白皮松胚性愈伤组织诱导因素的研究

以不同发育时期的未成熟合子胚为外植体,对白皮松胚性愈伤组织诱导因素进行了研究。结果表明,DCR1培养基为白皮松胚性愈伤组织诱导的最适培养基;6 mg·L-12,4D和2 mg·L-16BA是最优激素组合,诱导率高达97.22％;最佳采样时期为6月30日前后。第2期李 茜等白皮松胚性愈伤组织诱导因素的研究     

白皮松胚性和非胚性愈伤组织生理生化特性研究

【目的】探讨白皮松体细胞胚胎发生过程中各项生理生化指标与体细胞胚胎发生、发育的关系。【方法】以白皮松体细胞胚发生诱导阶段不同发育时期的胚性愈伤组织(EC)和非胚性愈伤组织(N-EC)为材料,对其不同培养时间(5,15,25和35 d)的可溶性蛋白质、可溶性糖和淀粉含量及抗氧化物酶(POD,SOD,CAT)活性进行研究。【结果】EC中可溶性蛋白质和可溶性糖含量均在培养25 d时达到峰值,N-EC中可溶性蛋白和可溶性糖含量在培养15 d时达到峰值;EC中淀粉含量呈现先上升后下降再上升的变化趋势,N-EC淀粉含量一直呈下降趋势。EC中抗氧化物酶活性明显高于N-EC,SOD活性在培养15 d时达到峰值,表明SOD在体细胞胚诱导初期起主导作用;EC的CAT和POD活性均在培养25 d时达到峰值,说明CAT和POD在体细胞胚发生过程中对胚性细胞的进一步分化和发育起主导作用。【结论】白皮松体细胞胚胎发生诱导阶段,EC的生理生化代谢活性高于N-EC。     

小麦成熟胚愈伤组织诱导研究进展

小麦品种的遗传改良一直倍受重视,利用小麦成熟胚为外植体进行愈伤组织培养越来越受到人们的关注。本文主要对影响小麦成熟胚愈伤组织诱导的诸多因素进行了讨论。     

玉米成熟胚愈伤组织的诱导

以玉米自交系齐319、郑58、昌7-2、Lx9801和81162的成熟胚为外植体诱导愈伤组织,研究了基因型、外源激素组合、低温处理对愈伤组织诱导的影响。结果表明,基因型对玉米成熟胚愈伤组织诱导的影响显著。在供试的5个基因型中,齐319的愈伤组织诱导率最高,诱导出的愈伤组织质量也较好,为致密、松脆、淡黄色或乳白色,昌7-2不仅愈伤组织诱导率低而且不能产生胚性愈伤组织：在所试验的外源激素组合中,以4,0 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L 6-BA对愈伤组织的诱导最为有效;4℃低温预处理3 d对愈伤组织的诱导具有明显的促进作用。经处理,齐319愈伤组织的诱导率由67.5%提高到78.3%。研究确定了愈伤组织诱导的最佳条件,为建立高效的玉米成熟胚再生体系奠定了基础。     

思茅松成熟胚的胚性愈伤组织诱导与增殖1）

以思茅松（Pinus kesiya var．langbianensis）成熟合子胚为外植体,1／2MSG培养基为基本成分,采用正交试验设计研究2,4－D、6－BA和TRIA 3种植物生长调节剂对其胚性愈伤组织诱导的影响并获得最优诱导培养基,通过改变生长调节剂种类和降低其质量浓度的方式研究胚性愈伤组织增殖效果,筛选适宜的增殖培养基。结果表明：1／2MSG＋2,4－D 5．000 mg· L－1＋6－BA 4．000 mg· L－1＋TRIA 0．005 mg· L－1为最佳诱导培养基;2,4－D对思茅松成熟胚诱导胚性愈伤组织的影响最大,其次是TRIA,6－BA的影响最小;最佳的增殖培养基为P6＋NAA 2．0 mg· L－1＋6－BA 0．6 mg· L－1。     

小麦成熟胚诱导愈伤组织研究

以小麦成熟胚为外植体进行离体培养,研究不同预处理温度、消毒剂、胚的放置方式、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)浓度等因素对愈伤组织的质量和诱导率的影响.结果表明:低温预处理使愈伤组织的诱导率提高,但差别不显著;0.1%HgCl(2)(氯化汞)消毒处理比20%NaClO(次氯酸钠)处理效果要好;将成熟胚盾片向上放置可明显提高愈伤组织的诱导率;培养基添加2 mg/L 2,4-D时,2个小麦品种愈伤组织诱导率均高达80%,但随着2,4-D浓度的升高或降低,2个品种的诱导率均呈现下降趋势,不同品种间诱导率差异不大;在继代培养基中添加0.5 mg/L6-BA和0.3 mg/L ABA可以显著改善愈伤组织的质量,并且能提高胚性愈伤组织的产生率.     

油松胚性愈伤组织成熟培养的影响因素

以油松的胚性愈伤组织为材料,利用单因素试验设计探究ABA质量浓度、PEG质量浓度、植物凝胶质量浓度、糖的种类和其质量浓度对油松体细胞胚成熟率的影响;在此基础上采用正交试验筛选出最佳培养条件。单因素试验结果表明,成熟培养基中ABA质量浓度14~18 mg·L^-1、PEG质量浓度50~100 g·L^-1、植物凝胶质量浓度2.5~5.0 g·L^-1、麦芽糖和蔗糖质量浓度组合(15+25)g·L^-1时,体细胞胚的成熟效率较高;正交试验结果表明,成熟培养基中ABA质量浓度16 mg·L^-1、PEG质量浓度75 g·L^-1、植物凝胶质量浓度5 g·L^-1、麦芽糖和蔗糖质量浓度(10+30)g·L^-1时,油松体细胞胚的成熟效率提高了0.8倍。     

影响小麦成熟胚愈伤组织诱导因素的研究

采用河南的5种不同品种小麦成熟胚为外植体进行愈伤组织的诱导,采用不同质量浓度梯度的5种诱导培养基和3种继代培养基,着重研究影响愈伤组织及胚性愈伤组织诱导的一些因素,以挑选出较好的愈伤组织,为进一步的遗传转化研究奠定基础。结果表明：不同品种间出愈率及植株再生率差异显著,周麦18号在5个小麦品种中表现最佳,郑麦9023次之。同时还发现培养基的成份也起着重要作用,2,4-D是诱导必需的生长素,使用浓度的范围为2.0～4.0 mg/L,浓度太低时愈伤组织质量差,颜色泛白,水浸状严重,但浓度太高会降低愈伤组织的生长速度,并明显抑制器官分化;另外VB1和脯氨酸在愈伤组织诱导时也起到不可忽视作用;继代培养中ABA明显改善了愈伤组织的状态,最佳使用浓度为0.3 mg/L。     

天山云杉成熟与未成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导及增殖研究

【目的】研究天山云杉成熟与未成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导及增殖条件技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系奠定了基础。【方法】以带胚乳和不带胚乳的未成熟合子胚及成熟合子胚为外植体,在不同生长调节剂浓度的DCR培养基上进行诱导培养。对不同生长时期合子胚的胚性愈伤组织诱导率和增殖量进行研究。【结果】(1)添加不同生长调节剂(2,4-D、6-BA、TDZ)浓度组合的DCR培养基上诱导成熟合子胚时,20μM 2,4-D和5μM 6-BA为最佳组合浓度,胚性愈伤组织诱导率最高,为55%。(2)对不同采样时间的三种合子胚胚性愈伤组织诱导率进行分析表明,带胚乳的未成熟合子胚(6月)为32.6%,成熟合子胚(9月)为60.6%,不带胚乳的未成熟合子胚(7月)为83.1%,7月为天山云杉胚性愈伤组织诱导的最佳采摘期。(3)胚性愈伤组织在不同5种培养基上增殖培养表明,培养基之间增殖量差异显著(P0.05)。BM2和SH培养基的增殖效果明显优于MSG,1/2DCR,DCR,以SH的综合增殖效果最好,其增殖量为4.55 g,增殖率为600%。(4)5种个体胚性愈伤组织在SH培养基上增殖培养表明,个体之间增殖量变化不明显(P0.05)。【结论】建立了天山云杉胚性愈伤组织发生技术平台,为天山云杉遗传改良种质创新、缩短育种周期奠定了研究基础。     

油茶胚性愈伤组织诱导研究

该研究使用正交设计法，以油茶幼胚作为外植体，研究不同品种、不同基本培养基、不同激素种类及浓度、不同培养条件等因素的组合对油茶愈伤组织诱导的影响。结果表明，油茶胚性愈伤组织诱导最佳配方为：MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L TDZ，诱导率达到100%；单因素对于愈伤组织诱导率具有显著影响为品种>培养基>NAA>TDZ，其他因素对愈伤组织的诱导无显著性影响。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

小麦幼胚胚性愈伤组织诱导和再分化研究

以4个小麦品种的幼胚为外植体,通过脱分化和再分化培养,研究了影响小麦幼胚愈伤组织诱导和再分化的因素。结果表明:小麦幼胚胚性愈伤组织的诱导和再分化主要受基因型的限制,同时也受培养基组成的影响;培养基中添加0.5mg/L的ABA不利于胚性愈伤组织的诱导和分化;胚性愈伤组织诱导率和幼苗分化率之间呈极显著正相关,提高胚性愈伤组织的诱导率和形成量是建立小麦植株再生体系的关键。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以小麦的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.研究结果表明,在MS+2,4-D(3.0 mg/L)+VB1(1.0 mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为72.3%,但愈伤组织质量较差;在低浓度2,4-D和添加了ABA的继代培养基中,愈伤组织质量明显改善,胚性愈伤组织增加.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0 mg/L)+NAA(0.3 mg/L)中,分化率达73.18%.该研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体的小麦组织培养再生体系.     

刺五加组培苗的胚性愈伤组织诱导和植株再生

以悬浮培养刺五加体细胞胚发育而来的再生植株作为实验材料,进行胚性愈伤组织的诱导。研究结果表明:在添加1mg.L-1GA3的固体培养基中,胚性愈伤组织诱导率高于不加任何植物生长调节物质的培养基的诱导率;而且1mg.L-12,4-D均适合于固体和液体培养基中胚性愈伤组织的增殖;胚性愈伤组织转到不加植物激素的培养基后,固体和液体培养基都能分化出大量体细胞胚,而液体培养基中形成的体胚数量比固体培养基要高,但是后期的植株再生率及土壤移栽成活率都是固体培养基高于液体培养基。     

超甜玉米胚性愈伤组织诱导体系的建立

以超甜玉米自交系S1和品种粤甜3号为材料研究了影响愈伤组织诱导和胚性形成的几个关键因素。结果表明,2种基因型都是高诱导力的材料,自交系S1能够诱导出高质量的Ⅱ型胚性愈伤,是理想的基因转化材料。2,4-D浓度为2 m g/L时,2种基因型出愈率和胚性愈伤率达到最高,胚性愈伤率分别达到45.88%和35.00%;在培养基中添加9 m g/L的A gNO3极显著地提高了胚性愈伤率,比对照提高了31.25%;添加700 m g/L的脯氨酸,胚性愈伤率显著地提高了12.41%。据此建立了高效稳定的超甜玉米转基因胚性愈伤组织诱导体系。     

油松成熟胚总RNA的提取方法

[目的]对油松成熟胚总RNA的提取方法进行比较,以期得到完整的高质量油松成熟胚RNA。[方法]以油松成熟胚为材料,用SDS法、Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对油松成熟胚总RNA进行提取,以紫外分光光度计测OD值,并用琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。[结果]改良SDS法提取的RNA产率高,完整性好,A260/A280为1.97,A260/A230为2.08,28 S、18 S、5 S条带清晰且28 S亮度是18 S的2倍。通过RT-PCR检测,ds cDNA片段的弥散带分布范围在0.3～3.0 kb,进一步验证改良的SDS法可获得高质量的RNA,用于后续的分子生物学研究。[结论]改良SDS法成本低,操作简单,提取时间短,RNA质量好,是多酚多糖植物总RNA提取比较有效的方法。     

水稻成熟胚不同接种方式对愈伤组织诱导的影响

采用4种不同的接种方式,对3个水稻品种的成熟胚进行了愈伤组织诱导试验。结果表明：在胚上纵切1刀,将种子接种在培养基上的接种方式,愈伤组织诱导率最高、出芽率最低,且愈伤组织质量最好,可以在短时间内获得大量胚性愈伤组织,建立悬浮系,其愈伤组织在较短的时间即可分化出再生植株,是1种简单、方便、效果好的诱导水稻愈伤组织的理想方法。