菊属植物SCoT分子标记技术在遗传多样性分析中的应用

 采用正交设计方法,对Mg²⁺、dNTPs和引物浓度、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量等5个因素进行筛选,得到适于菊属植物的SCoT标记PCR反应体系,25 μL体系中含有：Mg²⁺ 1.2 mmol · L^-1、dNTPs 0.15 mmol · L^-1、引物0.8 μmol · L^-1、TaqDNA聚合酶1 U、模板DNA 50 ng。优化的最适退火温度为49.4 ℃。改进电泳方法,采用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染法染色。运用不同倍性菊属材料基因组DNA对优化的SCoT-PCR反应体系进行验证,获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明确立的菊属植物SCoT分子标记技术体系稳定可靠。利用该体系及筛选出的12个SCoT引物,对18份菊花近缘种属材料的遗传多样性及亲缘关系进行分析,共检测到209个位点,其中多态性位点数189个,多态性比率为90.43%。应用NTSYS-pc2.1软件,计算菊花近缘种属材料之间的相似性系数并采用不加权成对算术平均法（UPGMA）进行聚类分析,结果18份菊花近缘种属材料的遗传相似性系数范围为0.4516 ~ 0.7035,平均遗传相似性系数为0.58。聚类分析显示在相似系数0.530处可以将18份材料分成Ⅰ、Ⅱ两个大组,Ⅱ组包括芙蓉菊和绢毛蒿,其余16份材料属于Ⅰ组。Ⅰ组在相似系数0.615水平又分为6个亚组。结果表明SCoT分子标记体系适用于菊属及其近缘属种遗传多样性及亲缘关系的研究。     

桂花SCoT标记体系的建立及其在遗传多样性分析中的应用

以‘籽银桂’桂花叶片DNA为材料,以2 × Es TaqMasterMix 预混液为基本体系,针对影响SCoT-PCR反应的退火温度、模板DNA用量、引物浓度等因素进行优化,建立了适于桂花SCoT分子标记的反应体系。12 μL反应体系含有30 ng模板DNA,引物浓度为0.4 μmol ? L-1,不同的引物退火温度分别为48、49.9、54.3或56 ℃。利用该体系对12个桂花品种进行分析,扩增条带清晰,扩增产物在150 ~ 2 200 bp之间。12 条引物共扩增出244条带,其中多态性条带238条,多态性比率为97.47%。在相似系数0.57水平处,‘九龙桂’形成第Ⅰ组,其余11个品种形成第Ⅱ组。第Ⅱ组中‘柳叶桂’、‘香云’、‘早籽黄’、‘大花金桂’、‘桂冠籽金桂’、‘鹅黄’、‘籽金桂’和‘醉云’8个花色不完全相同的品种聚在一起;‘金桂’、‘早银桂’和‘籽银桂’3个不同花色的品种聚在一起,说明品种间的亲缘关系与花色不完全相关,这与其它分子标记结果一致。     

柑橘SCoT分子标记技术体系的建立及其在遗传分析中的应用

 采用正交设计方法,对影响柑橘SCoT-PCR反应的Mg2+ 、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶及模板DNA用量等因素进行优化,建立了适于柑橘的SCoT标记分析体系。20 μL反应体系中含有：Mg2+ 1.5 mmol · L-1,dNTPs 0.35 mmol · L-1,引物0.625 μmol · L-1,TaqDNA聚合酶0.25 U,模板DNA 10 ng。最适退火温度为49 ℃。利用该体系对Wan2橘橙 × Li2甜橙的杂交后代及沙田柚四倍体进行分析,扩增条带清晰,扩增产物在150 ~ 2 100 bp之间。7个引物在Wan2橘橙、Li2甜橙及其18株杂交后代中共扩增出74条带,多态性条带48条,多态性比率为64.9%,在相似系数0.85处,18株杂交后代可聚为5类,表明其具有较丰富的遗传多样性;11个引物在4株沙田柚四倍体及其二倍体亲本中共扩增出84条带,其中多态性条带46条,多态性比率为54.8%,聚类分析显示5株沙田柚遗传相似系数在0.785 ~ 0.880,在相似性系数0.825处可分为3类,3株同源四倍体分别聚在不同的位置,四倍体材料均发生了不同程度的遗传变异。研究结果表明建立的柑橘SCoT体系结果稳定,重复性好,可为柑橘遗传育种提供新的技术支持。     

基于SCoT标记的山西五角枫遗传多样性分析

以同一生境的40份自然分布的五角枫为试材,采用SCoT分子标记技术,对霍山兴唐寺的五角枫群体进行遗传多样性分析,为五角枫种质资源的评价和保护提供分子生物学依据。结果表明:筛选的15条SCoT共扩增出113条条带,其中多态性条带41条,多态性比例为36.28%;等位基因数平均为1.362,有效等位基因数平均为1.23,Nei′s基因多样性平均为0.134 1,香农信息指数平均为0.199 4;平均相似系数为0.945。试验结果说明供试材料种群的遗传多样性不高,遗传基础较为狭窄。五角枫的遗传多样性评价应该结合形态学表型与更多的分子标记技术。     

灰毡毛忍冬工厂化快繁生产体系的建立及再生苗遗传稳定性的分子鉴定

 以灰毡毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）腋芽为材料,建立了一套适合工厂化 生产的离体再生技术体系。该体系包括腋芽诱导培养基MB + 1.0 mg · L^-1 6-BA + 0.2 mg · L^-1 NAA,继代 增殖培养基MB + 1.0 mg · L^-1 6-BA + 0.5 mg · L^-1 IAA 和MB + 1.5 mg · L^-1 6-BA + 0.8 mg · L-1 IAA 和生根 培养基1/2MB + 2.0 mg · L^-1 IBA + 0.2 mg · L^-1 IAA。分别从继代12、24、36 个月的再生植株中随机抽取8 株进行SRAP 分析其遗传的变化。在检出的147 条SRAP 条带中,继代12 个月的再生植株未发现变异, 继代24 个月的再生植株中有2 株发生变异,继代36 个月的再生植株中有4 株发生变异。结果表明,建 立的腋芽再生培养体系在一定继代周期内是稳定可靠的,适合灰毡毛忍冬的规模化生产。     

日本石楠工厂化快繁体系的建立及再生苗遗传稳定性的分子鉴定

 以日本石楠[Photinia glabra (Thunb.) Maxim.]为材料,建立了一套高效的适合工厂化生产的腋芽再生组织培养体系。该体系包括芽诱导培养基（MS＋1.2 mg·L^-1 BAP ＋ 0.2 mg·L^-1NAA）,继代培养基（WPM＋0.75 mg·L^-1BAP＋0.15 mg·L^-1NAA）和生根培养基（1/2MS＋2.5 mg·L^-1IAA＋0.3 mg·L^-1IBA）。在培养出的超过10万株的组培再生苗中,随机选出36株和24株进行AFLP和MSAP检测遗传和DNA甲基化的变化。在检出的615条AFLP条带和392条MSAP条带中,并未发现任何变异,表明建立的腋芽再生培养体系稳定可靠,适合于日本石楠的工厂化生产。     

百香果组培苗快繁体系建立研究

为了提高种苗繁殖效率,满足百香果大面积种植的种苗需求,研究利用植物组培技术建立百香果组培苗规模化生产体系。以百香果茎段为材料,探索其组织培养的基本条件。结果表明,以RMS基础培养基诱导出苗效果较好;继代培养时采用促腋芽生枝的单芽茎段微扦插接种,增殖倍数较传统接种方式显著提高;生根培养基中加入1 mg/L吲哚-3-丁酸(IBA)能显著促进根系生长;采用进口草碳∶粗砂=4∶1基质移栽,百香果组培苗成活率显著提高,达到85.3%。从而建立了百香果组培苗快繁体系,筛选出最佳的培养基、接种方式、植物生长调节剂及移栽基质。     

亚洲百合‘穿梭’组培快繁体系的建立

以亚洲百合‘穿梭’为试材,采用植物组织培养的方法,研究了不同浓度激素对百合鳞片诱导、不定芽增殖、小鳞茎生根培养的影响,并筛选出适宜百合组培苗生长的移栽基质,以期为亚洲百合‘穿梭’的组培快繁体系的建立提供参考依据。结果表明：百合鳞片最佳诱导培养基为MS+0.5 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 6-BA+30 g·L^-1蔗糖+6 g·L^-1琼脂,诱导率最高可达74.44%,显著高于其他处理;最佳增殖培养基为MS+0.1 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA+30 g·L^-1蔗糖+6 g·L^-1琼脂,不定芽增殖数量最多,增殖系数为3.27;适合小鳞茎生根培养基为1/2MS+0.1 mg·L^-1 NAA+0.3 mg·L^-1 IBA+40 g·L^-1蔗糖+6 g·L^-1琼脂,平均生根数量为14.33,是其他...     

分子标记技术在莲遗传多样性分析中的应用

分子标记是继形态标记、细胞标记、生化标记之后出现的一种全新的遗传标记方法,已被广泛地应用于生命科学研究的各个领域。主要介绍了现阶段常用的几种分子标记技术,以及这些标记技术在莲遗传多样性分析中的应用,并对其应用前景进行了展望。     

分子标记技术在兰花遗传育种中的应用

分子标记技术在兰花遗传图谱构建、遗传多样性和物种亲缘关系、分子标记辅助选择、品种（系）指纹图谱构建及杂种纯度鉴定等研究领域可广泛应用.综述了随机扩增多态性DNA标记（RAPD）、扩增片段长度多态性标记（AFLP）、限制性片段长度多态性（RFLP）、单核苷酸多态性标记（SNP）等分子标记的基本原理、主要特点以及在兰花育种研究应用中的情况和展望.     

兰属植物目标起始密码子（SCoT）遗传多样性分析

 应用SCoT分子标记技术对兰属14个种的24个样品进行遗传多样性分析,27条引物共扩增出259条DNA条带,其中多态性条带224条,多态性百分比达86.49%,条带大小为100 ~ 2 000 bp,多数条带分布在500 ~ 1 300 bp之间。根据SCoT标记计算的遗传距离系数得到的聚类结果可知,24种兰属植物可以分为5类：A类：春兰、建兰、蕙兰、莲瓣兰;B类：墨兰、寒兰;C类：春剑;D类：兔耳兰;E类：多花兰、文山红柱兰、虎头兰、象牙白、碧玉兰、黄蝉兰,这与传统兰属分类有所区别。     

白芨种子的无菌萌发过程观察和组培快繁研究

以白芨种子为培养材料,对白芨种子无菌非共生萌发过程中原球茎发育进行了研究;并以白芨组培苗的原球茎和叶片为外植体,进行白芨组织培养快速繁殖技术研究.结果表明:在白芨的种子发育过程中,种胚发育成幼苗有2种方式,1种是小球体经原球茎发育成小苗;第2种是小球体伸长成根状茎后发育成小苗.组培苗的原球茎经切割后在诱导培养基上培养,可产生增殖分化,形成丛芽.原球茎诱导的最适培养基为1/2MS+6-BA5.0 mg/L+NAA0.2 mg/L,增殖倍数为2.71.以叶片为外植体,未获得组培苗.     

白芨种子直播繁殖技术研究

以白芨种子为试材,研究了不同基质、灭菌方式和拌种材料对白芨种子成苗数的影响,以及不同营养液、不同激素配比和营养液浇灌周期对白芨幼苗生长状况的影响。结果表明:采用体积比为9∶1∶1混合基质(营养土∶蛭石∶珍珠岩),高锰酸钾灭菌,活性炭(种子与活性炭体积比为1∶30)拌种条件下,成苗数达9个·cm~(-2);种子萌发后,每隔30d喷洒1/2MS营养液,在此基础上添加1.0mg·L~(-1) 6-BA,白芨幼苗生长最好,平均茎长为30mm,平均叶宽为3.03mm,平均根长为9.63mm。     

白及的花部特征与繁育系统

 通过野外观察、授粉特性分析、杂交指数估算及人工控制授粉试验等方法对白及野生居群的花部特征和繁育系统进行了研究。结果表明：在自然条件下,白及4-5月开花,群体花期约44 d,群体盛花期约12 d,集中在4月29日-5月10日,单株花期11 ~ 27 d,单花花期6 ~ 8 d。总状花序上具两性花3 ~ 11朵。在花朵开放的整个过程中,花药始终高于柱头且两者之间存在隔离。花粉成熟时由粘性物质聚结成团,无法散落至柱头。开花后3 d 内花粉活力和柱头可授性均较高。白及杂交指数为4。无论去雄与否,套袋后的花均不结实,说明其不能进行自然的自花授粉和无融合生殖。白及人工自花授粉、同株异花授粉和异株授粉的结实率分别为93.33%、90.00%和93.33%,自然条件下的结实率为5.26%。花粉成熟时由粘性物质聚结成团和缺乏有效的传粉媒介可能是白及自然条件下结实率低的主要原因。     

分子标记在濒危植物遗传多样性研究中的应用

介绍微卫星DNA标记、RFLP分析、RAPD分析、AFLP分析、ISSR分析的基本原理及其在濒危植物遗传多样性研究中的应用，并对这些分子标记手段的优缺点进行了比较。     

杨桃SCoT标记PCR反应体系建立与验证

用单因素设计法对影响杨桃SCoT-PCR反应体系的主要因素Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶及DNA模板浓度进行优化。结果表明,20μL反应体系中,含Mg2+2.5 mmol/L,dNTPs 0.3mmol/L,模板DNA 30mg/L,引物1.00μmol/L和Taq DNA聚合酶0.4U为最佳反应体系。用不同引物及杨桃DNA对该体系进行验证,扩增条带清晰,结果稳定可靠,证明该反应体系适用于杨桃SCoT-PCR扩增。