控及烟草的安全生产提供参考依据。结果表明：施用生物菌肥可提高烟草抗病性,促进烟草生长,改善烟株农艺性状。烟草靶斑病侵染初期（7月1日）,以益生元有机菌肥（T3）处理防效最高,为51.28%;靶斑病侵染中后期（7月15日）,益生元微生物菌肥（T2）处理发病率及病情指数最低,防效最高,达60.70%。益生元有机菌肥（T3）对烟株促生作用最佳,烟草株高、叶长和叶宽分别较对照增加9.37%、2.60%和9.01%;海朴海藻有机肥（T1）对烟草的抗病及促生效果相对较差。施用益生元有机菌肥和益生元微生物菌肥对烟草的抗病促生效果较好,推荐应用于烟草靶斑病的防治。