15株健康奶牛生殖道乳酸菌的分离鉴定及抑菌活性

为防治奶牛产后子宫内膜炎提供益生菌株,从健康奶牛生殖道分离筛选益生乳酸菌。利用子宫采样器采集28头产后45～65 d健康奶牛子宫内容物,通过体外培养、分离和纯化,结合形态、生理生化特征和16S rDNA序列进行鉴定,并检测菌株的抗菌活性和物质、抗生素敏感性及细胞黏附性。结果表明：共分离筛选出15株乳酸菌,分别为唾液乳杆菌7株,粪肠球菌4株,殊异肠球菌、海氏肠球菌、耐久肠球菌和绒毛肠球菌各1株。15株乳酸菌均具有较好的抗菌活性和抗生素敏感性;殊异肠球菌、海氏肠球菌、耐久肠球菌和唾液乳杆菌主要抗菌物质为有机酸;绒毛肠球菌和粪肠球菌主要抗菌物质除有机酸外还分泌细菌素。殊异肠球菌和绒毛肠球菌对奶牛子宫内膜上皮细胞具有较强黏附能力。殊异肠球菌和绒毛肠球菌可作为潜在的益生菌,用于开发防治奶牛子宫内膜炎的微生态制剂。     

散养茶花鸡源乳酸菌分离鉴定及益生特性研究

【目的】从国家级畜禽资源保护品种茶花鸡中分离乳酸菌,研究其益生特性,以期为禽用益生菌制剂研发奠定基础。【方法】采集散养茶花鸡新鲜粪便,使用MRS培养基分离乳酸菌,采用生理生化试验和16S r DNA基因序列分析法鉴定,并研究其胃肠道耐受性、抑菌活性、抗生素敏感性和肠上皮细胞黏附能力等益生特性。【结果】分离得到CHF4-1、CHF6-2、CHF7-2和CHF10-2共4株菌株。生理生化鉴定和16S rDNA序列分析结果表明:CHF4-1、CHF6-2、CHF7-2和CHF10-2分别为唾液乳杆菌、加氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和约氏乳杆菌;与参考菌株鼠李糖乳杆菌GG相比,CHF6-2和CHF10-2具有较强的胃肠道耐受性和抗菌活性;加氏乳杆菌CHF6-2除对头孢噻肟中度敏感之外,对其余9种抗生素均敏感,且其细胞黏附水平为(13.07±0.22)个/细胞,黏附能力最强。【结论】从散养茶花鸡粪便中分离得到唾液乳杆菌、加氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和约氏乳杆菌4株乳酸菌,其中加氏乳杆菌CHF6-2具有显著胃肠道耐受性、抑菌活性、抗生素敏感性和肠上皮细胞黏附能力等益生特性,可作为微生态制剂候选菌株进一步开展深层次研究。     

猪源发酵乳杆菌的筛选及其潜在益生性能

【目的】对从健康仔猪粪便中筛选分离出一株发酵乳杆菌的益生性能进行测试,为其在畜禽动物养殖中的应用提供参考。【方法】采用Rogosa SL完全选择性培养基分离出106株乳酸菌,通过革兰氏染色、酸和胆盐耐受初步筛选出1株潜在的饲用乳酸菌,经16S rDNA序列鉴定为发酵乳杆菌LF1,并对其益生性能潜力进行评估,包括抑菌活性(针对大肠杆菌K88、金黄色葡萄球菌、猪链球菌、沙门氏菌以及弧菌等12种病原菌)、对模拟胃液中酸性环境的耐受性、对胆盐的耐受性以及对小肠上皮细胞的粘附性。【结果】发酵乳杆菌LF1耐酸和耐胆盐的能力较强,显示出较强的益生菌潜力,但LF1菌株对猪肠道上皮细胞的粘附能力不强。在生物拮抗作用方面,发酵乳杆菌LF1的培养上清可以显著抑制多种常见动物病原菌生长。【结论】发酵乳杆菌LF1具有较好的益生性能,通过进一步的动物实验评估后,可以作为应用于畜禽养殖业的益生菌候选菌株。     

猪源生物被膜乳酸菌的筛选、鉴定与体外益生特性评价

将分离自健康猪新鲜粪便的乳酸菌进行功能性和安全性评价,旨在筛选出有利于猪健康生长的优良乳酸菌菌株。结果显示,共分离到2株对猪源大肠杆菌等病原菌具有抑制作用的乳酸菌菌株,并从中成功筛选出1株生物被膜形成能力较强的分离菌株L-8。经鉴定,分离菌株L-8为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii),具有一定的产酸能力,能够耐受胃内pH值4.0～10.0和肠道1%胰蛋白酶环境,对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)具有一定的黏附性,其生存能力和生长性能均较好。此外,分离菌株L-8对小鼠无致病性,具有安全性。综上,分离菌株L-8具有作为猪用益生菌的潜在益生特性和开发前景。     

荣昌猪肠道乳酸菌筛选及鉴定

通过稀释涂布法,在含有碳酸钙的MRS平板上选取有明显透明圈、革兰氏染色为阳性、接触酶实验为阴性的菌株,反复划线纯化培养并保存,然后经16SrRNA序列同源性分析鉴定菌株.结果从猪大肠中分离出5株乳酸菌,经鉴定D8为干酪乳杆菌、D12为鸟肠球菌同属菌株、D14为约翰逊氏乳杆菌、D15为唾液乳杆菌、D21为植物乳杆菌;从小肠中分离出4株乳酸菌,经鉴定XF为嗜酸乳酸菌、XH为乳酸乳球菌、XI为约翰逊氏乳杆菌、XQ为能动乳杆菌.表明荣昌猪肠道内含有丰富的乳酸菌群,乳杆菌是荣昌猪肠道内乳酸菌中的优势菌.     

乳杆菌TZ-5对高脂饮食大鼠血脂水平的干预作用研究

[目的]筛选出具有降血脂作用的天然乳酸菌。[方法]采用传统的MRS培养分离方法,从新疆哈萨克族自制干酪中分离活性菌株,通过体内试验研究分离菌株在大鼠体内的降血脂作用。[结果]从分离出的11株菌株中筛选到1株降胆固醇乳酸菌TZ-5,经鉴定为乳杆菌(Lactobacillus)。在MRS-THIO液体培养基中TZ-5乳酸菌对胆固醇的降解率达到38.75%。用乳杆菌TZ-5灌胃高脂饮食大鼠,在不同的灌胃时期试验组大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)的含量较对照组均有所提高,其中对TC和TG含量的影响最为显著。[结论]TZ-5乳酸菌是1株具有开发前景的高效降血脂的益生菌。     

海南文昌鸡源抑菌乳酸菌的筛选鉴定

为获取具有抑菌活性的海南文昌鸡源乳酸菌，笔者以海南文昌鸡的肠道粘膜及内容物为样品分离乳酸菌。通过菌株形态观察，革兰氏染色镜检、过氧化氢试验和16S rRNA基因序列测序鉴定乳酸菌；而后利用乳酸菌对酸和胆盐的耐受性及其抑菌试验从中筛选出热带动物肠道源抑菌乳酸菌。本研究共获得17株乳酸菌，分别为13株植物乳杆菌和4株粪肠球菌，其中植物乳杆菌对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌均有较高抑制作用，有一定耐酸耐胆盐的能力；粪肠球菌抑菌效果均较差。研究结果表明，筛选获得的海南文昌鸡源植物乳杆菌S4-1综合抑菌效果较好，可用于畜禽肠道益生菌制剂开发的后续研究。     

自然发酵甘薯酸浆中乳酸菌的筛选与鉴定

[目的]从天然乳酸菌菌株中筛选出对甘薯淀粉分离起主要作用的菌种。[方法]利用MRS培养基从自然发酵的甘薯酸浆中分离出13株乳酸菌菌株,通过发酵试验筛选出1株分离效果良好的乳酸菌菌株,并对其进行初步鉴定。[结果]根据菌落形态、个体形态及生理生化反应结果,初步鉴定筛选出的沉淀淀粉能力较好的菌株为乳杆菌,表明乳杆菌菌体本身或由其产生的代谢产物对淀粉具有絮凝作用。从发酵液的乳酸菌总数、pH值来看,乳酸菌总数偏高的发酵液,pH值一般较低,分离效果也较好,表明分离效果与乳酸菌总数及酸浆的pH值有关。[结论]该研究为实现甘薯酸浆的人工发酵生产奠定了基础。     

一株鸡源发酵乳杆菌益生菌的分离鉴定

筛选优质鸡源益生菌菌种,为畜禽微生态制剂的研发提供优质的菌株来源,为开发禽用微生态制剂提供安全高效菌种资源和理论支撑。试验以健康鸡肠道为分离材料,使用MRS培养基(乳酸菌细菌培养基)进行分离培养,并对分离菌株进行形态特征、生理生化鉴定及分子生物学鉴定。试验研究发现在鸡盲肠中分离获得一株细菌,鉴定为发酵乳杆菌,编号为J4。分离获得的菌株具有耐热、耐酸、耐胆盐等特点,同时对动物机体安全无毒,可作为鸡源发酵乳杆菌益生菌的优良候选株。     

鸡源乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性分析

从健康鸡肠道中自行分离筛选出9株乳酸菌株为试验菌株,通过考察菌种的生长速度、耐酸、耐胆碱、耐肠胃液,并以抑菌性能作为主要指标。通过产酸能力测定、耐酸能力测定、耐受肠胃极端环境性能测定得到2株乳酸菌,2株乳酸菌上清液经牛津杯双层平板法对金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、无乳链球菌等5株指示菌株进行抑菌试验,发现2株乳酸菌对5株指示菌株都具有非常明显的抑菌作用。采用16s rDNA分子标记对乳酸菌进行鉴定,并构建系统发育树。经分子生物学鉴定,L2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、L4为短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。     

传统酸面团中优势乳酸菌的分离及性能研究

以自然发酵的传统酸面团为研究对象,对其中的优势乳酸菌进行分离及鉴定,并评价其产酸性能。结果表明:共筛选到7株乳酸菌,经形态学及16S rDNA序列分析鉴定为面包乳杆菌1株、短乳杆菌1株、植物乳杆菌3株、白面粉乳杆菌2株;供试乳酸菌的产酸能力具有菌种及菌株特异性,其中植物乳杆菌L2-2产酸能力最强,37℃发酵24 h发酵液pH值可达3.81。     

侗族传统腌鱼中乳酸菌的分离鉴定与生物学特性

对侗族传统发酵腌鱼中的乳酸菌进行分离鉴定,并对其生长特性进行研究。从产品中分离得到乳酸菌疑似菌株16株,经生理生化鉴定,初步确定为消化乳杆菌(8株)、植物乳杆菌(4株)、草乳杆菌(2株)和发酵乳杆菌(2株)。结合生理生化鉴定结果,对样品中分离出的ZZY-6、CJY1-1、ZZY-3和CJY2-3等4株分离菌株进行16S r DNA基因序列分析,构建系统发生树。经分析可知,ZZY-6为消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius),CJY1-1为植物乳杆菌(L.plantarum),ZZY-3为草乳杆菌(L.graminis),CJY2-3为发酵乳杆菌(L.fermentum)。生长特性研究结果显示,分离所得菌株均具有良好的生长性能、产酸性能和耐盐性,但均未检测到脂肪酶活性,仅植物乳杆菌表现出蛋白酶活性。     

抗猪传染性胃肠炎病毒益生菌的分离、筛选及鉴定

试验从健康仔猪肠道内容物内分离筛选具有抗猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis coronavirus,TGEV)活性的益生菌。从健康仔猪肠道内容物内分离获得69株乳酸菌,通过致细胞病变(CPE)作用初步筛选出18株具有影响TGEV致细胞病变的乳酸菌,在体外试管平台上,将获得的18株乳杆菌分别与定量的TGEV感作后取上清,将病毒上清感染ST细胞,运用MTT比色法测定候选菌株对TGEV感染ST细胞的抑制作用。结果表明,18株中的2株益生菌对TGEV感染ST细胞有显著的抑制作用,其他16株对TGEV感染ST细胞的抑制作用不显著。对2株具有显著作用的益生菌进行生化鉴定及16SrRNA鉴定,最终确定为罗伊氏乳杆菌和发酵乳杆菌。     

鲊辣椒中益生细菌的计数与分离鉴定及功能研究

为获得优良的益生菌株,在鲊辣椒发酵过程中对其芽孢杆菌及乳酸菌进行计数。结果表明,其均在第4天达到最高值。从该时期共分离得到9株芽孢杆菌与10株乳酸菌,其中蜡样芽孢杆菌与植物乳杆菌占优势。5株芽孢杆菌对龙虾残饵降解研究表明,B1与B18这2株蜡样芽孢杆菌在48 h对残饵中淀粉降解率都高达60%以上,对蛋白的降解率达到50%以上,是净水的优良候选菌株。4株乳酸菌体外抗氧化研究表明,L1乳酸乳球菌乳酸亚种产酸最强,而抗氧化活性也最高,且含有丰富的胞外多糖,可作为发酵乳制品的候选菌株。     

小麦秸秆发酵液中优质乳酸菌的分离·纯化与鉴定

[目的]从小麦秸秆发酵液中筛选并鉴定适合于青贮添加剂的高效乳酸菌。[方法]用MRS＋CaCO3固体培养基筛选,分离出78株乳酸菌;经形态学、革兰氏染色、生理生化试验、产酸效率试验、耐酸能力试验和耐盐试验等挑选出43株产酸率高的乳酸菌。通过16S rDNA法对该乳酸菌进行鉴定。[结果]已获得43株产酸能力强的菌株1,6S rDNA鉴定结果表明,37株为副干酪乳杆菌亚种（Lacto-bacillus paracasei subsp.）1,株为鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）,5株为肠球菌（Enterococcus faecium）。[结论]从小麦秸秆中筛选出43株具有较强产酸能力的乳酸菌,对研发优质青贮饲料添加剂具有一定的指导意义。     

高效降胆固醇植物乳杆菌的筛选及其益生潜能初探

为筛选出高效降胆固醇乳杆菌,挖掘其潜在益生功能,从民间自制泡菜样品中分离乳杆菌,采用邻苯二甲醛法筛选高效降胆固醇菌株,利用16S rDNA进行分子生物学鉴定,并通过耐酸、耐胆盐及抑菌性实验,测定菌株的益生潜能。结果表明:1)从分离出的11株乳杆菌中筛选出PL2、PL5、PL16和PL194等4株高效降解胆固醇菌株,其体外胆固醇降解率分别为48.22%、51.67%、48.43%和48.56%;2)结合菌落特征、部分生理生化试验及16S rDNA基因序列比对鉴定4株乳酸菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);3)该4株乳酸菌均可在pH2.0的环境下生存3h,菌株PL2和PL5可以在0.3%的胆盐浓度下存活3h;4)菌株PL5对致病性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和福氏志贺氏菌均有显著的抑制作用。总之,植物乳杆菌PL5是具有开发前景的高效降胆固醇益生菌。     

藏灵菇发酵乳中乳杆菌的分离与鉴定

从藏灵菇发酵乳中分离益生乳杆菌,研究其生理生化特性,为功能性乳制品的开发提供优良菌种.先用乳酸菌分离培养基MRS从藏灵菇发酵牛乳中分离得到乳酸菌,再分离纯化出乳杆菌,并对分离的乳杆菌进行生理、生化鉴定,研究其生长特性.结果表明,用MRS培养基从藏灵菇发酵牛乳中共分离出乳杆菌菌株6株,通过生理生化试验确定这6抹分别为：2株发酵乳杆菌、2株嗜酸乳杆菌和2株短乳杆菌.将分离出的菌发酵鲜牛乳,在品尝过程中发现口感较酸,推断其有很强的产酸能力.     

利用PCR鉴定发酵肉制品中分离的植物乳杆菌

从自然发酵肉制品中分离得到100多株乳酸菌,通过对分离菌株发酵适应性和发酵特性研究,从分离菌株中优选出1株能够进行单菌株发酵的乳酸菌1.1MRS.采用快捷的PCR技术对1.1MRS进行了鉴定.通过生理生化初步鉴定为植物乳杆菌,菌株16srDNA序列分析充分证实了鉴定结果.     

藏灵菇发酵乳中乳酸菌的分离鉴定及其应用研究

采用MRS和M17选择性培养基从藏灵菇乳中分离乳酸菌,用生理生化方法进行鉴定.分离得到7株乳酸菌,其中2株乳酸球菌乳酸亚种,2株唾液链球菌、2株弯曲乳杆菌、1株类高加索乳杆菌.将分离出的乳酸菌用于酸奶的发酵,结果显示,球杆菌比例2∶1,温度40℃,接种量2.5％时效果最好.     

野猪粪便中乳酸菌的分离鉴定及特性研究

【目的】筛选安全的、具有优良特性的乳酸菌菌株,进一步研发益生制剂,为饲料添加剂等动物相关产品提供资源。【方法】从我国黑龙江省大兴安岭地区采集野猪粪便样品13份,编号后置于4℃保温箱迅速运回实验室,利用MRS培养基分离纯化乳酸菌。使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取分离菌株的基因组DNA,利用细菌16S rDNA通用引物进行PCR鉴定,将扩增得到的序列测序后在NCBI上使用BLAST与GenBank数据库中序列进行对比分析,确定各菌株的分类学地位。将鉴定后的乳酸菌菌株分别接种于酸性（pH 3.0）和含胆盐（0.3%）的MRS培养基,在不同条件下评价乳酸菌菌株的耐酸、耐胆盐特性。将过夜培养的乳酸菌于室温条件下静置,在不同时间测定其OD_600nm,进行自凝集能力评价;过夜培养的菌株分别与致病性埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌3种致病菌混合后于室温静置,进行共凝集能力检测。在体外,分别进行乳酸菌菌株对Caco-2细胞和IPEC-J2细胞的黏附能力测定,评价不同菌株的黏附能力。通过测定乳酸菌菌株对致病性埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌3种致病菌的抑菌环直径,评价分离菌株的抑菌活性。通过体内外试验评价乳酸菌菌株的安全性。在体外,分别以模式菌株嗜酸乳杆菌和金黄色葡萄球菌作为阴性对照和阳性对照,将3株乳酸菌菌株和对照菌株在血平板上划线,37℃厌氧孵育18—24 h,观察细菌菌落周围是否形成溶菌环,评价分离菌株的溶血特性。使用文献中已报道的毒力因子引物对分离的乳酸菌菌株进行PCR扩增,检测是否存在毒力因子的编码基因,评估分离菌株的安全性。在体内,将过夜培养的乳酸菌连续饲喂7周龄的BALB/c小鼠21 d,分别测定小鼠的初始体重和最终体重,观察计算体重变化情况;饲喂21 d后,解剖获取小鼠的脾脏、肝脏和肾脏计算器官指数,评价分离乳酸菌菌株的体内安全性。【结果】从野猪粪便中分离得到3株对酸和胆盐具备一定耐受力的乳酸菌,经鉴定分别为蒙氏肠球菌（Enterococcus mundtii）、耐久肠球菌（Enterococcus durans）和黏膜乳杆菌（Lactobacillus mucosae）。3株乳酸菌菌株均表现出较强的自凝集能力和对致病菌的共凝集能力,同时对Caco-2细胞和IPEC-J2细胞均表现出较强的黏附能力,抑菌试验结果显示黏膜乳杆菌对3种致病菌均具备较强的抑菌活性。经体内外安全性评价,3株乳酸菌菌株无溶血性,且均未检测到毒力基因,经其连续饲喂的小鼠行为表现正常、状态良好,其中,与对照组相比,黏膜乳杆菌饲喂后小鼠增重显著。【结论】从大兴安岭野猪粪便中分离的3株乳酸菌（特别是黏膜乳杆菌）具有良好的特性和安全性,具备进一步开发益生菌制剂的潜力。