奶牛半胚裸露冷冻保存试验报告

本试验研究了不同冷冻方法、半胚冷冻前不同培养时间及不同冷冻保护液对奶牛7日龄半胚裸露冷冻效果的影响。结果以10％（V／V）甘油＋10％（W／V）葡聚糖（T－500）＋0．1M蔗糖／20％FCS－PBS溶液为冷冻保护液，裸露冷冻冻前培养1．0小时的半胚，获得了82．4％（14／17）的较高存活率，试验结果表明，半胚冷冻前培养时间及不同保护淮对奶牛半胚裸露冷冻有显著影响。     

高效液相色谱法测定博落回注射液中血根碱和白屈菜红碱的含量

利用高效液相色谱法测定博落回注射液中血根碱和白屈菜红碱的含量。采用Agilent1100型高效液相色谱仪,色谱柱为AgilentEcpliseXDB—C18（5μm,4．6mm×250mm）,流动相为三乙胺溶液-乙腈（75：25,V／V）,流速1．0mL／min;检测波长270nm;柱温35℃。结果表明：血根碱在0．5～100μg／mL范围内线性关系良好（R2=0．9999）,平均加样回收率（n=3）为96．1％～97．9％,RSD为0．8％～1．8％;白屈菜红碱在0．5～100μg／mL范围内线性关系良好（R2=1）,平均加样回收率（n=3）为96．8％-98．8％,RSD为0．6％～1．0％。本法简单快捷,精密度好,可为制定质控标准提供参考。     

HPLC法测定徐长卿中绿原酸的含量

建立HPLC法测定徐长卿中绿原酸的含量。采用索氏提取法以70％的甲醇水溶液为提取剂对徐长卿中的绿原酸进行提取。在SHIMADZU C18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相乙腈-0．5％磷酸水溶液（1：9,V/V）;流速1．0mL/min;柱温25℃;检测波长327nm的条件下进行检测。结果表明,绿原酸在0．232—4．640μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0．9997。平均回收率为99．32％,RSD为0．216％（n=5）。该方法简便、可靠、重现性好,可作为徐长卿中绿原酸含量测定的方法。     

奶牛血液中蓖麻碱含量的HPLC检测

建立了血液中蓖麻碱残留量的高效液相色谱（HPLC）检测法。用三氯甲烷提取蓖麻碱，除去蛋白质和脂肪后，用HPLC法对其进行测定。采用Hypersil ODSC C18色谱柱（250mm×4．6mm，25μm），水-乙腈（9：1，V/V）为流动相，流速0．8mL／min，检测波长为220nm。结果显示，在0．26—5．2μg范围内，蓖麻碱峰面积与质量的线性关系良好，回归方程为y=1．57×10^4 x-4．93×10^5，r=0．999，RSD=3．82％。牛血中蓖麻碱平均回收率为72．1％，RSD为2．54％（n=5）。饲喂蓖麻粕的牛血液中蓖麻碱的含量为0．512μg／mL。     

HPLC-ECD法测定大观霉素的含量

建立了HPLC—ECD法测定大观霉素含量的分析方法。采用高效液相色谱-电化学检测器,Waters XBridge C18色谱柱（4．6mm×250mm,5μm）,以pH3．2的革酸盐缓冲溶液-乙腈（1000：105,V：V）为流动相,流速1．0mL／min;柱后衍生溶液为21g／L的NaOH溶液,流速0．5mL／min;ECD系统参数：极性为阳性,检波＋0．12V,氧化电位＋0．70V,还原电位-0．60V,范围5μA。结果表明,大观霉素及4R一二氢大观霉素在40～320μg／mL范围内呈良好的线性关系（大观霉素r=0．9999,4R-二氢大观霉素r=0．9992）,平均回收率为100．0％（n=9）,RSD为0．2％。该方法解决了微生物效价测定大观霉素含量偏高的难题,且操作简便、结果准确,可用于大观霉素及相关制剂产品的质量控制。     

双黄败毒颗粒中黄连的薄层荧光扫描分析

应用薄层色谱荧光扫描法测定双黄败毒颗粒中小檗碱的含量并鉴别黄连药材。样品经提取、点样、薄层展开后，采用荧光扫描进行含量测定；展开剂为苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：浓氨试液=6：3：1．5：1．5：0．5（V／V）的混合液；激发波长λ=366nm。实验结果显示盐酸小檗碱的线性范围为0．041～0．369μg（R^2=0．9995），平均回收率为100．7％（RSD=2．56％），表明该法简便、快速、经济，可作为本制剂主药黄连的定性鉴别及小檗碱定量分析的有效方法。     

火焰原子吸收光谱法测定泛酸钙中的钙含量

用火焰原子吸收光谱法测定泛酸钙中的钙含量。以氯化钾溶液（0．1％，m／V）配制泛酸钙检测液，可消除空气-乙炔火焰的电离干扰作用。方法的线性范围为0．50～4．00μg／mL（r=0．9992），加标平均回收率为98．7％，RSD为0．46％（n=9）。     

摩拉、尼里水牛与本地水牛成胚后的胚胎移植研究

为了在建立稳定的水牛胚胎体外生产技术的同时,开展胚胎移植技术研究,探讨水牛体外胚胎质量、安全性、移植方法以及移植效果。实验采用摩拉（Murrah）、尼里／拉菲（Nili／Rivi简称尼里）水牛冻精与本地水牛卵母细胞进行人工体外受精生产的鲜胚和冻胚,分别以本地母水牛、摩拉和尼里母水牛为受体,进行胚胎移植。结果表明：鲜胚移植受胎率为44．40％（36／81）,平均每头受体移胚1．83次,产下36头犊牛,繁殖率为83．7％（36／43）;冻胚移植受胎率为32．0％（8／25）,平均每头受体移胚1．67次,产犊8头,繁殖率为53．3％（8／15）,犊牛全部成活,其中双胞胎3例,采用人工授精与胚胎移植共生的双胞胎1例。     

老芒麦细胞遗传学特性分析

通过对老芒麦（Elymus sibiricicus）根尖细胞和花粉母细胞分裂过程中的染色体形态和行为特征的观察分析,结果表明：老芒麦染色体数目为2n=28,核型公式：2n=4x=28=16m＋10sm＋2M,属1A核型,染色体组型属对称型。通过对花粉母细胞减数分裂的几个典型过程中染色体行为的观察显示,终变期同源染色体配对率高,后期Ⅰ、后期Ⅱ染色体同步均衡分离,产生的配子具有恒定数目染色体。几种不同方法测定其花粉生活力表明老芒麦花粉育性较高。     

饲料中呋喃唑酮的HPLC法测定

建立了高效液相色谱（HPLC）法测定饲料中违禁药物呋喃唑酮的含量。饲料中呋喃唑酮用乙腈-甲醇（1：1，V／V）提取，中性氧化铝SPE柱净化。呋喃唑酮的线性范围为0．02～1.0μg／mL（r=0．9999），3种加药浓度进行回收率测定，回收率为86．3％～104．5％之间，批内变异系数小于1．10％，本方法的最低检测限为0．5μg／g。     

兽用吡喹酮-聚乳酸-羟基乙酸缓释植入棒含量测定及释放度考察

建立了吡喹酮-聚乳酸-羟基乙酸（吡喹酮-PLGA）缓释植入棒含量测定的HPLC法,并对其释放度进行了考察。以甲醇-水（100：40,V／V）为流动相,采用GraceC18反相色谱柱（4．6mm250mm,5μm）,流速1．0mL／min,紫外检测波长263nm,在此试验条件下,吡喹酮在10—200μg／mL范围内与峰面积线性关系良好,r=0．9999;平均回收率为99．48％,RSD为0．53％（n=9）。三批样品的含量分别为98．96％、98．67％和98．81％,该方法简单、快捷、辅料无干扰、准确度高,适于吡喹酮-PLGA植入棒的含量测定。吡喹酮-PLGA植入棒以骨架溶蚀释放机制缓慢释放,释药期可达三周,释放度高于300μg／d。     

响应面法优化羊乳果蔬纸加工工艺

以羊乳、胡萝卜、山楂为主要原料生产羊乳果蔬纸,利用单因素试验并结合响应面分析法确定最佳的工艺参数;采用物性测定仪对羊乳果蔬纸进行粒子群算法结合质地剖面分析测定,比较山楂的加入形式对产品物性的影响.结果表明:制作羊乳果蔬纸时,以山楂汁的形式加入比以山楂浆的形式加入后所得的产品感官品质好;最佳工艺条件为:羊乳与胡萝卜的比例为5∶8(V/m),山楂汁与羊乳的比例为3∶5(V/V),复合稳定剂(以质量分数计,下同)0.87％、β-环糊精0.12％、护色剂0.1％、白砂糖10％、蜂蜜2.4％.在此最佳条件下,生产出的羊乳果蔬纸口味独特,酸甜可口,具有羊乳的奶香味和胡萝卜的香味,以及胡萝卜和山楂混合的色泽,外观宛如纸张,感官评分高达91.32分,与模型预测值的相对误差约为1.68％.     

不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响

本文主要研究了①离子霉素（Ion）＋6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）、②Ion＋放线菌酮（CHX）、③体积分数7％乙醇＋6-DMAP、④体积分数7％乙醇＋CHX四种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ion和7％乙醇的处理时间为5min,6-DMAP的处理时间为4h．CHX的处理时间为5h。结果表明,重构胚与颗粒细胞单层细胞共培养2d后,各组卵裂率分别为52．7％、51．5％、53．2％和54．0％．差异不显著（P〉0．05）;培养8d后,①组激活的囊胚发育率（20．0％）极显著高于其他组（P〈0．01）,其他各组之间差异不显著．分别为8．5％、10．2％和6．1％;培养10d后,①组激活的囊胚孵化率（10．7％）极显著高于其他组（P〈0．01）．其他各组之间差异不显著,分别为2．3％、3．0％和1．8％。表明,4种激活方法均可以有效地激活重构胚,但Ion＋6-DMAP法激活重构胚的囊胚率和囊胚孵化率均极显著高于其他3组,说明Ion＋6-DMAP激活法有利于牛重构胚的发育．可以获得较理想的囊胚率．是胞质内全细胞注射法克隆的理想激活方法。     

绵羊非繁殖季节体内与体外冻胚移植效果研究

在非繁殖季节，利用萨福克、无角道塞特和边区菜斯特品种羊的体内或体外冷冻胚胎，以小尾寒羊为受体进行胚胎移植，结果如下：受体羊的同期发情率达76．1％，体内冻胚的受胎率（54．5％）和胚胎利用率（50，0％）均明显高于体外冻胚的受胎率（26．1％）和胚胎利用率（22.7％）（p＜0.001），差异极显著。     

非繁殖季节胚胎因素对绵羊胚胎移植影响的研究

在非繁殖季节（6月份）利用进口绵羊胚胎，手术法移植。通过胚胎类型、冷冻胚胎解冻后停留时间以及胚胎发育阶段对绵羊胚胎移植效果的分析。得出以下结论：①鲜胚移植妊娠率和产羔率显著高于冻胚：鲜胚为61.11％（11/18）和50.00％（9/18），冻胚为48.11％（153/318）和46.86％（149/318）；②随冷冻胚胎解冻后停留时间的延长胚胎移植效果有升高的趋势；③从桑椹胚到囊胚时期胚胎发育阶段对胚胎移植效果没有明显影响。     

鸡胚大头开孔加抽蛋清原壳体外培养的研究

试验以3日龄种鸡胚蛋为实验材料,通过在小头抽取不同量的蛋清和在大头顶端开3种直径分别为0．5、1．0、1．5em圆孔的方法对3日龄鸡胚原壳体外培养进行研究。结果表明：（1）抽取9ml蛋清后,鸡胚的发育受到的影响最大,孵化率为33．3％,明显低于3“和6ml组（P〈0．01）;抽取3ml和6ml蛋清对3日龄鸡胚的影响较小（P〉0．05）,孵化率分别为74．3％和76．5％。（2）在小头抽取6ml蛋清后再在大头顶端开直径分别为0．5、1．0、1．5cm的圆孔,以开孔直径为0．5cm孵化率最高,随着开孔直径增大,鸡胚的孵化率呈现极显著下降的趋势。     

甜地丁中槲皮素的薄层鉴别和含量测定

为完善甜地丁质量标准,采用薄层色谱法对甜地丁中槲皮素的鉴别进行了研究,并用高效液相色谱法测定其含量。薄层色谱以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7：5：0．5）为展开剂,高效液相法色谱柱为C18（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为甲醇-0．3％磷酸溶液（50：50）,检测波长为360nm,流速1mL／min,柱温25℃,进样量10μL。结果表明薄层色谱法能对槲皮素实现有效分离,高效液相色谱法槲皮素进样浓度在5。100μg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=O．9997）;样品平均回收率为96．1％（n=6）,RSD为0．7％。本方法为进一步控制甜地丁的质量提供了依据。     

高效液相色谱法测定银翘片中牛蒡苷含量的方法建立

为完善银翘片质量标准,采用高效液相色谱法对银翘片中牛蒡苷的含量测定进行了研究。色谱柱为C18（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈-0．1％冰乙酸溶液（25：75）,检测波长为280nm,流速1mL/min,柱温25℃,进样量10μL。牛蒡苷进样浓度在0．1～2mg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999）;样品平均回收率为96．5％（n=6）,RSD为1．3％。本方法简便、准确度高、重复性好,为进一步控制银翘片的质量提供了依据。     

新城疫V4＋C30复合疫苗的制备和免疫研究

将新城疫病毒V4株与克隆－30株组成复合疫苗，两疫苗株在等浓度（1：500稀释）条件下不存在明显的相互干扰现象，高浓度（1：10稀释）V4株可以抑制低浓度（1：500稀释）C30株致死鸡胚的能力，免疫研究表明，复合疫苗兼顾了两种疫苗株的优点。     

毛细管气相色谱法测定动物性食品中六六六和滴滴涕的残留量

采用毛细管气相色谱法对动物性食品中有机氯农药六六六（HCH）和滴滴涕（DDT）的残留进行检测。样品经高氯酸：冰醋酸（1：1,V/V）消化,正己烷提取,无水硫酸钠脱水,浓硫酸净化,采用DB5弹性石英毛细管柱,经程序升温分离,微电子捕获器（μECD）检测六六六和滴滴涕的残留量。方法的检出限为0．38～1．20μg/kg,加样平均回收率为81．37％～108．02％,相对标准偏差（RSD）为0．36％-2．35％。此方法灵敏度高,选择性好,操作简便。