应用TGEV N蛋白McAb间接免疫荧光法检测TGEV的研究

猪传染性胃肠炎（Porcine transmissible gastroenteritis，TGE）是由冠状病毒科猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）引起的以仔猪呕吐、严重腹泻和高致死率为特征的消化道传染病。该病是我国及世界各养猪国家仔猪早期死亡的重要疫病之一。快速准确的诊断是防治TGE的重要前提。而目前我国对TGE还没有一套较为有效的诊断方法。对可疑病料进行病毒分离与鉴定是本病最为直观的诊断方法，但分离病毒需一定的条件和相当长的时间，本病的快速诊断方法最常应用的是血清学试验，但血清学方法诊断的准确性直接依赖于诊断抗原及抗体的特异性。     

猪轮状病毒VP6重组蛋白多克隆抗体与单克隆抗体间接免疫荧光试验的比较

用纯化的重组猪轮状病毒VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清,同时运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗猪轮状病毒VP6的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,命名C5D10。应用抗猪轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体和多克隆抗血清对感染猪轮状病毒的Marc-145细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究。结果表明,利用所研制的抗猪轮状病毒VP6蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。     

应用间接免疫荧光法检测狂犬病病毒

取０．５ｍｌ兔ＢＨＫ－２１新鲜健康细胞液和０．１ｍｌ狂犬病病毒细胞液在含小飞片青瓶中混合，培养２４小时后制片，加抗狂犬病病毒兔抗体感作，用抗逸荧光抗体染色，通过荧光显微镜观察细胞浆内黄绿芭一病毒是否在细胞内增殖，从而建立了检测狂犬病病毒的间接免疫荧光法。     

应用HEV ORF2蛋白McAb间接免疫荧光法检测HEV的研究

应用抗猪戊型肝炎病毒（HEV）ORF2蛋白单克隆抗体和猪戊型肝炎病毒多克隆抗血清对感染猪戊型肝炎病毒的A549细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究。单克隆抗体（McAb）进行的间接免疫荧光染色后,HEV感染细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物被伊文思蓝染成红色,未见有黄绿色荧光染色的细胞存在;多克隆抗血清对接种病毒的细胞培养物染色后,荧光强度高,呈现亮绿色,但未接种HEV的细胞培养物亦有一定的非特异性荧光反应。结果表明,利用所研制的抗HEVORF2蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。     

应用间接免疫荧光试验从猪群中检测出PRRS抗体

应用间接免疫荧光试验从猪群中检测出ＰＲＲＳ抗体张鹤晓王刚王彩兰崔向东苏世敏于文军张玉忠（中华人民共和国北京动植物检疫局，１０００２９）１９９５年末以来，北京地区的某些猪场发生以母猪流产、死产为特征的疾病，我们用猪的繁殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）欧洲株和...     

猪轮状病毒免疫荧光制剂质量检测与评价

对猪轮状病毒（ＰＲＶ）Ｂｏｈｌ株纯化抗原制备的荧光抗体（ＦＡ）和标准阳、阴性片做了较全面的检验。ＦＡ的Ｆ／Ｐ比例在１．５－１．９８恰当范围。染色效价高达１：２５６。使用４或８个单位时，既能消除非特色染色，又有强烈特异染色效果。ＦＡ抑制试验、吸收试验、类症鉴别试验证明有高度特异性。ＦＡ敏感性试验表明，可以在接种后５ｈ检出细胞培养物中的ＰＲＶ抗原，比ＣＰＥ出现早１０ｈ以上。稳定性和保存期试验表明，冻干     

检测猪捷申病毒抗体的间接免疫荧光方法的建立与初步应用

为建立检测猪捷申病毒(PTV)抗体的方法,本研究利用PTV-8 Jilin/2003株为杭原,建立了检All PTV杭体的的间接免疫荧光技术(IFA)方法.该方法工作浓度分别是:一抗最适稀释度为1:10:FITC标记二抗最适稀释度为1:100;二杭中伊文氏兰最适稀释度为1:30 000.敏感性试验、特异性试验表明该杭原板可以检出包含PTV-8型和1型在内的的所有PTV阳性血清,方法敏感、特异.与SN符合率94.0.用该方法对黑龙江、山东、天津和河南等地的1 500份临床血清样品进行检测,阳性检出率为55.8,表明我国猪群中PTV的感染已经非常普遍.该方法做为PTV的血清学诊断新技术,为开展PTV分子流行病学调查莫定了基础.     

应用间接免疫荧光法检测新型鸭瘟病毒

采用人工方法给雏鸭和成鸭攻击新型鸭瘟病毒(NDPV)，攻毒后于不同时间采样，对不同脏器进行间接免疫荧光法检测，确定了最佳采样检测时间和病毒在多种脏器内的定位，并对其致病力、致病时间、交叉检测结果等与鸭瘟病毒(DPV)进行了对比。结果表明，NDPV对雏鸭致病力较强，病毒含量以肝、脾最高，其次为血液、脑、鼻腔分泌物；NDPV和DPV与它们的对应超免疫血清之间有交叉反应，但阳性较弱；冰冻切片制成的抗原片阳性检出率明显高于压印片。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

单克隆抗体间接免疫荧光(IFA)检测猪附红细胞体

为建立利用单克隆抗体检测猪附红细胞体病的间接免疫荧光(IFA)方法,用抗猪附红细胞体的单克隆抗体,对48份疑似猪附红细胞体感染的病猪猪血进行免疫荧光检测,并与血涂片镜检及PCR检测方法进行比较,结果显示IFA检测的阳性率为68.75%,与PCR检测阳性率为77.08%符合率较高,比血涂片的瑞氏和姬姆萨染色镜检阳性率高出近30个百分点;而用猪肺炎支原体、猪链球菌和猪巴氏杆菌作对照,结果均呈阴性。建立的用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测猪附红细胞体病的IFA特异性强,敏感性高;检测临床样品的结果准确可靠。     

应用间接免疫荧光试验检测猪圆环病毒抗体

用猪肾传代细胞系PK－15增殖猪圆环病毒2型（PCV－2）毒株制备抗原，建立了检测PCV抗体的间接免疫荧光试验（IFA）。应用该方法对64份临床送检血清样品进行了检测。结果，38份血清呈现PCV抗体阳性（59％）。IFA方法的建立为临床上进行PCV流行病学调查及相关疾病的诊断提供了另一种检测手段。     

利用杆状病毒表达系统表达PRV/gE蛋白及间接免疫荧光抗体(IDF)检测方法的建立

为了建立高效灵敏的伪狂犬病病毒(PRV) gE蛋白的间接免疫荧光抗体诊断方法,本研究将PRV/HN/SMX/2012毒株gE蛋白的自身信号肽及胞外域片段克隆到pFastBacHT B载体上,构建重组质粒pFastBacHTB-gE,并转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经过3次蓝白斑筛选获得含有gE基因的重组杆粒rBacmid-gE。随后,将该杆粒转染至sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rAcMNPV-gE。经Western blot和间接免疫荧光实验(IFA)进行鉴定分析,发现重组gE蛋白在sf9细胞中表达。利用该sf9细胞建立检测血清中gE抗体的间接免疫荧光抗体(IDF)方法,通过反应条件的优化发现,将血清和羊抗猪FITC-IgG分别进行1∶40和1∶2 000稀释时所建立的方法能针对血清中gE抗体产生较强的特异性荧光;通过与商业化的ELISA检测gI/gE试剂盒(IDEXX)比较,所建立的检测方法与商业化试剂盒的总符合率为93.18%(164/176),阳性结果符合率93.75%(120/128),阴性结果符合率91.67%(44/48),2种方法存在很强的一致性(Kappa=0.832,CI=95%);-20℃条件下保存2个月的稳定性和重复性良好。     

间接ELISA快速检测猪PRV抗体方法的建立

用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化伪狂犬病病毒(PRV)作抗原,建立了检测PRV抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为3.2 mg/L,血清最佳稀释度为1∶80。试验结果表明,间接ELISA检测PRV抗体具有快速、敏感、特异等特点,适合于大量样品的检测,对畜群免疫效果的检测和免疫程序的制定有重要意义。     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

山羊痘间接免疫荧光检测方法的建立

山羊痘是由山羊痘病毒引起的以发热、呼吸困难、流黏液性或脓性鼻液及皮肤黏膜出现痘疹为特征的高度接触性传染病,是严重危害山羊生产的疫病之一。试验旨在建立一种简便快捷、特异性、敏感性、稳定性和重复性良好的间接免疫荧光方法,为山羊痘的监测和诊断提供可靠的依据。1材料与方法1.1材料山羊痘病毒,已确诊为山羊痘的广西柳江疫区的发病山羊皮肤痘组织;山羊痘标准阳性血清,购自中国兽医生物药品监察所;兔抗羊IgG荧光二抗,购自上海生物制品研究所;初生羔羊睾丸细胞,自制;83份临床待检血清;2~3月龄健康未免疫山羊,购于广西马山县,山羊痘检…     

猪轮状病毒病的诊治报告

猪轮状病毒病也称猪轮状病毒腹泻，是由猪轮状病毒引起的急性肠道传染病。     

牛轮状病毒重组VP7蛋白抗原间接ELISA诊断方法的建立

以纯化的原核表达的牛轮状病毒VP7蛋白为包被抗原,建立了检测牛轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。特异性试验表明,该抗原与其他5种常见牛病病毒(IBRV、BCV、BRSV、ETEC、Cj)的阳性血清无交叉反应,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%;对来自不同牛场的血清样本检测结果显示,该检测方法与病毒中和试验检测结果符合率达87.2%。本试验建立的ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为BRV的快速诊断、免疫牛群血清抗体监测及轮状病毒流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

猪轮状病毒性腹泻的诊断与防制

猪轮状病毒病,也称轮状病毒腹泻,是由猪轮状病毒引起的一种急性肠道传染病。一般仔猪发病较多,青年猪和成年猪患病较少,且多为隐性感染,不表现症状。该病潜伏期较短,一般为12￣24小时。临     

应用ELISA间接法检测猪流行性腹泻抗体的研究

应用猪流行性腹泻病毒(PEDV)吉(J)毒株猪胎肠单层细胞培养物,以冻融法制备抗原,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法检测PED抗体的方法。对30头份经直接免疫荧光技术证实的PED病猪群血清测定,97％为阳性;检测32头份无PED猪场猪血清,93％为阴性。对1份PED“华毒株”,1份“川毒株”以及3头份“吉毒株”PED免疫血清测定,均为阳性。对猪传染性胃肠炎血清、猪轮状病毒病血清、疑似猪血球凝集性脑脊髓炎血清、鸡传染性支气管炎血清及猪梭菌性肠炎血清共16头份检测均为阴性,证明PEDV不与TGEV等其它3种冠状病毒血清发生交叉反应。89头份疫区猪血清的区域性试验阳性率为75％(67/89);对82头份屠宰猪血清测定,53％阳性。抗原包被板保存期试验表明,包被板在-20℃可保存2个月。