胡杨悬浮细胞系的建立

[目的]建立快速稳定生长的胡杨(Populus euphratica Oliver)细胞悬浮系,为进一步制备胡杨原生质体及林木抗旱耐盐体细胞杂交育种研究奠定基础.[方法]以胡杨胚性愈伤组织为材料,建立胡杨悬浮细胞系,利用正交试验法优化悬浮细胞系的培养条件,在优化培养条件下测定细胞的生长特性.[结果]以胡杨胚性愈伤组织成功地建立了胡杨悬浮细胞系,正交优化试验表明:MB+0.1 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖+300mg/L CH+146 mg/L Gln为最优培养基组合,接种量为30 g(FW)/L时,干重增长速率最高,达 2.44 g/(L·d).胡杨悬浮细胞系生长曲线基本呈S形,生长周期为10 d,其中3～7 d为对数生长期.在一个生长周期内,培养液pH变化趋势是先下降,后上升并逐渐趋于平稳.[结论]在上述优化培养条件下,胡杨悬浮细胞系干重增长速率最快,细胞生长状态最佳.     

葡萄悬浮细胞系的建立

【目的】建立适合葡萄悬浮细胞系快速稳定生长的培养体系。【方法】以鲜食葡萄巨峰的果皮为材料,以B5为基本培养基,通过选择合适的激素配比及浓度、pH、蔗糖浓度等建立并优化葡萄愈伤组织培养体系及细胞悬浮培养体系。【结果】在B5+0.5 mg/L 6-BA+NAA条件下,NAA最适质量浓度为1 mg/L;在B5+0.5 mg/L 6-BA+2,4-D条件下,2,4-D最适质量浓度为1.0~2.0 mg/L;在B5+1 mg/L NAA+6-BA条件下,6-BA最适质量浓度为0.5~1.0 mg/L;在B5+2 mg/L 2,4-D+KT条件下,KT的最适质量浓度0.2 mg/L。在最佳蔗糖质量浓度30g/L、最适pH 5.5~5.8培养基条件下,建立了能快速生长的均一、稳定的巨峰葡萄细胞悬浮体系,优化了培养条件。【结论】适合葡萄愈伤组织生长的培养体系为:B5+250 mg/L水解酪蛋白+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂;适合葡萄细胞悬浮培养的体系为:B5+1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖和B5+250mg/L水解酪蛋白+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+30 g/L蔗糖。     

水稻类病变突变体spl5胚性悬浮细胞系的构建

类病变突变体（lesion mimic mutant）是一类研究细胞死亡与抗病机制的有效工具。试验以水稻类病变突变体spl5为材料,构建了spl5突变体的胚性悬浮细胞系。结果表明诱导spl5突变体愈伤组织的最佳2,4-D浓度为2 mg·L-1,疏松的Ⅱ型胚性愈伤组织经悬浮继代培养3～4个月后可获得理想的胚性悬浮细胞系,FDA-PI染色结果表明该细胞悬浮体系活力高。水稻类病变突变体spl5胚性悬浮细胞系的建立可为进一步研究spl5突变体细胞死亡及其与病原菌互作的机制奠定基础。     

马蹄金悬浮细胞系的建立与优化

以马蹄金下胚轴愈伤组织为外植体,采用均匀设计探讨了不同生长调节剂和培养基对细胞悬浮培养的影响,建立了马蹄金悬浮细胞系。结果表明,不同生长调节剂组合的培养基对马蹄金悬浮细胞的干重和生长速度有显著影响,以B5培养基作悬浮培养的基本培养基效果较好,用B5＋0．5mg／L2,4-D＋0．1mg／L6-BA＋0．5mg／LKT＋2．0mg／L α-NAA作为悬浮培养基,对悬浮细胞的干重增长和生长速度效果较好,经固化培养后,愈伤组织生长良好。悬浮细胞生长的时间进程是,起始培养的第6天前,细胞增殖十分缓慢;第6～12天期间生长迅速;第14天后基本停止生长。培养基的pH值迅速下降时是细胞增殖缓慢的时期;当培养基的pH值开始升高时,细胞增殖也显著加快。     

鸡骨草悬浮细胞系建立与植株再生研究

以鸡骨草（Abrus cantoniensis Hance）茎段为试材,进行了细胞悬浮培养及植株再生诱导的研究。结果表明：MS＋2.0mg/L 2,4-D＋1.5mg/L 6-BA培养基适合从茎段诱导生长迅速、质地疏松的愈伤组织;将获得的愈伤组织置于MS＋2.0mg/L 2,4-D＋0.1mg/L NAA＋1.5mg/L 6-BA液体培养基中振荡培养,建立细胞悬浮培养体系,随后继代4次,分化出芽;分化芽诱导生根后形成小植株。     

Hi5-SF悬浮细胞系的建立及鉴定

从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)引进High Five细胞并对其进行驯化,获得无血清悬浮驯化株(Hi5-SF)。依据《中华人民共和国药典(2010年版三部)》对其进行细胞生物学特性研究、微生物污染、病毒外源因子及细胞致瘤性检测。结果发现,Hi5-SF细胞复苏活力76.3%,生长曲线呈S型,最大增殖密度可达3.50×10~6 mL~(-1),群体倍增时间为26.2h;细菌、真菌及支原体检查均为阴性;血细胞吸附试验、致细胞病变试验和特异性病毒荧光抗体结合物检查结果均为阴性;致瘤性检查结果也为阴性。说明该细胞株符合兽用疫苗生产用细胞质量要求,可以在疫苗研究与生产中应用。     

日本晴水稻悬浮细胞系的建立和保存

本研究旨在建立日本晴水稻悬浮细胞系和保存悬浮细胞。在添加2 mg.L-1 2,4-D的NB培养基之后日本晴的成熟胚被诱导愈伤组织形成,2个月的继代后,愈伤组织在2 mg.L-1 2,4-D的NB液体培养基上用于悬浮细胞的培养。3个月的继代后,得到理想的悬浮细胞。关于培养的植物细胞的超低温保存程序大多数报道是两步保存法,采用含有脱落酸激素的预培养溶液培养,同时利用化学冷冻保护剂处理,并在-30℃下放置2 h后投入液氮保存,复苏后细胞的存活率(氯化三苯四氮唑还原法)为80%以上。     

不同理化因子对黄芩悬浮细胞系的影响

采用植物组织培养手段建立了稳定的黄芩细胞悬浮系,通过正交试验筛选出最佳的MS液体培养基为:NH4+/NO3-30/40 mmol/L,Ca2+3 mmol/L,pH值5.4,蔗糖3%.研究了碳源、肌醇、激素、水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)对悬浮系中黄苓甙含量的影响.结果表明:复合碳源、较低浓度肌醇对悬浮细胞系中黄芩甙的积累和胞外释放具有促进作用,2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L Kt最有利于悬浮系中黄芩甙的积累;水解酪蛋白和水解乳蛋白对黄芩甙的生成没有促进作用,反而起到了一定的抑制效应.     

胡萝卜悬浮细胞系及高效再生系统的建立

以胡萝卜块根为材料诱导愈伤组织,并建立悬浮细胞系,然后将悬浮细胞和愈伤组织分别转入分化培养基进行分化培养。结果表明,胡萝卜块根形成层愈伤组织诱导率为100%,最佳激素种类和用量为2,4!D0.1mg/L;根据外观可将愈伤组织大致分为4种类型,I型是直接建立悬浮细胞系的良好来源,Ⅲ型经继代培养后可用于悬浮细胞系的建立;静止法是胡萝卜悬浮细胞系简单而有效的继代方法;胡萝卜愈伤组织分化的最佳培养基是MS或B5基本培养基,MS培养基上的再生苗可直接生根,而B5培养基上的再生苗在原培养基上很难生根,需要转移到MS培养基上才能生根。     

水稻胚性悬浮细胞系建立的细胞学研究

胚性悬浮细胞是禾谷类作物原生质体培养的理想材料。本文研究了水稻广亲和中粳品系02428胚性悬浮细胞系建立过程中的细胞学动态变化,结果表明:建成的胚性悬浮细胞系(后期悬浮细胞系)和前、中期悬浮细胞系相比较,细胞团内细胞结合紧凑,细胞壁簿,细胞质浓厚,颗粒状内含物丰富,细胞活力强,质膜凹陷较浅,较平整,质膜强度高。本研究结果从细胞学角度初步探讨了水稻胚性悬浮细胞系适应于原生质体培养的机理。     

盐生植物盐穗木悬浮细胞系的建立

[目的]组织和细胞培养能够为研究盐穗木的耐盐机制提供实验材料,建立盐穗木悬浮细胞系,从细胞水平上揭示盐生植物盐穗木的耐盐机制.[方法]以成熟胚为外植体,探讨不同培养基和激素配比对愈伤组织诱导以及悬浮细胞系培养条件的优化,并以酚藏花红染色和固体培养基培养法检测悬浮细胞的细胞活性.[结果]以葡萄糖替换蔗糖作为培养基碳源,在0.5 mg/L6-BA、1.0 mg/L KT下盐穗木诱导愈伤组织最适宜悬浮细胞的培养;而在液体基础培养基中添加1.0 mg/L 6-BA、1.0 mg/L KT,则最有利于盐穗木悬浮细胞系的稳定.所获得的盐穗木悬浮细胞具有一定的细胞活性.[结论]采用成熟胚为外植体诱导愈伤组织能够获得盐穗木悬浮细胞系,为在细胞层面上深入开展盐穗木耐盐机制奠定基础.     

向日葵耐盐细胞系悬浮培养条件的初步筛选

本实验以1414向日葵品种为材料,研究耐盐向日葵细胞的最佳培养条件。实验结果表明,向日葵细胞在含6-BA0.5mg/L、2-4 D 0.001mg/L、蔗糖5%的MS培养基中,用100目细胞筛网过滤,其细胞分裂能力最强。     

小麦“5389”悬浮细胞系建立的条件摸索

以小麦"5389"的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中2,4-D、KT、ABA及其配比对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响。结果表明:以MS+2,4-D 3.0 mg/L培养基的诱导效果最好,出愈率最高达93.42%;在MS+2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.1 mg/L培养基上进行继代培养获得松脆型愈伤组织,以MS+2,4-D1.0 mg/L+KT 0.1 mg/L培养基进行液体培养建立了状态良好的悬浮培养细胞。     

黄花蒿悬浮培养细胞系的建立及遗传转化

为建立稳定的黄花蒿悬浮细胞系,以黄花蒿428–A植株的子叶、茎、腋芽和叶片为外植体,以MS为基础培养基,采用3因素(6–BA、NAA、2,4–D)4水平的L16(43)正交试验,优化黄花蒿愈伤组织诱导培养基,分析不同质量浓度(0、5、10、15、20、25、30 mg/L)潮霉素对黄花蒿悬浮细胞生长的影响,比较羧苄青霉素(0、100、150、200、250、300 mg/L)对农杆菌的抑制效果,并运用农杆菌介导法对黄花蒿悬浮细胞进行GUS报告基因及色氨酸单加氧酶iaaM基因的遗传转化。结果表明:黄花蒿叶片愈伤诱导率较高,叶片愈伤组织较优培养基为MS+6–BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,出愈率可达99.33%;潮霉素最适筛选质量浓度为30 mg/L,羧苄青霉素最适抑菌质量浓度为200 mg/L;转基因抗性愈伤GUS组织化学染色及PCR鉴定结果表明,外源基因iaaM已导入并整合至黄花蒿基因组中。     

水稻、玉米胚性悬浮细胞系的有效建立

研究了水稻、玉米胚性悬浮细胞系有效建立的几个关键性技术问题。指出外植体是影响初代愈伤组织状态的因素之一，提出了愈伤组织继代改造的一些措施、影响胚性悬浮细胞系建立的几个因素和判别某材料能否建成胚性悬浮细胞系的参考标准。     

ST悬浮细胞系的驯化与猪细小病毒的培养

将贴壁的ST细胞驯化为可单细胞悬浮生长的细胞,并进行猪细小病毒大规模培养。采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的ST-S细胞。结果表明,经悬浮驯化后的ST-S细胞呈现较好的单细胞悬浮生长状态,细胞呈圆球形,结团现象较少,胞体大小基本一致,生长速度正常,最大细胞密度可以达到每毫升4.5×10~6个细胞。说明经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的ST细胞株,为大规模工业化生产ST细胞提供技术支持。     

ST悬浮细胞系的驯化与猪细小病毒的培养

将贴壁的ST细胞驯化为可单细胞悬浮生长的细胞,并进行猪细小病毒大规模培养。采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的ST-S细胞。结果表明,经悬浮驯化后的ST-S细胞呈现较好的单细胞悬浮生长状态,细胞呈圆球形,结团现象较少,胞体大小基本一致,生长速度正常,最大细胞密度可以达到每毫升4.5×10~6个细胞。说明经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的ST细胞株,为大规模工业化生产ST细胞提供技术支持。     

菊芋悬浮细胞系的建立及其导管分子的体外分化

利用菊芋地下块茎作外植体,在附加1.2mg·L~(-1)2,4-D 的 MS 培养基上诱导愈伤组织形成,经同样 MS 液体培养基培养形成悬浮系;菊芋悬浮细胞转入含5.0mg·L~(-1)的6-BAP、1.0mg·L~(-1)2,4-D 的 MS 液体培养基内.经9d 培养可使约30%～50%悬浮细胞转化为具次生壁条纹的导管分子。