南瓜SCoT-PCR反应体系的优化与引物筛选

为了构建适合南瓜SCoT-PCR反应的最佳体系,笔者对需要控制的5个变量使用L_(25)(5~6)正交试验设计。结果表明,最佳优化体系为:2.5 mmol·L~(-1)Mg~(2+)、0.40 mmol·L~(-1)dNTPs、0.5 U Taq酶、1.00μmol·L~(-1)引物、30 ng模板DNA,共20μL。然后从51个SCoT引物中筛选出多态性明显的引物20个,并优化最适退火温度。最后,对所得优化体系进行可行性验证。该体系有利于SCoT标记在南瓜材料上的应用,构建的优化体系及筛选出的引物可为南瓜分子遗传育种奠定基础。     

正交直观分析法和新复极差法优化苦瓜SRAP反应体系研究

以苦瓜为试材,采用正交直观分析法和新复极差法相结合的方法,对影响苦瓜SRAP反应体系的5种因素(dNTP浓度、模板DNA、引物浓度、Mg2+浓度及Taq DNA聚合酶)4个水平进行优化筛选,以期优化苦瓜SRAP的PCR反应体系。结果表明:苦瓜SRAP分析的优化反应体系为20μL PCR反应体系中含有1×PCR buffer,250μmol/L dNTP,50ng模板DNA,1.2μmol/L引物,1.5mmol/L Mg2+,1.5UTaq DNA聚合酶。     

科技文摘

利用ISSR分子标记鉴定苦瓜杂交种纯度目的:采用ISSR分子标记对苦瓜杂交一代品种秀玉…1号纯度进行鉴定,为生产上提高苦瓜新品种纯度鉴定效率提供参考。方法:利用ISSR技术和91条引物,对苦瓜品种秀玉1号及其亲本的DNA指纹进行分析。结果:从…91条引物中筛选出两条特征引物ISSR-845和ISSR-891,能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带510和300…bp。…其中,ISSR-845能够区分父本机械性混杂,ISSR-891能够准确区分母本自交系与杂种F1代;经群体验证,该标记与田间鉴定结果高度一致。结论:ISSR技术具有准     

枇杷iPBS分子标记的PCR体系优化与引物筛选

以枇杷的DNA为模板进行iPBS-PCR扩增,采用预备试验中效果较好的iPBS分子标记引物2241,对枇杷iPBS-PCR反应体系中的dNTP、Mg2+、引物、模板用量进行优化。根据检测结果确定枇杷iPBS-PCR使用10×Taq buffer 2μL,25mM Mg2+1.6μL,2.5mM dNTP 1.6μL,10μmol/L Primer 1μL,5U/μL Taq酶0.2μL,模板DNA 5ng的20μL反应体系。反应程序中的退火温度可以参考iPBS引物理论Tm值。对33条iPBS引物扩增测试的结果显示在该反应体系下可以筛选到谱带清晰、多态性好的引物22条,可用于枇杷的分子标记分析。     

药食同源蔬菜赤苍藤SCoT分子标记体系的优化及引物筛选

笔者以24份不同来源地的野生赤苍藤种质为试验材料,采用L₉(3³)正交试验对赤苍藤SCoT-PCR反应体系进行优化,并通过优化后的体系进行引物筛选,结果表明,PCR体系中各因素对多态性结果的影响程度排序为DNA模板量>引物用量>2×Taq Master Mix用量。最佳反应体系(20μL)为1 μL DNA模板(50 ng·μL^-1)、1.2 μL引物(10 μmoL·μL^-1)、10 μL 2×Taq Master Mix和7.8 μL ddH₂O。通过该体系从36条SCoT引物中筛选出14条稳定性好、多态性高的引物,并确定了最佳退火温度。该体系的建立和引物的筛选将为后续开展赤苍藤种质资源收集与保护、遗传多样性研究和分子育种提供参考依据。     

萝卜EST-SSR标记PCR反应体系的建立与优化

采用L16(45)正交试验设计优化了萝卜EST-SSR标记的PCR反应体系,建立了适于20μL PCR技术体系的最佳浓度:DNA模板65 ng/20μL,Mg2+0.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,引物0.8μmol/L,Taq DNA酶0.4 U/20μL,且Mg2+对该体系的影响最大。利用10对EST-SSR引物对该体系的验证结果表明,本研究建立的萝卜EST-SSR PCR体系重复性好、条带清晰、多态性丰富,对萝卜的种质资源的鉴定与评价、分子标记辅助选择育种等多方面都有重要作用。     

一种特异性标记在甜瓜白粉病抗性育种中的应用

为了验证一种特异性标记在甜瓜白粉病抗性育种中的实际应用效果,用CTAB法提取19份甜瓜亲本材料种子总DNA,合成与甜瓜抗白粉病基因Pm-2F紧密连锁标记的特异性引物,通过PCR扩增出特异性Pm-2F连锁基因,酶切验证及测序。结果表明,筛选的19份甜瓜亲本材料中有3个抗病株系,抗病株系杂合的F1代种子在田间表现为强抗性,其他材料杂合F1代均表现感病。试验室结果与田间表现一致,符合率达到100%,表明此特异性标记可以应用于甜瓜白粉病抗性育种。     

佳美苦瓜纯度的SRAP鉴定

利用SRAP分子标记技术,对苦瓜品种佳美及其亲本的DNA指纹进行分析研究,经多次试验,从108对引物中筛选出2对特征引物能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带,扩增产物具有高度的稳定性和重复性,构建了相应的DNA指纹图谱.对100株佳美苦瓜进行了纯度鉴定,结果有3株植株只有母本特异带而没有父本特异带,与大田检测的结果...     

番茄EST-SSR标记PCR反应体系的优化

应用L16 (44)正交实验优化番茄EST-SSR标记PCR反应体系.结果表明:20 μL体系中各反应物最适浓度为:DNA模板45 ng/20μL,引物0.75 μmol/L,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs0.4 mmol/L,Taq DNA酶0.5 U/20μL,且Mg2+对该标记反应体系影响最大.利用5对EST-SSR引物及P1、P2基因组DNA验证优化体系的可靠性,为该标记在番茄基因组分子标记辅助育种提供了试验依据.     

茶花品种ISSR指纹图谱反应体系建立与优化

以30个茶花品种为试材,采用5因素4水平正交实验以及单因素优化试验方法,研究Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR指纹图谱条带清晰度的影响,以进行茶花品种ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选。结果表明:茶花品种ISSR-PCR最适扩增条件为25μL反应体系中,Mg2+3.0mmol/L、dNTPs 0.2mmol/L、引物0.3mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5U、模板DNA 80ng以及52.1℃退火温度;试验从100个ISSR引物中筛选出12个适用引物;并对12个ISSR引物的多态性和稳定性进行了检验。     

侧耳属3种食用菌解剖学性状比较

以PDA培养基和棉籽壳为培养料,培养了姬菇、榆黄蘑和鲍鱼菇,并对其解剖结构进行了比较,结果表明,姬菇、榆黄蘑和鲍鱼菇菌丝均具有锁状联合,子实体菌柄都侧生,每个担子顶部产生4个担孢子,孢子内含油滴,孢子印皆为白色。姬菇和鲍鱼菇菌盖颜色为灰黑色,榆黄蘑为黄色,姬菇和榆黄蘑菌丝生长快,姬菇菌丝浓密,榆黄蘑和鲍鱼菇菌丝稀疏,鲍鱼菇菌丝能产生黑色分生孢子。姬菇和榆黄蘑子实体小而多,出菇早、产量高,鲍鱼菇子实体较大内部组织紧密,担子、担孢子梗粗壮,孢子饱满油滴大。     

玉米秸秆基质对无土栽培莴苣生长的影响

以美国大速生菜为试材,以腐熟与未腐熟玉米秸秆替代草炭作为莴苣无土栽培基质中的主要材料,研究其对莴苣产量、叶面积、干物质量、光合速率、根系活力、维生素C和硝酸盐含量的影响。结果表明:T3处理(腐熟玉米秸秆∶蛭石=3∶1)基质配方最有利莴苣的生长。     

真姬菇菌丝体对四种抗生素的敏感性研究

检测了真姬菇菌丝对卡那霉素、头胞霉素、氨卞霉素、潮霉素的敏感性。结果表明:卡那霉素、头孢霉素、氨苄青霉素对真姬菇菌丝生长基本没有影响,与对照比较3种抗生素不同浓度对菌丝生长的影响效应均没有显著性差异。真姬菇菌丝对潮霉素非常敏感,10mg/L的潮霉素能够完全抑制真姬菇的菌丝生长,研究结果为进一步建立真姬菇的农杆菌介导的遗传转化打下了基础。     

直立迷迭香不同木质化程度插条扦插效果研究

以直立迷迭香不同木质化程度插条为试材,进行扦插对比试验,旨在筛选出最适合北京地区直立迷迭香生产的插条类型。结果表明:在嫩梢、半木质化和完全木质化3种插条类型中,完全木质化插条生根早、根量大、分枝多,扦插效果最好,适合在生产中推广。     

鸡腿蘑菌丝体的同工酶研究

用8种不同培养基配方，培养鸡腿蘑菌丝体，其同工酶分析结果表明，鸡腿蘑菌丝体酯酶(EST)同工酶谱差异明显，过氧化物酶(POD)同工酶谱差异明显。     

不同类型蔬菜中矿质元素含量的比较研究

采用火焰原子分光光度法,测定了保定市市售的3种类型共16种蔬菜中的Ca、Cu、Zn、Fe、Mn 5种矿质元素,为指导人们日常饮食提供科学依据.结果表明:不同类型蔬菜中矿质元素含量不同,叶菜类蔬菜中的(Ca、Cu、Zn、Fe、Mn含量高于果菜类蔬菜、根茎类蔬菜;而不同品种的蔬菜其矿质元素的含量也存在很大差异,油菜中的Ca和Mn含量最高,分别为7.6 g/100g和8.98 mg/100g;Zn含量最高的为香麦16.72 mg/100g,其次为菠菜12.63 mg/100g,洋白菜的Zn含量最低仅为0.73 mg/100g;菠菜中Fe含量最高138.43 mg/100g,其次为香麦111.11 mg/100g.综合分析结果,香麦、菠菜、油菜的Ca、Cu、Zn、Fe、Mn含量要高于其它种类的蔬菜.     

蚁巢热水浸提物对鸡菌丝生长的影响

采用室内培养的方法 ,来研究白蚁蚁巢的热水浸提物对鸡菌丝生长的影响 ,探索鸡菌丝的营养特征。研究发现蚁巢热水浸提物对黄褐纹鸡菌丝的生长具有至关重要的、必不可少的作用 ,而蚁巢热水浸提物的量的多少对菌丝生长的影响不大。     

枣树砧木处理方法对植株生长期嫁接成活率的影响

通过对酸枣砧木进行嫁接前、嫁接后处理，在生长期嫁接达到高成活率是可能的。试验表明：在嫁接前20d(天）剪砧、嫁接后20d(天）左右去裙枝对提高成活率效果最好。     

不同因子对新疆野生沙棘硬枝扦插影响的试验研究

采用一、二年生优质的沙棘枝条,通过单因素试验以及正交试验对沙棘硬枝扦插成活率影响因子进行综合评价。试验结果表明:以园土∶蛭石∶有机肥=5∶4∶1为扦插基质,用一、二年生优质的沙棘基部枝条作插穗,用浓度为200 mg/kg ABT2处理插穗,成活率可达73.5%。     

黑核桃种子层积处理试验

本文通过种子层积处理前进行的不同预处理方法和层积天数的试验，对影响美国东部黑核桃种子层积催芽因素进行了探讨。催芽前进行冷水浸种5d(天)，沙藏层积催芽150d(天)，发芽率最高，发芽最快，播种后60d(天)调查，出苗率达75％。