实时定量PCR技术在动物疫病研究中的应用

实时定量PCR（real-time quantitative PCR）是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。实时定量PCR继承了PCR技术灵敏、快速、特异的优点,同时又克服了PCR技术中存在的假阳性率高、易污染、EB染料对实验人员的危险以及不能进行准确定量等缺点。实时定量PCR实现了PCR从定性或半定量到准确定量的飞跃,目前,已经成为分子生物学和医学研究等领域的重要工具。本文就实时定量PCR技术及其在动物研究领域中的应用作一综述。     

聚合酶链反应技术及其应用

聚合酶链反应（PCR）技术自1985年发明至今不断得到发展和完善,在常规PCR技术的基础上,结合免疫学、计算机技术、原位杂交等技术的利用和相关仪器的运用,衍生出了各种PCR方法和技术,如原位PCR、复合PCR、反向PCR、定量PCR、不对称PCR、电子PCR及PCR芯片等。这些衍生出的PCR新类型和新方法有着独特的技术特点,解决了以往传统PCR的局限性。PCR技术作为一种革命性的新技术将不断推动分子生物学及相关学科的发展,并广泛应用于病原诊断、基因表达、遗传病检测等生命科学研究领域。     

数字PCR技术及对动物疫病检测应用

数字PCR是近年发展起来的一种核酸绝对定量的检测技术,与传统的PCR和荧光PCR技术相比,数字PCR具有较好灵敏度、准确度和重复性,可实现绝对定量分析,为动物疫病的早期诊断和病原的定量检测提供了一个新平台。本文介绍了数字PCR的技术原理,并对该技术在动物疫病检测领域的中应用进行综述。随着数字PCR技术的发展,相关动物疫病配套检测试剂的研发,数字PCR技术将在动物疫病中得到广泛应用。     

PCR方法鉴定牛早期胚胎性别研究进展

对用于早期胚胎性别鉴定的多重PCR、巢式PCR、引物一扩展预扩增PCR、非电泳PCR和LAMP法等扩增技术进行了综述,并针对早期胚胎性别鉴定技术在养牛业生产中的应用现状和存在问题进行分析与讨论,展望了PCR性别鉴定技术在养牛业中广阔的商业应用前景。     

PCR在畜禽疫病诊断上的应用及研究进展

PCR技术是一门非常实用的分子生物学新技术。其特点在于敏感性强、特异性高。它在兽医临床诊断中尤其适用于那些培养困难和抗原性复杂的细菌的检测鉴定 ;诊断在基因上具有同源相似性的多重病毒感染 ;并应用于研究支原体 ,螺旋体等其它致病微生物引起的疾病。PCR技术敏感性极高 ,因此在实际操作中容易出现假阳性现象 ,同时存在产物不易纯化 ,操作步骤繁琐、耗时较多等缺陷 ,针对这些问题 ,最近出现了固相 PCR、PCR-EL ISA液相杂交技术、实时 Taq Man-PCR技术、PCR基因芯片、DNA芯片 ,这些 PCR技术新的进展有效的克服了 PCR技术的不足。随着研究的深入 ,未来PCR技术将会作为实验室常规的检测技术广泛应用于诊断病原、肿瘤细胞监测、基因表达、遗传病检测     

纳米PCR技术及其在动物疫病检测领域的应用

纳米聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术是将纳米材料应用PCR所形成的一门新兴技术,提高了PCR检测的准确性、可靠性。本文重点介绍了主要用于PCR反应的纳米材料及其特性,纳米材料增强PCR反应的机制,及其在动物疫病检测中的应用和未来发展前景。     

PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用

PCR是一种体外核酸扩增技术 ,具有敏感性强、特异性高、快速、简便等优点 ,在医学、生物学等领域中得到了广泛应用。文章系统地阐述了PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用 ,并对引物基因设计、PCR扩增过程中的技术参数和常见疑难问题做了归纳总结。同时简要介绍了PCR技术的研究进展 ,展望了今后微生物检测的发展方向     

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策

PCR(polymerase chain reaction,聚合酶链式反应)技术是美国Cetus公司人类遗传研究室的科学家Mullis于1985年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,又称为基因的体外扩增法。这种技术操作简单,容易掌握,有极高的灵敏度,结果可靠。近几年,随着PCR相关技术的发展,复合PCR、定量PCR、荧光PCR等PCR技术在动物疫病的快速检测方面得到了广泛应用,为动物疫病的诊断及检验检疫提供了良好的依据。但该方法较强的扩增能力也带来了令人头痛的问题?易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。1引起PCR污染的因素1.1 PCR试剂的…     

多重PCR技术在动物疫病诊断中的应用探讨

<正>一般的PCR技术只能运用于一对引物当中,且在该技术干预下只能扩增出一个核酸片段,一般PCR技术只能对单一致病因子进行鉴定。随着现代医疗技术的发展,一般PCR技术逐渐发展出多重PCR技术。多重PCR技术,又称为多重引物PCR,它的技术反应特点是在同一个PCR反应体系里面,通过添加两对或两对以上的引物,该技术能同时实现多个核算片段的扩增,多重PCR技术反应原理、反应使用的试剂以及具体操作过程均与一般PCR技术相同。临床上主要采用多重PCR技     

实时荧光PCR技术在动物疫病诊断中的应用

近年来，实时荧光PCR技术在动物疲病诊断中的应用得到了进一步的发展，在诊断动物的病毒性、细菌性和寄生虫性疫病中得到了广泛的应用。实时荧光PCR不仅实现了常规PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，实时荧光PCR技术由于多使用了一条可与模板互补配对的荧光探针，提高了特异性，并且由自动化仪器收集荧光信号，避免了肉眼判断的主观性，又可进一步提高灵敏度；实时荧光PCR技术全封闭反应，无须PCR后处理，避免污染，保证了结果的可靠性和重复性。随着实时荧光PCR试剂盒的进一步开发，实时荧光PCR技术将会在动物疫病诊断中得到更加广泛的应用。     

实时定量PCR技术在弓形虫研究中的应用

实时定量PCR技术（real-time polymerase chain reaction/quantitative real time polymerase chain reaction,real-time PCR/qPCR）是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法;该技术具有特异性强、灵敏度高、定量准确和快速等优点,在生物医学领域中得到广泛的应用。笔者对实时定量PCR技术的原理和近几年新兴的荧光探针的原理和类型进行了论述,并对实时定量PCR技术在弓形虫基础生物学、诊断及检测、药物和疫苗研究中的应用进行了综述。     

实时荧光定量PCR技术在水产研究中的应用

实时荧光定量PCR（Real—time fluorescent quantitative PCR,FQ—PCR）技术是1996年由美国Applied Biosystems公司推出的一种通过检测荧光信号的变化进行核酸定量的技术。与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。本文综述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及其在水产研究中的应用。     

多重PCR反应的影响因素及其优化

多重PCR是近年来兴起的一项技术,它高效、快捷、高度特异、敏感,已经成为诸多实验室的常规诊断技术。由于多重PCR实验设计比单一PCR更为复杂,使得不同研究获得的优化程序不具有通用性,因而大大降低了多重PCR的适用性,限制了多重PCR的运用范围。文章就多重PCR的影响因素及其优化条件进行了综述,以期为研究和应用多重PCR技术提供理论参考。     

实时荧光定量PCR技术原理与应用

实时荧光定量PCR(real-ti me fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的主要原理及目前在分子生物学领域,病原体和肿瘤等方面的检测和诊断应用进行了概述。     

荧光定量PCR检测技术及其在猪病诊断中的应用

荧光定量PCR技术是在常规PCR技术上发展起来的新兴技术,因其特异性强、灵敏度高、自动化程度高、定量准确、重复性好、全封闭反应无污染,在疾病诊断中的应用越来越广泛,受到越来越多人的关注。文章综述了荧光定量PCR技术的基本情况及其在猪病诊断中的应用。     

改善PCR技术应用的关键点

聚合酶链式反应技术自上世纪80年代发明以来,随着技术和仪器的进步已发展至第三代。特别是实时定量PCR由于其灵敏、特异、准确的特点在疾病监测、临床诊断、基因表达调控等方面实现了广泛应用。扬州大学王成明教授长期致力于定量PCR技术在疾病检测与诊断方面的应用研究,基于多年的研究与探索,在PCR技术的应用方面积累了丰富的经验,总结了PCR技术应用的关键点,为提高该技术的应用效果提供了参考。     

荧光定量PCR技术及其在动物营养中的应用

实时荧光定量PCR技术是一种通过检测PCR荧光信号的变化进行核酸定量的技术。目前,该技术已经应用于病原微生物、基因表达、基因组变异和多态性检测等许多方面。本文综述了定量PCR技术的基本原理及其在动物营养中的应用。     

定量PCR技术研究进展

定量PCR是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术。自1985年Saiki等首次描述聚合酶链反应(Poly-merase chain reaction,PCR)技术以来,因其展现了前所未有的敏感性和特异性,受到了人们的高度重视。如今各种各样以PCR为基础的DNA序列的扩增和控制方法得到了迅猛发展,几乎已应用于基础研究的各个领域。但在许多情况下,研究者们已不再满足于得知某一特异DNA序列的存在与否,他们更着眼于对其进行精确的核酸定量。因而,借助PCR对基因快速、敏感、特异而准确的定量成为目前分子生物学技术研究的热点之一。1定量PCR(quantitative P…     

原位PCR及其在兽医分子生物技术中的应用

原位 PCR是一种将常规 PCR的高效扩增与原位杂交技术结合起来的新方法 ,其类型主要有直接原位 PCR、间接原位 PCR、原位 RT-PCR和原位再生序列复制反应 ,其中间接原位PCR应用最为广泛。原位 PCR技术的基本步骤包括标本处理、蛋白酶消化、原位 PCR扩增和扩增后产物的检测。原位 PCR技术操作比较复杂 ,同时在操作中易出现假阳性结果和假阴性结果。尽管如此 ,原位 PCR技术作为一种特异性、敏感性高的靶序列定位检测技术 ,作为研究基因信息和细胞、染色体等的形态信息的有力工具 ,在兽医分子生物技术中仍然具有广泛的应用和发展前景     

微滴式数字PCR绝对定量应用研究进展

<正>1前言PCR是在核酸聚合酶作用下体外扩增DNA或RNA的实验技术。1985年美国科学家Kary Mullis申请了有关PCR的第一个专利~([1]),至此PCR发展成为科学研究领域的一项关键和常规技术,这种以PCR技术进行定性分析作为第一代PCR,此PCR也可以进行定量检测,但仅能进行终点检测。为了能够实时观察PCR过程和定量分析