培养液中不同浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响

采用上游法分离优化精子,以mTyrod's液作为基础培养液检测培养液中不同质量浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响,试验设4个肝素质量浓度:0,10,20,50 μg/mL,38.5℃、5%C02培养箱进行孵育,获能培养时间为6h.利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率,观测法检测精子活力...     

获能液和DMSO对猪精子获能效率的影响

为了探讨获能液和二甲基亚砜(DMSO)对猪精子获能效率的影响,试验采用SPSS 14.0软件进行分析,各处理平均值采用邓肯氏多重比较。结果表明:CM获能液获能3小时时超激活运动率为57.9%;mTBM获能液获能4小时时超激活运动率为55.7%;0.1%DMSO获能液获能30分钟时精子活率为70.20%,顶体反应率为70.44%,与其他组相比差异显著(P<0.05)。     

不同发情阶段的绵羊血清对绵羊精子获能和体外受精的影响

为比较不同发情阶段和不同浓度的绵羊血清在绵羊体外受精过程中对绵羊精子体外获能及存活时间、受精效果的影响,试验以绵羊输卵管合成液(SOF)为基础获能液,在其中分别添加发情当天、发情结束和发情间期的绵羊血清,血清浓度分别为0%、2%、5%、10%和20%.利用金霉素荧光染色(CTC,chlortetracycline)法及体外受精2种方法检测不同血清及其浓度对绵羊精子获能的影响.结果表明:1)当在获能液中添加发情当天绵羊血清时,在10%和20%血清浓度下作用45 min的获能效果最好,其获能而且未完成顶体反应的精子率(45.28%和44.52%)显著高于0%、2%和5%血清浓度组(30.14%、28.71%和35.49%,P<0.05);2)当在获能液中添加发情结束时或发情间期的绵羊血清时,在含不同浓度的这2种血清的获能液中作用45 min后,各浓度组引起的获能精子百分率变化均不显著(P>0.05);3)在含20%发情当天绵羊血清的获能液中,精子的存活时间(18 h)显著高于含20%发情结束和发情间期的绵羊血清的获能液(11 h;11 h);4)在不同血清诱导获能后进行的体外受精的试验中,添加发情当天绵羊血清组的卵裂率和囊胚率(62.5%和26.25%)均显著高于发情结束时血清组(42.22%和11.11%,P<0.05)和发情间期血清组(37.36%和15.38%,P<005).以上结果表明:在进行绵羊体外受精试验中,采用20%发情当天绵羊血清作用45 min比采用发情结束和发情间期的绵羊血清能更好地诱导精子获能.     

钙离子载体及咖啡因对绵羊精子获能的影响

通过添加不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10μmol/L)的钙离子载体(A23187,IA)及2 mmol/L咖啡因,探讨不同作用时间其对绵羊精子体外获能的影响。结果发现,IA浓度越高,精子的体外获能率越高,顶体反应率越低,活力越低,死精子就越多;而延长作用时间对获能、顶体反应的影响不明显。IA和咖啡因共同作用后,咖啡因能够促进IA诱导顶体反应的发生。建议用IA诱导绵羊精子获能时,其浓度以0.05~0.2μmol/L为宜,作用时间1 min。     

孕酮和雌二醇对绵羊精子体外获能的影响

试验探讨孕酮和雌二醇对绵羊精子体外获能和顶体反应的影响。将绵羊精子分别加到含不同浓度孕酮(1、10和100μmol/L)和雌二醇(1、10、和100μmol/L)的输卵管合成液(SOF)中,作用不同时间后分别取出部分精子样本进行金霉素荧光染色(chlortetracycline,CTC),通过精子与CTC结合染色的不同类型来评定孕酮和雌二醇对绵羊精子的作用。结果表明:雌二醇对绵羊精子体外获能和顶体反应都没有显著的促进作用(P>0.05);一定浓度的孕酮和雌激素组合抑制绵羊精子体外获能和顶体反应的发生(P<0.05)。     

不同培养液对蓝狐精子体外获能效果的比较试验

采用上游法分离优化精子,用mTyrod’s液(T)、BO液(B)以及高渗液(HIS)3种不同培养液,在5%CO2的培养箱中进行获能培养,获能培养时间为6h。利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率以及观测法检测精子活力。在培养的0、1、2、4、6h时分别检测上述指标并统计分析,从而筛选出适合蓝狐精子体外获能的培养液。结果显示:B培养液优于T、HIS培养液,最佳获能培养时间t≥6h;HIS可以提高精子顶体反应率,但较高的渗透压不利于精子保存,不建议使用。     

孕酮对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

通过在牛精子获能液中添加不同浓度的孕酮,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行了研究。通过对顶体反应、超激活、早期胚胎发育率及其与精子孵育时间对精子活率的观察,筛选出获能液中最适孕酮浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明,单独添加孕酮不能诱导牛精子体外获能;孕酮只能诱导获能精子发生顶体反应,而且有一个剂量依赖关系,以1μg/mL的添加效果最好。当浓度超过1μg/mL、作用时间超过4h时,精子活率下降;获能液中添加孕酮,无论剂量多少,对胚胎体外发育无明显的促进作用。     

钙离子载体对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的钙离子载体,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育作了研究。通过对顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率的观察,筛选出获能液中最适的钙离子载体浓度,作用时间及其有利于早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明:钙离子载体在诱导牛精子获能上存在一个浓度-时间阈值,其最佳浓度和时间组合是0.1μM处理2min或者0.15μM处理0.5min,此时的囊胚率最高;钙离子载体的添加不能诱导牛精子获能的发生。     

肝素浓度对辽宁绒山羊精子体外获能的影响

在TALP液中添加不同浓度(25、50、100μg/mL)的肝素对辽宁绒山羊精子进行获能处理,在显微镜下检测处理1、2、3、4、5h后的精子活力,用考马斯亮蓝染色法检测获能处理0.5、1、2、4h后的精子获能状况,探讨肝素浓度对绒山羊精子活力、存活时间、获能率的影响。结果发现,在38.5℃、5%CO2、饱和湿度条件下,精子活力随肝素浓度升高而下降,3 h以后25μg/mL肝素组精子活力显著高于其它肝素组(P<0.05)。添加肝素组获能率显著高于对照组(P<0.05),各肝素组精子获能率差异不显著(P>0.05)。对照组精子存活时间最长,25μg/mL肝素组精子存活时间为10.12 h,显著高于其它两组(P<0.05)。表明25μg/mL肝素处理辽宁绒山羊精子体外获能较为适宜。     

β-谷甾醇、淫羊藿苷对猪精子体外获能效果的影响

探讨中药单体成分β-谷甾醇(β-sitosterol)、淫羊藿苷(Icariin,Ica)对猪精子体外获能的影响,以期提高体外受精效果.以mTBM+肝素获能液为对照组,分别添加β-谷甾醇、淫羊藿苷的低、中、高3个剂量为试验组,利用金霉素荧光染色(chlortetracycline,CTC)法结合体外受精检验体外获能效果.在mTBM+肝素中添加β-谷甾醇2(中剂量0.08 mg/L)、淫羊藿苷2(中剂量17 mg/L)的B型精子率(获能精子)显著高于对照组和其他剂量组(P＜0.05),F型精子率(未获能精子)显著低于对照组和其他剂量组(P＜0.05),AR型精子率(发生顶体反应精子)与对照组和其他剂量组差异不显著(P0.05),卵裂率和囊胚率均极显著高于对照组和其他剂量组(P＜0.01);表明中药单体成分β-谷甾醇、淫羊藿苷能够显著促进猪精子体外获能效果.     

不同浓度肝素对塔里木马鹿精子体外获能效果的影响

为了探讨不同浓度肝素对塔里木马鹿精子体外获能的影响,试验随机取塔里木马鹿冻融精子,添加到SP-TALIP获能液中并添加不同浓度(0,10,20,50,100μg/m L)的肝素,在显微镜下检测0,2,4,6,8小时时的精子活力,试验采用金霉素(CTC)染色法检测精子获能率及顶体反应率等指标,探讨不同浓度肝素对塔里木马鹿精子活力、存活时间、获能率、顶体反应率的影响。结果表明:精子活力随肝素浓度升高而呈下降趋势,4 h后10μg/m L和20μg/m L肝素组精子活力显著高于其他组(P0.05),其中20μg/m L肝素组精子存活时间最长,显著高于其他组(P0.05)。随着培养时间的延长,各试验组精子获能率与对照组相比明显提高,2小时、4小时时20μg/m L肝素组精子获能率显著高于其他组(P0.05);各试验组精子顶体反应率与对照组相比有升高趋势。说明获能液中添加20μg/m L肝素可有效诱导塔里木马鹿精子体外获能。     

咖啡因对马鹿精子体外获能作用的研究

为研究不同浓度咖啡因对马鹿精子体外获能的作用,取健康马鹿冻精,分别以0、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L咖啡因处理液作用精子,在孵育0、15、30、60、120、240 min的各个时间点取样,观察精子活力,并用考马斯亮蓝染色法检测各组精子的顶体反应(AR)。结果表明:咖啡因浓度为5.0 mmol/L时精子活力最高(80.19±0.52%),马鹿精子顶体反应率最高(61.94±1.50%),与对照组相比差异极显著(P<0.01),咖啡因作用30 min时各组的顶体反应率达到最高值。     

不同浓度的甘油和DMSO对蒙古羊精子活力的影响

研究由两个实验组成:实验一探讨添加不同浓度的甘油(1%、3%、5%、7%,V/V)对冷冻精子活率的影响,实验二探讨在37℃或5℃下添加不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)(1%、1.25%、1.5%、1.75%,V/V)对冷冻精子活率的影响.通过实验组获得蒙古羊的最优的甘油浓度稀释液条件下,测定精子解冻后的活力、直线运动率、成活率及顶体完整率.同样用DMSO代替甘油测定精子活率、直线动动率、成活率和顶体完整率,实验结果显示前一项指标得到显著的改善(P＜0.05),且在37℃添加7%甘油效果最好.但是顶体完整率随着甘油或DMSO浓度的增加而出现下降趋势,也就是顶体完整率在5℃下添加1%的甘油或1.75%的DMSO效果较好(P＜0.05).实验中在37℃中增加DMSO顶体完整率显著下降(P＜0.05),此外,在5℃时添加1%DMSO时精子顶体完整率优于其他实验组.实验中在37℃条件下加入1.75%的DMSO比在5℃下精子活力好,在37℃添加7%的甘油比在5℃下添加7%的甘油效果显著(P＜0.05).研究结果表明,对于蒙古羊甘油仍是较好的精子冷冻保护剂.     

不同获能条件对猪精子体外获能和体外受精的影响

探讨猪精子在mTBM和TALP中分别获能2、3、4、5h和6h对体外获能的影响,并研究最适获能时间的精子体外受精的效果。结果表明:随着获能时间的延长,猪精子顶体反应率逐渐升高、质膜完整性逐渐下降,获能6h时的顶体反应率显著高于其他时间组,分别为52.5%和50.8%(P<0.05);质膜完整性显著低于其他时间组,分别为30.5%和31.4%(P<0.05);可获能4h的超激活运动率显著高于其他时间组,分别为56.6%和54.5%。将鲜精与冻融的精子获能4h后与成熟的猪卵母细胞进行体外受精,mTBM处理组的卵裂率显著高于TALP,分别为42.7%与40.2%和35.9%与33.4%,但鲜精与冷冻精液组间差异不显著。     

水貂银狐精子体外获能前后表面元素变化的研究

哺乳动物精子的体外获能是体外受精中的一个关键问题,而元素成分又在精子获能中发挥着极其重要的作用。Yanagimachi(1982)提出仓鼠精子的体外获能与钙元素有关;Mrsny等(1987)发现钾、镁元素是仓鼠精子获能和顶体反应所必需的;Hyne(1984)又证实钠也是豚鼠精子体外获能或顶体反应最重要的元素。然而,在野生动物水貂和银狐精子获能前后元素成分的变化,至今国内外尚     

CTC法结合体外受精比较不同方法对绵羊精子体外获能的影响

为比较不同获能方法对绵羊精子的获能效果，新鲜绵羊精液分别经肝素上游法(swim-up)、钙离子载体(IA，A23187)诱导法、Percoll离心法和Percoll离心后肝素孵育法进行精子获能的诱导后与体外成熟的绵羊卵母细胞进行体外受精，并利用金霉素荧光染色（chlortetracycline，CTC）法结合各自相应的体外受精结果对其获能效果进行检验。结果显示上游法处理后精子的获能比例和受精后的卵裂率均高于其它组, 说明肝素上游法可以较好的诱导绵羊精子获能。     

葡萄糖在牛体外受精及胚胎发育中的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的葡萄糖,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行研究,通过观察顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率,筛选出获能液中最适葡萄糖浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度.结果表明:葡萄糖是精子获能和维持超激活运动的主要能源物质,其代谢过程中产生的活性氧在牛精子体外获能、受精过程中起重要作用,高浓度(超过9.15 mM)葡萄糖有利于获能的完成;但是对早期胚胎发育不利,对早期胚胎发育来说其最适添加量为6.10 mM,此时的囊胚率最高.     

猪卵泡卵母细胞的体外成熟与体外受精

本试验对猪卵泡卵母细胞不同体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了研究。结果表明,体外成熟培养44 h左右,精子获能时间在1～2 h之间,精卵共孵育时间在6～8 h之间,受精后卵裂率最高。     

延边黄牛精子顶体反应3种检测方法的比较

试验以延边黄牛冷冻精子为材料,用肝素诱导精子体外获能后分别用考马斯亮蓝水溶液、考马斯亮蓝高氯、台盼兰-姬姆萨3种不同方法进行染色,并同时做延边黄牛卵母细胞穿卵试验,以求证精子顶体反应与体外受精率的相关性。     

猪精子不同处理方式对其IVF的影响

猪体外受精(in vitro fertilization,IVF)技术效率的不稳定性限制了该技术在畜牧生产中的应用。本研究比较了精子获能前后的状态和活精子数之间的关系;精子获能后的浓度和状态对IVF后胚胎卵裂率、囊胚率的影响;不同个体来源的精子混合后对IVF卵裂率、囊胚率的影响。结果表明:精子获能前后,活精子数无显著性差异(P>0.05);检测精子的浓度与状态与卵裂率、囊胚率无直接关联;利用混合精子进行IVF,单一精子所得到的IVF囊胚率分别是A17.00%、B 12.24%、C 33.00%、D 4.81%、E 10.00%、F 22.00%,混合精子的囊胚率分别是A+B 77.00%、C+D 67.01%、E+F 35.50%,混合精子和单一精子的囊胚率差异不显著。