1株链格孢属真菌生物碱类代谢产物的研究

为进一步开发和利用夹竹桃的内生真菌,对1株分离自夹竹桃茎部链格孢属内生真菌的代谢产物进行研究。利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法对该菌株的发酵产物进行分离,再经过重结晶纯化,得到5个生物碱类化合物。对所得化合物的理化性质和~1H-NMR、~(13)C-NMR数据进行分析,确定这5个化合物的结构。采用最小抑菌浓度法和DPPH自由基法对所得化合物进行抑菌活性和抗氧化活性测试。结果表明,这5个化合物分别为次黄嘌呤(1)、腺嘌呤(2)、尿囊素(3)、胸腺嘧啶脱氧核苷(4)、尿嘧啶核苷(5)。其中,化合物1、3、4、5为首次从链格孢属真菌的发酵物中分离得到。化合物3(尿囊素)具有一定的抑菌活性和抗氧化活性,化合物2(腺嘌呤)具有一定的抗氧化活性。夹竹桃链格孢属内生真菌具有一定的开发和利用价值。     

蜂巢珊瑚共生真菌的分离、鉴定及其抗氧化活性

为从蜂巢珊瑚中寻找具有高抗氧化活性的共生真菌,采用组织研磨法分离蜂巢珊瑚共生真菌,通过对DPPH、ABTS自由基清除及对高价铁离子的还原能力的测定筛选高抗氧化活性的菌株,通过形态学特征观察,18S rDNA序列分析对高抗氧化活性菌株进行鉴定。从蜂巢珊瑚中共分离9株共生真菌;抗氧化活性测定结果表明,9株真菌发酵液均具有较好的抗氧化活性,其中S-1-5菌株的抗氧化活性最好,其对DPPH和ABTS自由基清除率分别为70.60%和67.18%,对高价铁离子还原能力强。依据S-1-5菌株的形态学特征和18S rDNA序列分析结果,将菌株S-1-5鉴定为球孢枝孢(Cladosporium sphaerospermum)。该菌株具有进一步开发应用的潜在价值。     

聚裂丛柳珊瑚和华丽肉芝软珊瑚共附生真菌的分离鉴定及抗氧化活性研究

【目的】海洋微生物是海洋天然产物和药物研究的宝贵资源,已有大量结构新颖、活性显著的化合物从微生物中被发现。由于海洋真菌遗传背景复杂、代谢产物种类丰富,故其已成为发掘新天然产物的重要资源,从海洋生物中寻找新的天然抗氧化活性物质成为目标之一。【方法】从海南省西沙群岛附近海域采集的聚裂丛柳珊瑚(Rumphella aggregata)和华丽肉芝软珊瑚(Sarcophyton elegans)中分离纯化得到13株共附生真菌,并通过测定对高价铁离子的还原作用、DPPH自由基的清除能力、总酚和总黄酮的含量、ABTS自由基的清除能力、羟基自由基的清除能力来对13株真菌发酵液进行抗氧化能力进行评估。【结果】测定结果表明,13株真菌发酵液均具有较好的抗氧化活性,其中Z1菌株对DPPH和羟基自由基的清除率最高,分别达到78.03%和73.36%;S9菌株对高价铁离子的还原能力和对ABTS自由基的清除能力最强,分别达到了130.56 mmol/L Fe2+/g DW和84.09%。通过对Z1和S9菌株的形态学特征观察和18S rDNA序列进行分析,初步将菌株Z1鉴定为黑曲霉菌Aspergillus niger,菌株S9鉴定为Paraconiothyrium brasiliense。【结论】黑曲霉菌Aspergillus niger和Paraconiothyrium brasiliense的发酵液具有良好的抗氧化活性,可对这两株菌株进行下一步的活性物质追踪研究。     

1株秦艽内生真菌的分离鉴定及生物活性研究

[目的]从药用植物秦艽的叶中分离1株内生真菌,并对抗氧化、抑菌等生物学活性进行分析,为进一步研究其作用机理及应用价值提供基础.[方法]用组织分离法从秦艽的叶中分离纯化了1株内生真菌菌株,采用形态学结合rDNA ITS区、LSU基因序列鉴定菌株;采用PCR技术扩增菌株的PKS基因;采用DPPH法检测发酵液的乙酸乙酯萃取物...     

葛内生真菌次生代谢产物清除自由基活性的研究

为了从药用植物葛的内生真菌中寻找天然抗氧化剂,在葛(Pueraria lobata)的根、茎、叶以及果实中分离出128株内生真菌,并采用DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基酶标仪法对其清除自由基活性进行检测。结果表明,有多株内生真菌具有不同程度的清除自由基活性,且不同产地以及不同部位分离出的内生真菌活性不同;同种菌株清除自由基活性与提取液浓度、反应时间成正比关系,即样品浓度增加活性增强,反应时间增长其活性也增强。其中菌株10y-4在浓度2.5 mg.mL-1、反应时间为20 min时,其清除自由基活性达到92.3%。表明葛内生真菌可作为天然的高效抗氧化剂进行开发利用。     

从甜叶菊叶片中分离纯化抗氧化内生真菌

[目的]从甜叶菊叶片中分离纯化抗氧化内生真菌。[方法]以甜叶菊叶片为材料,从中分离纯化出内生真菌,对它们进行了液体培养,检测其发酵上清液的总抗氧化性能、清除DPPH自由基和抑制化学发光的能力。[结果]共分离获得42株内生真菌,编号为F01-F42。总抗氧化最强的为F41;清除DPPH能力最强的为F37;综合比较总抗氧化性能和清除DPPH能力,F02、F07、F20、F25、F37、F41 6株较突出。利用流动注射化学发光法对这6株发酵液进行检测,化学发光抑制率均大于70%,验证了它们的抗氧化性能较突出;对这6株进行了初步形态鉴定,它们的菌落颜色为白色或淡黄色,F02菌丝有隔膜,其他没有。[结论]筛选出高抗氧化活性的真菌,为将来的抗氧化研究奠定了基础。     

从甜叶菊叶片中分离纯化抗氧化内生真菌(英文)

[目的]从甜叶菊叶片中分离纯化抗氧化内生真菌。[方法]以甜叶菊叶片为材料,从中分离纯化出内生真菌,对它们进行了液体培养,检测其发酵上清液的总抗氧化性能、清除DPPH自由基和抑制化学发光的能力。[结果]共分离获得42株内生真菌,编号为F01-F42。总抗氧化最强的为F41;清除DPPH能力最强的为F37;综合比较总抗氧化性能和清除DPPH能力,F02、F07、F20、F25、F37、F416株较突出。利用流动注射化学发光法对这6株发酵液进行检测,化学发光抑制率均大于70%,验证了它们的抗氧化性能较突出;对这6株进行了初步形态鉴定,它们的菌落颜色为白色或淡黄色,F02菌丝有隔膜,其他没有。[结论]筛选出高抗氧化活性的真菌,为将来的抗氧化研究奠定了基础。     

中华补血草5种黄酮类化合物抗氧化和抗肿瘤活性的比较

比较研究5种中华补血草黄酮类化合物——异鼠李素、槲皮素、异槲皮苷、木樨草素、芹菜素的体外抗氧化和抗肿瘤活性。运用MTT试验,检测5种中华补血草黄酮类化合物对Hep G2和Hela肿瘤细胞体外增殖的影响;运用DPPH自由基清除试验,检测中华补血草黄酮的体外抗氧化活性。研究结果可知,5种中华补血草黄酮类化合物均显示一定抗氧化和抗肿瘤活性,但其活性强弱存在差异。本试验条件下其抗肿瘤活性由强到弱的顺序为:木樨草素>槲皮素>异鼠李素、芹菜素>异槲皮苷;体外抗氧化能力由强到弱的顺序为:槲皮素>木樨草素>异鼠李素>芹菜素>异槲皮苷。结果表明,中华补血草黄酮类化合物木樨草素、槲皮素、异鼠李素、芹菜素等为中华补血草抗肿瘤作用的重要活性成分,抗肿瘤作用与其抗氧化活性有关。     

一株冬虫夏草菌的鉴定及其抗氧化特性研究

对分离自野生冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的一株真菌F4539进行形态学和分子生物学鉴定,并对其发酵产物进行抗氧化活性研究。结果表明,F4539(Genbank号为KU359775)与Hirsutella sinensis(AJ309355)具有99%的相似性,初步确认F4539为中华被毛孢(Hirsutella sinensis)。抗氧化活性试验结果表明,F4539发酵物20 g/L乙醇提取液的DPPH抗氧化活性为75.39%,高于同浓度国产某商品化冬虫夏草菌菌丝体胶囊乙醇提取物的抗氧化活性,进一步研究表明,F4395发酵物和国产某商品清除DPPH自由基的IC50分别为5.96 g/L和11.61 g/L,即F4539发酵提取物清除DPPH自由基的能力强于国产某商品。     

红树林植物海莲内生真菌活性菌株筛选及次级代谢产物研究

采用化学与生物学活性结合的二级组合筛选模型对红树林植物海莲内生真菌进行筛选,得到优势菌株Pestalotiopsis sp.,从中分离得到4个甾体化合物,通过~1H NMR、~(13)C NMR及MS等现代波谱技术对其进行结构解析,并结合相关文献数据,鉴定化合物分别为:3β-(E)-feruloyllupeol、stigmastan-3-one、β-sitosterol和sitost-5-en-3β-ol acetate,其中化合物分别3β-(E)-feruloyllupeol为首次从红树林内生真菌中分离得到。对4个化合物进行清除DPPH、ABTS自由基以及抗菌活性测试,结果显示,所有化合物均无抗菌、抗氧化活性。     

1株华木莲内生真菌的抗氧化活性分析和菌株鉴定

华木莲(Sinomanglietia glauca Z.X.Yu et Q.Y.Zheng)为木兰科中我国特有的单种属植物,全世界唯宜春特有的珍稀濒危新树种,对从华木莲叶片中分离的多株内生真菌进行抗氧化活性分析,筛选出抗氧化性较高的菌株并鉴定。筛选华木莲叶片的内生真菌,制备其发酵液提取物,采用TBA反应法、超氧阴离子自由基(O-2·)、羟基自由基(·OH)清除能力的分析测定其抗氧化活性,对抗氧化活性高的内生真菌菌株利用试剂盒提取内生真菌总DNA,扩增其r DNA的ITS序列并测序。结果显示,菌株SL-3的总抗氧化活性很高,比对照、以维生素C为底物的高。通过对抗氧化活性成分的分析可知,该菌株含有黄酮类化合物。对菌株SL-3进行形态和分子鉴定,确定为产黄青霉(Penicillium chrysogenum)。说明内生真菌SL-3产黄青霉具有明显和稳定的抗氧化活性,可用于抗氧化活性成分发酵生产的微生物资源。     

软枣猕猴桃内生真菌发酵制备蒽醌类化合物及其抗氧化活性研究

为了从软枣猕猴桃内生真菌中获得具有抗氧化活性的蒽醌类化合物,本研究以自主筛选的软枣猕猴桃内生真菌Z2为发酵菌株,大黄酸作为标准品,通过乙酸镁甲醇显色法来定量检测目标产物含量。选取发酵时间、萃取溶剂以及液料比3个影响因素,进行3因素3水平正交试验。确立了发酵提取蒽醌的最佳工艺条件:发酵时间为5d,萃取溶剂为正丁醇,料液比为1∶50,在此条件下蒽醌提取率为22.04mg·L~(-1);通过测定清除DPPH、超氧阴离子、烷基等自由基能力以及还原Fe~(3+)能力来研究蒽醌类物质的抗氧化活性。结果表明:蒽醌类物质浓度在100μg·mL~(-1)时,对DPPH的清除能力为72.27%,对超氧阴离子的清除能力为13.33%,对烷基自由基的清除能力高达76.75%。因此,通过软枣猕猴桃内生真菌发酵可为生产具有多功能抗氧化活性的蒽醌提供简化、经济的生产工艺,该研究不仅为蒽醌类化合物的提取开拓了资源空间,也为植物内生真菌的工业化应用进行了有益探索。     

木蹄层孔菌子实体的化学成分分析

采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、半制备高效液相等色谱方法对木蹄层孔菌子实体中的化合物进行分离纯化,并通过核磁波谱数据结合理化性质鉴定化合物结构,采用Ellman法测定化合物抑制乙酰胆碱酯酶活性、PNPG法测定α-葡萄糖苷酶抑制活性、DPPH法清除DPPH自由基抗氧化活性和96孔板微量法测定抑菌活性。从木蹄层孔菌子实体乙酸乙酯萃取部分分离得到11个化合物,分别鉴定为:3,4-二羟基苯甲酸乙酯(1)、3,4-二羟基苯甲醛(2)、4-(3,4-二羟苯基)-3E-丁烯-2-酮(3)、2,4-二羟基-3,5-二甲基苯乙酮(4)、对羟基苯甲醛(5)、4-羟基苯乙酮(6)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(7)、麦角甾-7,22-二烯-3-酮(8)、4-(4-羟基苯基)-3E-丁烯-2-酮(9)、1,5-2(3,4-二羟基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮(10)、3,4-二羟基苯乙酮(11)。活性测试结果表明:化合物2,10,11具有α-葡萄糖苷酶抑制活性,化合物3,4,9,10,11具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,化合物1～11均有DPPH自由基清除活性,化合物10具有抑菌活性。     

昆仑雪菊中2个黄酮类化合物的分离鉴定及其抗氧化活性评价

从昆仑雪菊中分离纯化具有抗氧化活性的单体化合物。以抗氧化活性为指标,采用活性追踪的方法,筛选最佳的昆仑雪菊黄酮类化合物提取溶剂并对粗提物进行分离纯化得到单体化合物,并采用铁离子还原/抗氧化力测定法(FRAP法)、1,1-二苯基-2-硝基苯肼自由基清除法(DPPH法)和2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐自由基清除法(ABTS法)对化合物进行活性评价。结果表明:最佳的提取溶剂为甲醇,利用常压硅胶柱层析和Sephedex LH-20柱层析从粗提物中分离得到2个单体化合物;采用核磁共振(NMR)和电喷雾质谱(ESIMS)鉴定其化学结构:化合物1为2',3,4,4'-四羟基查尔酮,化合物2为4,2',4'-三羟基查尔酮。抗氧化活性测试结果表明,化合物1和化合物2的FRAP值均小于阳性对照α-生育酚,对DPPH自由基清除率的半数抑制浓度(IC50)分别为(45.32±0.26)μmol·L-1和(64.78±0.79)μmol·L-1,均低于阳性对照α-生育酚,对ABTS自由基清除率的IC50分别为(27.49±0.86)μmol·L-1和(32.13±2.79)μmol·L-1,均低于阳性对照α-生育酚。结论:从昆仑雪菊中分离得到的2个黄酮类化合物均具有很强的抗氧化活性。     

麻黄内生真菌的初步研究

从宁夏回族自治区贺兰山高盐碱地区采集的麻黄样本中分离得到7株内生真菌,体外抗氧化活性测定表明,所分离到的内生真菌中有5株具有较高的抑制羟基自由基能力;有5株菌的发酵液具有中等强度的总抗氧化能力。在抗菌活性测定中,所分离到的7株麻黄内生真菌对细菌指示菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均表现出一定的抑菌作用,但对真菌指示菌炭疽杆菌和黑曲霉均未检测到抑菌活性。     

4种珍稀食用菌粗多糖的抗氧化活性研究

用DPPH自由基清除法、羟基自由基清除法、铁离子鳌合能力和还原能力等方法对4种野生珍稀食用菌美味牛肝菌、羊肚菌、松茸和印度块菌的粗多糖进行了抗氧化活性评价。结果显示,4种真菌粗多糖均不同程度地具有抗氧化活性。印度块菌对DPPH自由基的清除活性和铁离子螯合能力最高,其EC50值分别为0.86 mg.mL-1和0.63 mg.mL-1;羊肚菌对羟基自由基的清除活性最高,其EC50值为0.38 mg.mL-1;美味牛肝菌的还原力最高,其EC50值为0.85 mg.mL-1;松茸清除DPPH及羟基自由基的能力最低,铁离子螯合能力也较低。     

香竹箐栽培型古茶树内生真菌对植物病原真菌的拮抗活性

【目的】了解香竹箐栽培古茶树内生真菌对植物病原真菌的拮抗活性。【方法】采用尖端菌丝纯化法分离内生真菌,并结合形态学和分子生物学方法对内生真菌进行鉴定,采用五点对峙培养法筛选对供试病原真菌具有拮抗活性的内生真菌菌株,对具有较强活性的菌株进行分类地位归属。【结果】从香竹箐栽培古茶树枝叶中共分离纯化出308株内生真菌,归属于61个形态型。病原真菌拮抗试验结果显示:有18株内生真菌对4种以上供试菌的抑制率大于50%,分别隶属于2门3纲10目13科14属。有13株对至少1种供试菌的抑制率大于75%,有9株对5种供试菌的抑制率均大于50%。其中,菌株Ct-BC40、Ct-BC72和Ct-LP113对5种供试菌的抑制率达80%以上,属强拮抗菌株。【结论】香竹箐栽培古茶树内生真菌中广泛分布着抑菌活性菌株,占分离菌株总数的96%以上,且抗菌活性、种属分布具有多样性。     

大果沙棘果渣黄酮体外抗氧化活性

采用超声波法提取及大孔树脂吸附法分离纯化大果沙棘黄酮,以芸香苷、儿茶素为对照,测定大果沙棘果渣黄酮对羟基自由基(·OH)、对超氧阴离子(O-2·)、DPPH·自由基、ABTS+自由基的清除能力。结果表明,分离纯化前后的大果沙棘黄酮对超氧阴离子(O-2·)、羟基自由基(·OH)、DPPH·自由基、ABTS+自由基的清除能力都较高,相同浓度下,清除效果略低于芸香苷、儿茶素标准对照品。纯化后总黄酮的体外抗氧化能力都强于粗提黄酮。     

大杯伞胞外多糖的纯化及抗氧化活性

为研究珍稀食用菌大杯伞胞外多糖的抗氧化活性,采用菌丝液体发酵、乙醇沉淀获得胞外粗多糖,并利用DEAE 52-纤维素和Sephadex S-200凝胶柱层析对胞外多糖进行分离、纯化,以及抗氧化活性鉴定,结果表明:从胞外多糖分离到一种分子量均一的多糖CEP Ⅱ,其抗氧化活性随着多糖质量浓度的增加而增加,清除自由基·OH,DPPH和·O2-的EC50值分别为0.119,0.185,0.215g/L;CEP Ⅱ抗氧化活性显著,可有效去除羟基自由基、DPPH自由基、超氧自由基.     

植物内生菌及其防治植物病害的研究进展

目的了解香竹箐栽培古茶树内生真菌对植物病原真菌的拮抗活性。方法采用尖端菌丝纯化法分离内生真菌,并结合形态学和分子生物学方法对内生真菌进行鉴定,采用五点对峙培养法筛选对供试病原真菌具有拮抗活性的内生真菌菌株,对具有较强活性的菌株进行分类地位归属。结果从香竹箐栽培古茶树枝叶中共分离纯化出308株内生真菌,归属于61个形态型。病原真菌拮抗试验结果显示：有18株内生真菌对4种以上供试菌的抑制率大于50%,分别隶属于2门3纲10目13科14属。有13株对至少1种供试菌的抑制率大于75%,有9株对5种供试菌的抑制率均大于50%。其中,菌株Ct-BC40、Ct-BC72和Ct-LP113对5种供试菌的抑制率达80%以上,属强拮抗菌株。结论香竹箐栽培古茶树内生真菌中广泛分布着抑菌活性菌株,占分离菌株总数的96%以上,且抗菌活性、种属分布具有多样性。