2株抗枯萎病尖镰孢菌内生细菌菌株的分离及鉴定

华南地区因尖镰孢菌引起的枯萎病发生较为严重,特别是近年来发现的香蕉枯萎病,对香蕉产业来说更是毁灭性的病害。分离、筛选有拮抗活性的内生细菌是防治枯萎病的有效措施之一。从海南红树林健康叶片中分离到102株非致病性内生细菌菌株,通过室内抗菌活性的测定,得到了2株对枯萎病尖镰孢菌具有明显抑制作用的拮抗菌株。通过对它进行形态、生理生化特性及16SrDNA序列等方面的研究,确定其中1株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis,命名为BS-009;另一株确定为新发表种Bacillus Mojavensis的一个相似种,命名为BM-027。     

植物内生菌活性代谢产物的研究进展

植物内生菌作为一种新型的微生物资源,提取和分离植物内生菌的代谢产物是一条寻找新型天然活性物质的重要途径。植物内生菌次级代谢产物中的一些化合物,不仅在抗菌、抗肿瘤等方面都具有很好的效果,还解决了人们对常用抗生素类药物的耐药性问题,本文对内生菌的活性代谢产物进行了分类综述。     

新疆芜菁茎部内生菌的分离鉴定

为分析新疆芜菁茎部内生菌资源并揭示其物种特征,笔者采用传统平板培养,通过扩增菌株的16S r DNA,并进行序列分析的方法分离筛选芜菁茎部内生菌。结果共分离得到7株内生细菌,分布在5个不同属,6株菌为稀有放线菌。该研究首次在新疆芜菁茎部获得内生菌资源,并发现其分布较为广泛。     

蓝莓内生真菌BB01抗菌活性的研究

以贵州省麻江县蓝莓种植基地的"粉蓝"蓝莓为试材,通过分离纯化、生物学鉴定、对峙试验、菌丝生长试验及刃天青微量平板稀释试验等方法,研究了蓝莓内生真菌BB01的抗菌活性,以期为开发绿色生物保鲜剂提供参考依据。结果表明:蓝莓健康组织(茎、叶、果实)中分离纯化出41株内生真菌,其中BB01、BL22、BF27、BB01及BF41可抑制全部4种病害菌生长;发酵培养BB01获得肉汤乙酸乙酯粗提取物(broth ethyl acetate extract,BE)、菌丝体正己烷萃取物(cell hexane,CH)和菌丝体乙酸乙酯萃取物(cell ethyl acetate,CE)。提取物CH对青霉孢子抑制效果最好,最小抑菌浓度为64μg·mL^-1;提取物BE对枝孢菌、尖小丛壳菌及葡萄孢菌孢子抑制效果最好,最小抑菌浓度分别为16、256、128μg·mL^-1,同时,提取物BE终浓度500μg·mL^-1时,可有效抑制4种病害菌菌丝生长(抑菌率分别为98.067302%±3.813437%、92.187892%±0.828473%、94.251883%±0.368539%、96.909029%±5.769104%)。采用PCR扩增内生真菌基因组rDNA-ITS序列构建系统发育树鉴定BB01为枝孢菌属。     

青钱柳内生真菌分子鉴定及其抗菌研究

以广西百色野生青钱柳为试材,采用真菌形态学、rDNA-ITS、抗菌试验的方法,研究广西百色野生青钱柳内生真菌的遗传多样性和抗菌活性,以期了解广西百色青钱柳内生真菌的不同种群结构,筛选出具有抗菌活性的菌株。结果表明：从青钱柳植物中分离获得76株内生真菌,隶属于2门5纲12目19科25属,镰刀属(Fusarium)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、间壳座属(Diaporthe)为优势菌属;根、茎与韧皮部、木质部内生真菌多样性存在明显差异,茎部内生真菌的Shannon index(H′=1.605 6)、根部(1.016 7),远高于韧皮部(0.209 7)和木质部(0.266 7)。5株内生真菌至少对1种病原指示菌有抑菌活性,其中,Pezicula sp.826对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果最强,Pezicula sp.927对热带假丝酵母菌的效果最强。综上可知,青钱柳植物中蕴藏着丰富多样的内生真菌资源及有较强抑菌活性的内生真菌,可为寻找新型抗菌物质提供宝贵资源。     

羊耳蒜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性筛选

以兰科野生植物羊耳蒜为试材,采用常规无菌培养技术分离其根部的内生真菌,同时采用平板对峙的方法,研究了所获得的内生真菌菌株对常见植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:从羊耳蒜的根中共分离获得43株内生真菌,经形态学鉴定分属于7个属,其中丝核菌属占优势。筛选得到4株具有较强抑菌活性的菌株,占分离菌株总数的9.3%,抑菌活性集中在油菜菌核病菌。结合分子生物学鉴定发现,这4株菌株分别为腐皮镰孢菌Fusarium solani、柱孢霉属菌株Cylindrocarponsp.、轮枝菌属菌株Lecanicilliumsp.和胶膜菌属菌株Tulasnella sp.。     

苦豆子内生放线菌的分离鉴定及其拮抗菌筛选

采用3种消毒时间对健康苦豆子植株体内的内生放线菌进行分离。结果表明：消毒3 min消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离内生放线菌的数量,根部比茎、叶部多。经初步鉴定,苦豆子内生放线菌以链霉菌属和诺卡氏菌属为最多,分别占分离总数的35%和27%;其次为小多孢菌属,占12%;而类诺卡氏菌属、小单孢菌属、孢囊放线菌属和分枝杆菌属分离较少。26株纯化菌株对茄子枯萎病菌进行平板对峙培养,筛选出3株抑菌带宽度达到10 mm以上的菌株,其中菌株KDS22发酵液抑菌效果最好。     

多粘类芽孢杆菌CP7对荔枝霜疫霉菌的抗菌活性及其作用机制

多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa CP7菌株分泌的抗菌物质对荔枝霜疫霉菌等真菌具有很强的抑杀作用。用光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察发现,荔枝霜疫霉菌菌丝体经CP7菌株的抗菌物质处理后, 菌丝发生不规则扭曲、萎蔫、干瘪,菌丝端部膨大等形态变化;经处理的菌体细胞组织结构受损,细胞膜结构模糊不清,看不到完整的外膜结构,细胞器消溶。处理后的荔枝霜疫霉菌孢子囊出现凹陷、干瘪、畸形;孢子囊外壁严重受损,原来厚实的外壁只剩一薄层,孢子囊内原有的微细结构消失,结构模糊不清,细胞器溶解,孢囊内物质大量外泄。抗菌物质还引起菌体细胞内磷的外泄,并对细胞呼吸速率和NADH氧化酶活力有抑制作用。     

葡萄伤流液中内生菌分离鉴定与抗病功能分析

为探究葡萄树液中内生菌的种类,对‘白罗莎里奥’葡萄伤流液中的内生菌进行分离纯化,得到4株普遍存在的有益菌株,根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列同源性对其进行鉴定,并针对葡萄灰霉病病原菌进行抑菌测试。结果表明,4种内生菌分别为粘红酵母菌、隐球菌、水拉恩式菌、变形斑沙雷菌;平板抑菌试验显示,隐球菌、水拉恩式菌、变形斑沙雷菌均对灰霉病菌有一定的拮抗作用。对葡萄果粒的病菌侵染试验表明,隐球菌、水拉恩式菌、变形斑沙雷菌均能使果粒失水速率降低、灰霉病病斑缩小,抗菌物质类黄酮、总酚以及SOD、CAT、POD、PPO活性升高,灰霉病抗病相关基因VvHSF和VvDR下调,VvPR17、VvDW、VvChi和VvWRKY上调,且上调程度与抗病能力呈正相关,进一步表明了隐球菌、水拉恩式菌、变形斑沙雷菌对灰霉病菌有一定的抑制作用,在葡萄灰霉病防治中具有良好的应用潜力。     

林下种植灵芝内生细菌和放线菌的分离鉴定

以林下种植灵芝为试材,采用16S rDNA鉴定方法,研究了不同分离方法对灵芝内生细菌和放线菌多样性的影响,以期能够发现产生活性成分的菌种或者新种,从而推动微生物医药的发展进程。结果表明：从健康的灵芝子实体内分离得到放线菌1门1属的4个菌株(LZ-F1、LZ-F2、LZ-F3、LZ-F4)和细菌2门4属的5个菌株(LZ-B1、LZ-B2、LZ-B3、LZ-B4、LZ-B5)。4株放线菌均属于链霉菌属(Streptomyces),5株细菌分别属于周杆菌属(Peribacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、新根瘤菌属(Neorhizobium)和芽孢杆菌属(Bacillus)。该研究为其它食用菌内生菌的分离提供了技术支撑,也为灵芝活性成分的进一步开发利用提供了较好的参考价值。     

三七内生菌分离及抗根腐病病原真菌筛选

对三七(Panax notoginseng)内生真菌进行了系统的分离,并以三七根腐病主要病原真菌坏损柱孢菌(Cylindrocarpon destruans)和三七黄腐病菌(Cylindrocarpon did ynum)为对象,对108株三七[Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen]内生真菌及其次生代谢产物进行了抑菌活性检测.结果表明:有29株内生菌至少对1种病原菌有抑制作用,14株内生菌对2种病原菌都有抑制作用;21株内生菌的次生代谢产物至少对1种测试菌有抗菌活性,其中的2株对坏损柱孢菌具有很强的抑制作用.说明从三七内生真菌中可以筛选出对三七根腐病主要原真菌具有良好抑制作用的菌种.     

羊肚菌多糖MEP—SP1分离纯化及性质鉴定

羊肚菌[Morchella esculenta(L.)Pers.)]多糖具有降血脂及抗肿瘤功能。从羊肚菌培养液中得到分子量10000～100000万的多糖MEP-SP,采用DEAE-纤维素离子交换柱及Sepharose CL-6B柱,以水为洗脱液,分离得水溶性多糖MEP-SP1。实验结果表明,MEP-SP1是一种由木糖、葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖(摩尔比29:24:61:39)残基为重复单元组成的杂多糖,分子量约为11 500。从红外光谱(IR)及核磁共振氢谱(~1HNMR)看出主链包括β-吡喃糖苷键。     

一株野生芬娜冬菇菌株的鉴定与驯化栽培

对从内蒙古乌素图国家森林公园柳树上采集到的野生冬菇(Flammulina sp.)进行形态学研究和ITS分析,鉴定为芬娜冬菇(F.fennae)。使用培养料(50%棉籽壳,38%木屑,10%麸皮,2%碳酸钙)栽培,菌丝满袋时间为30d,从接种到第一潮菇采收为54d,子实体呈淡黄至黄色,子实体柄长(13~18cm),出菇整齐度好,袋产量200g左右。     

葡萄属植物染色体DNA的提取、纯化及RFLP鉴定

利用ＪｅｎｎｉｆｅｒＡ．ＣｏｕｃｈａｎｄＰａｕｌＪ．Ｆｒｉｔｚ的改良方法提取葡萄嫩叶染色体ＤＮＡ，并进行ＲＦＬＰ分析。结果表明，该方法提取的ＤＮＡ均未降解；以Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ层析柱纯化后可进行ＲＦＬＰ分析；核糖体ｒＤＮＡ的ＰＶｖｃ一Ａ片段制备的探针与ＨｉｎｄⅢ酶组合，使所有供试样品都显示多态性。     

浙江大盘山映山红菌根真菌的分离和鉴定

以浙江大盘山保护区的映山红(Rhododendron simsii)为试材,采用菌落形态分类和rDNA ITS序列分析方法,研究了野生映山红的菌根真菌种类及其组成,以期为栽培杜鹃花的菌根菌剂研发提供菌种参考依据。结果表明:映山红菌根真菌的8个菌种类型均属于子囊菌门,其中5个菌种类型14个菌株都属于Helotiales锤舌菌目,占菌种类型总数的62.5%和菌株总数的66.67%;3个优势菌种类型N5 Phialocephala fortinii、N7 Ilyonectria leucospermi、N8 Nemania sp.分别占菌株总数的42.86%、14.29%和14.29%;此外,还有Rhizodermea veluwensis、Pezicula ericae、Oidiodendron sp.、Helotiales sp.、Uncultured Chaetomium等菌种类型。     

葡萄酒乳杆菌的分离鉴定

使用ATB和MRS 2种培养基对自然启动苹乳发酵葡萄酒进行乳酸菌的分离鉴定,生化鉴定和16SrRNA测序。结果表明:分离到的菌株为短乳杆菌、植物乳杆菌和马里乳杆菌。这是国内首次从葡萄酒中分离到马里乳杆菌,说明我国的葡萄酒乳酸菌种类丰富。     

长根金钱菌的分离与鉴定

在３种斜面培养基上组织分离长根金钱菌子实体的不同部位,结果表明：菌丝在ＰＤＡ培养基上的生长速度比在牛粪玉米粉培养基和马铃薯综合培养基上快（平均６．９０７ｍｍ／ｄ）。分离子实体的菌肉、菌柄内部组织块均能较好地获得纯菌丝,且以分离菌肉部位最佳,其菌丝浓白、长势旺盛。孢子、菌丝经湿微镜镜检和子实体形态观测,证明分离获得的菌株为长根金钱菌（Ｏｕｄｅｍａｎｓｉｅｌｌａ ｒａｄｉｃａｔａ）。     

北京地区野生羊肚菌分离与鉴定

以北京地区采集的野生羊肚菌为试材,对其子囊果进行组织分离,采用CTAB法提取羊肚菌DNA,琼脂糖电泳检测,ITS序列测定和构建分子系统发育树,通过分离鉴定比较北京山区野生羊肚菌,以期为羊肚菌的人工栽培和菌种资源利用提供依据。结果表明:分离到羊肚菌菌株7份,各菌株亲缘关系很近,菌丝形态相似,但颜色深浅、菌核多少、菌丝生长速度明显不同。系统发育分析表明,所采集的北京野生羊肚菌均属于黄色羊肚菌类群。