彩色甘蓝型油菜指纹图谱构建

采用SSR和特异性分子标记,构建彩色甘蓝型油菜的指纹图谱,并进行聚类分析。从509对SSR引物和30对特异性引物筛选出13对多态性位点丰富、稳定性和重复性高的引物,对引物构建10份彩色甘蓝型油菜DNA指纹图谱,利用NTSYS软件构建聚类分析图并进行分析。结果表明,13对引物可扩增32个多态性等位位点。其中,引物P13构建的指纹能将参试材料中的普通黄花油菜与彩色油菜分开;引物P21构建的指纹能将10份材料彼此分开;聚类分析结果与其遗传背景相吻合。本研究可为彩色甘蓝型油菜品种（系）真伪性和纯度鉴定提供依据,以期为进一步进行彩色油菜分子标记辅助育种鉴定基础。     

基于AFLP分子标记对广东省番石榴种质资源多样性分析及指纹图谱构建

【目的】利用AFLP分子标记技术对广东省30份番石榴种质资源进行遗传多样性分析并构建指纹图谱。【方法】从80对AFLP引物中筛选得到8对核心引物用于番石榴分子标记,利用UPGMA聚类分析番石榴种质资源多样性,以核心引物E3-M6和E4-M2引物组合构建番石榴DNA指纹图谱。【结果】8对AFLP核心引物扩增30份番石榴样品共得到条带1 118条,多态性条带1 114条,多态性比率为99.6%。通过聚类分析将30份番石榴样品聚为4类,其中广东省高州市野生品种‘胭脂红番石榴2号’遗传分化较大,单独聚为一类。利用核心引物E3-M6和E4-M2组合成功构建番石榴DNA指纹图谱,供试30份番石榴品种(系)每个都有一套唯一的指纹图谱编码。【结论】本研究构建的指纹图谱可用于番石榴种质的分类与鉴定,同时为番石榴杂交新品种选育提供理论依据。     

草莓品种亲缘关系的AFLP分子标记分析

 利用AFLP技术对我国国家草莓资源圃内保存的107个草莓品种进行了DNA多态性分析。从64对“2 + 2”引物中筛选出10对引物应用于扩增基因组DNA, 共获得清晰可辨的581条带, 其中412条为多态性带。UPGMA方法聚类分析结果显示, AFLP分子鉴定结果与其系谱关系非常一致, 表明AFLP指纹图谱分析能很好地鉴别草莓品种之间的遗传关系。     

湖南地区柱状田头菇的AFLP分析

采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对湖南地区8株柱状田头菇(Agrocybe cylindracea)栽培品种进行了遗传多样性分析。指纹图谱结果显示:8对引物组合均能够对酶切的供试菌株基因组DNA片段获得稳定的条带,915条位点条带中,861(94.10%)条具有多态性,多态性较好;扩增片段大小在70～500 bp之间,每个引物组合的多态性片段条数为94～120,平均107.6条。UPGMA聚类分析表明,在相似性系数为0.49时,可将8株柱状田头菇分为3类,遗传距离最大为0.7394,最小为0.3716。AFLP指纹图谱清晰地显示出不同品种的多态性差异。     

基于SCoT 标记的芥菜种质遗传多样性与指纹图谱

利用SCoT 标记对46 份芥菜种质资源进行遗传多样性分析。从70 条引物中筛选出21 条用于PCR 扩增,共扩增出200 条条带,其中多态性条带140 条,多态性比率为70%。供试材料相似系数介于0.77～0.95 之间,平均Nei’s 基因多样性为0.198,平均Shannon 信息指数为0.301,平均多态信息含量为0.822 7。利用UPGMA 构建46 份芥菜种质资源的聚类树状图,在相似系数D1=0.780 处,可以将46 份芥菜种质分为两大类;而在D2=0.807 处,第Ⅱ类可进一步细分为5 个亚类。选出清晰的16 个多态性位点,构建46 份芥菜种质的SCoT 指纹图谱,结果由引物SP4、SP19、SP20、SP23、SP30 所构建的DNA 指纹图谱可将供试材料完全区分开。     

云南芋种质资源遗传多样性的AFLP分析

 采用荧光标记引物的AFLP分子标记技术, 用筛选出的“3 + 2”引物组合, 对48份云南芋种进行遗传多样性分析, 3对引物共扩增出184个DNA位点, 平均每对引物可检测出56.3个多态性位点,多态性位点高达91.8% , 云南芋种质资源在DNA分子水平上表现出极为丰富的遗传多样性。聚类分析表明: 野生种质和栽培种质的亲缘关系较远, 栽培种质基于AFLP标记的分类结果与形态性状基本一致, 少数材料差异较大。     

3个番茄品种及其6份亲本材料指纹图谱的构建

用CTAB法提取3个番茄品种及6份品种亲本材料的DNA,通过AFLP-PCR分子标记方法,构建亲本及品种的指纹图谱。其结果利用如下:从分子水平构建了3个品种及其6份亲本材料的指纹图谱,6份亲本材料扩增的多态性条带从10~27条不等,平均17.56条,多态性位点比率为41.3%。通过符合率测定,亲本纯度符合率为100%,杂种一代为98.7%。利用NeiLi法计算番茄遗传相似系数,3个品种及亲本的遗传相似系数分别于0.37~0.61和0.53~0.62,采用UPGMA法进行聚类分析,对3个番茄品种及其亲本的遗传关系进行分析,为番茄杂交育种提供理论参考。     

基于ISSR和SRAP标记的69份红毛丹种质资源DNA指纹图谱构建

利用筛选出的多态性高、谱带清晰的8条ISSR引物和18对SRAP引物分别对海南省保存的69份红毛丹种质资源进行PCR扩增,8条ISSR引物共检测到425条多态性条带,其中品种(系)特异条带47个,平均位点多态性信息含量(PIC值)为0.928,可鉴别的种质资源数25~67份;18对SRAP引物共检测到894条多态性条带,其中品种(系)特异条带69个,平均位点多态性信息含量(PIC值)为0.936,可区分的种质资源数为17~63份。综合各项指标,利用ISSR16和ISSR5引物21个条带用于构建红毛丹种质DNA指纹图谱,该图谱可有效区分69份红毛丹种质资源。     

牡丹AFLP荧光反应体系的建立和优化

以牡丹的叶片为材料,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中几个关键参数进行优化,建立了牡丹的AFLP荧光反应体系,首次在牡丹DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验过程取的成功,得到了清晰的部分牡丹品种的指纹图谱.为牡丹品种指纹图谱的绘制、亲缘关系的研究等奠定基础.     

菠萝种质鉴定及亲缘关系的AFLP分析

从FISH-AFLP试剂盒(PSTI/MseI型)64对引物中,筛选出8对AFLP选择性引物P-GAA/M-CTA、P-GAC/M-CTG、P-GAC/M-CTT、P-GAG/M-CAT、P-GAG/M-CTA、P-GAT/M-CAT、P-GAT/M-CTA、P-GAT/M-CTC,对39份菠萝种质进行了AFLP分析,都得到了清晰的多态性指纹图谱。8对引物共获得454个遗传位点,其中多态性位点332个,多态性比例平均为73.1%。UPGMA聚类表明,各种质间的相似系数为0.73～0.98,说明39份菠萝种质遗传关系相对较近。依相似系数0.80的水平,将供试的39份菠萝种质分为4类。研究结果可以作为菠萝分类的理论依据和基础。     

应用AFLP分子标记鉴定苹果品种

在建立苹果品种AFLP分析体系的基础上,从68对引物中筛选出了4对多态性高、分辨能力强的引物（即P32M46、P44M53、P59M41和P79M61）。分析了P32M46引物绘制的我国25个苹果重要品种的AFLP指纹图谱的遗传多样性,确定了各供试品种的差异带,区分子供试的25个苹果品种。对AFLP分析的关键步骤进行了讨论,并对生产上应用AFLP技术检测苹果品种真实性和纯度作了展望。     

利用AFLP鉴定柑橘变异

利用AFLP分析鉴定了7个柑橘变异类型,从64对引物组合中筛选了8对引物组合,共得到334个扩增位点2099条带数据。7个变异类型与亲本品种之间多态性带为36至92条,变异类型的多态性带数与亲本品种总带数的比例为0.1721至0.4182。说明变异类型的遗传基础已经发生了不同程度的改变,7个柑橘变异类型应是芽变,具备了成为新品种的遗传基础,特别是红皮冰糖脐橙选育成功将填补高糖脐橙空白。研究同时表明,AFLP具有扩增谱带多,谱带清晰,扩增信息量大的特点。根据谱带位点差异即可鉴定柑橘变异是否遗传,多态性位点数也反映了性状变异程度。AFLP方法1次可同时鉴定多个变异类型,是柑橘新品种选育早期鉴定灵敏、可靠、有效的方法。     

菊花品种资源遗传多样性的AFLP分析

以AFLP—银染分子标记技术, 对45个菊花品种进行了遗传多样性和亲缘关系分析。选用10个多态性高、分辨力强的E + 3 /M + 3引物组合分别对供试材料的基因组DNA进行扩增, 共获得486条清晰可辨的条带, 其中多态性带451条, 平均每个引物组合可检测出4511个多态性位点, 多态性位点百分率高达92.80% , 这表明供试品种资源在DNA水平上酶切位点的分布存在广泛的变异。应用DPS软件计算供试品种遗传距离界于0.36000～0.86237之间, 平均为0.611185; UPGMA分析将45份资源分成6个类群,从相异性系数分析了各品种资源间的亲缘关系。     

85个大菊品种遗传关系的ISSR分析

 采用ISSR-PCR分子标记技术对大菊85个品种的遗传多样性进行了分析。从77条ISSR引物中筛选出22条引物分别对供试材料基因组DNA进行扩增，共获得160条清晰可辨谱带，其中多态性带148条，多态位点百分率为92.5%，多态性较高。POPGENE软件计算结果表明，85个大菊品种平均有效等位基因数为1.6013，平均Nei's 基因多样性指数为0.3485，平均Shannon信息指数为0.5162；应用SPSS软件计算得到各品种间的Jaccard相似系数介于0.294~0.802之间。UPGMA法将85个品种分成6个类群，聚类结果与品种瓣型相关。     

梨新品种及其亲本的AFLP分析

利用荧光AFLP技术, 对20个梨新品种及其23个亲本(共43个品种) 进行研究。从64对引物组合中筛选出7对用于扩增, 共获得784条带, 其中多态性带699条, 多态性为89.2%。扩增结果显示, 7对引物组合在29个品种中扩增出特征带, 每对引物组合均能将所有品种鉴别开, 表明荧光AFLP技术用于梨品种鉴定的效率很高。通过聚类, 从分子水平对梨新品种及其亲本的遗传关系进行分析, 并对20个梨新品种进行分类, 为梨杂交育种的亲本选配提供了理论参考。     

杧果主要品种遗传多态性的AFLP标记研究

 采用扩增片段长度多态性AFLP标记对国内外31个杧果主要品种进行分类与亲缘关系研究。结果表明: 筛选出的14对引物组合在31份杧果种质中共扩增出了1 761条带, 其中多态性带的比例为97%。平均每对引物产生125.8条带和121.6条多态性带, 总的多态性带率为97%; 基于AFLP标记, 以0.48的相似系数为阈值, 所有供试　果材料被分为7大组群, 第一组群内以0.52为阈值, 又可分为6组。与形态标记相比, 基于AFLP标记的杧果分类体系更能反映杧果品种间的亲缘关系。     

Characterization of white sapote (Casimiroa edulis Llave & Lex.) germplasm using floral morphology,RAPD and AFLP markers

Floral morphology, random amplified polymorphic DNA (RAPD), and amplified fragment length polymorphism (AFLP) were used to characterize and verify genetic diversity within a white sapote cultivar collection and to develop molecular markers for germplasm identification. On the basis of floral morphology, the cultivars were classified into three types: type I included 23 cultivars with large ovaries and small anthers; type II included 13 cultivars with small ovaries and large anthers; and type III included one cultivar, named ‘Maltby’, with a large ovary and large anthers. DNA was isolated from 39 cultivars of white sapote and subjected to RAPD and AFLP analysis using 24 and 7 primers, respectively. One hundred and sixty-eight RAPD and 286 AFLP bands were used to assess genetic characterization among white sapote. Sixty percent of the RAPD and 77% of the AFLP amplification products were polymorphic among accessions. RAPD or AFLP markers differentiated all white sapote cultivars effectively. Moreover, each flower type was characterized as specially associated with two RAPD bands. UPGMA dendrograms based on RAPD and AFLP data, showed the majority of the cultivars from flower type I and flower type II clustering together. Finally 101 RAPD markers and 220 AFLP markers were used to construct a neighbor-joining dendrogram. This showed that the 37 cultivars could be classified into six distinct clusters, between which the similarity coefficient was as low as 0.00–0.55, even though the cultivars were morphologically very similar. The remaining two cultivars namely ‘Smathers’ and ‘Maltby’ were found genetically very distant from the other cultivars in RAPD, AFLP or combined RAPD and AFLP based dendrograms. The results suggested that the level of genetic variation among white sapote cultivars is diverse and the morphological and molecular data may lead to representation of the cultivar relationships as well as flower type discrimination.     

青菜品种亲缘关系AFLP分析

利用AFLP技术对市场上主栽的10个青菜主要品种进行了遗传多样性及聚类分析.结果表明:最终筛选出的5对引物共扩增出多态性位点454个,多态性位点占总扩增位点的比例平均为57.5%,系统聚类分析将供试材料分为4组,基于分子标记的分类与材料的表现基本吻合,为以后品种的鉴定和分子辅助育种提供一定的参考.     

枣树品种品系的AFLP分析

为建立完善枣种质资源分类鉴定技术体系,采用了基因组DNA-AFLP分子标记技术,从32对引物中筛选出了E-AAC/M-CCT、E-AAC/M-CAT、E-ACT/M-CCG、E-AAG/M-CCC和E-ACC/M-CAT等5个多态性好、分辨率高的引物组合,共扩增213条带,其中多态性带172条,多态性百分率76.16%。通过计算品种间单匹配系数,不加权算术平均值法绘制聚类图,可将28个供试品种和品系全部区分开;通过观察指纹图谱,也可明显看出新品系与其原种的差异带的多少,可快速准确地区分和确定新变异品系;另外,还可消除枣种质资源同名异物或同物异名现象。从而表明,AFLP技术是鉴定枣品种的有效方法。探讨了基因组DNA-AFLP分析技术的各关键步骤,并展望AFLP技术在枣品种鉴定上的应用前景。     

中国马铃薯部分栽培品种遗传多样性的AFLP分析

 采用AFLP方法分析中国各地79个马铃薯栽培品种, 获得了8对引物组合的扩增谱带, 为马铃薯品种的鉴定提供了分子依据。8对引物组合扩增结果共获得801条带, 平均每对引物组合产生100.13条带。其中493条为多态性条带, 平均多态性检出率为61.2% , 引物组合E11 /M51扩增的多态性比率最高。聚类分析将材料分成3类, 聚类结果与地域无明显相关。