根癌农杆菌介导荔枝遗传转化研究

利用带有内含子的GUS基因(uidA)的瞬时表达,研究影响根癌农杆菌介导荔枝胚性愈伤组织遗传转化的若干因素。结果表明:在AGL-1、LBA4404和EHA105三种菌株中,EHA105对荔枝胚性愈伤组织的侵染力最强;采用2d的共培养时间既有较高的瞬时表达率,又避免了农杆菌的过度生长;0.5×10~8个细胞/mL的菌液密度为最佳侵染浓度;继代培养15d的胚性愈伤组织处于最旺盛分裂的时期,是转化的合适受体;愈伤组织转化前干燥处理对uidA瞬时表达率的提高有一定的促进作用。使用优化的农杆菌侵染条件获得了稳定表达uidA基因的荔枝抗性愈伤组织。     

根癌农杆菌介导的西瓜遗传转化研究

利用带有内含子的GUS基因的瞬时表达,研究影响根癌农杆菌介导的西瓜遗传转化的若干因素。结果表 明:西瓜子叶块外植体对潮霉素较为敏感,15 mg/L是适宜的筛选浓度,可明显抑制非转化组织的生长;脱菌过程中 采用500 mg/L的头孢霉素,对外植体生长影响较小;农杆菌菌株EHA105对西瓜子叶块的侵染能力较强;预培养有 利于转化;共培养3-4 d有利于提高转化频率并避免了农杆菌的过度生长;OD600值为0.3的菌液侵染10min效果最 佳;共培养培养基中添加乙酰丁香酮可提高转化频率。     

农杆菌介导的百合遗传转化体系的建立

 通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法, 建立了凝望星空百合(Lilium ‘Star Gazer’) 愈伤组织和西伯利亚百合(Lilium ‘Siberia’) 叶片的遗传转化体系。试验结果表明: 以愈伤组织和叶片为受体, 均能取得较理想的转化效果; 根癌农杆菌OD600介于0.5～1.0时, 能获得较高的转化率; 40 mg·L ^{- 1}的潮霉素对愈伤组织和叶片有很好的筛选效果; 在共培养培养基中, 去除NH₄NO₃对提高百合转化效率有极显著的效果。对转基因百合进行PCR检测, 结果表明gus基因已整合到百合基因组中。     

农杆菌介导的BnCS基因对黄瓜遗传转化研究

以黄瓜为受体,用农杆菌介导的方法,将同源克隆的抗冷基因BnCS转入黄瓜,建立农杆菌介导的遗传转化体系,获得转化的抗性植株;对抗性植株和后代进行PCR鉴定,证明BnCS基因已经转入黄瓜.对T0种子和T1植株进行耐冷性鉴定.结果表明:后代耐冷性有所增强;试验获得的耐冷材料已应用于育种中.     

根癌农杆菌介导的西瓜遗传转化研究进展

介绍了根癌农杆菌介导的西瓜遗传转化的研究现状,综述了西瓜高效再生体系的建立和遗传转化过程中的主要影响因素,包括最佳外植体的选择、最适培养基的制备,以及抗生素、农杆菌菌株类型、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间和添加乙酰丁香酮等内容,讨论了西瓜遗传转化存在的问题,并对这一体系的发展进行了展望。     

影响根癌农杆菌介导香蕉胚性悬浮细胞遗传转化的因素

用含质粒载体pCAMBIA1301的根癌农杆菌EHA105转化贡蕉(Musa A A Pisang Mas cv. Mas)品种的胚性悬浮细胞,通过测定GUS基因瞬时表达率,对转化初期的主要影响因素进行了研究。结果表明,取处于对数期的胚性悬浮细胞和D600nm为0.2的菌液混合,在室温、8000r/min离心5min,然后在110r/min的旋转摇床上摇5min,在体细胞胚诱导培养基上共培养8d,瞬时表达率达到最高值25.30%。     

农杆菌介导木本植物遗传转化的研究进展

农杆菌介导法是目前应用较广泛的转基因技术。该研究对农杆菌介导木本植物遗传转化的发展状况、转化方法进行了综述,重点分析了在木本植物中,外植体类型、农杆菌浸染时间、共培养条件和筛选转化等主要因素对农杆菌转化效率的影响,以期为提高木本植物的转化效率和转基因技术提供参考依据。     

农杆菌介导南瓜遗传转化体系的建立

以南瓜金辉一号（Cucurbita moschata‘Jinhui1’）为实验材料,利用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导转化南瓜子叶节,研究了预培养时间、侵染时间、乙酰丁香酮（AS）浓度和共培养时间,     

根癌农杆菌介导马齿苋愈伤组织遗传转化研究

利用马齿苋的叶片诱导出愈伤组织,再以愈伤组织为受体建立了根癌农杆菌介导的遗传转化体系。结果表明:利用该转化体系得到抗性愈伤组织后,对其进行GUS组织化学染色和PCR扩增鉴定,证实为转化子,表明根癌农杆菌介导外源基因转化马齿苋的愈伤组织是完全可行的,为今后通过基因工程手段进行马齿苋的改良奠定了基础。     

农杆菌介导石斛兰遗传转化的研究

利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎（PLBs）,研究了石斛兰对潮霉素的敏感性,并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮（AS） 等对石斛兰转化的影响。结果表明：带有pCAMBIA1301的根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA105（简称为E1301）比带有相同表达载体的LBA4404（简称L1301）对石斛兰的转化效率更高,前者约为后者的6倍;较高浓度的侵染液转化效率更高（OD₆₀₀为1.0或1.2时的转化效率约为OD₆₀₀为0.6或0.8时的2倍）;在农杆菌生长至OD₆₀₀值为0.8时,添加AS可提高转化效率;而当OD₆₀₀为0.6、1.0和1.2时,添加AS反而不同程度地降低转化效率;在各种处理中,OD₆₀₀为1.0时不添加AS的转化效率最高,达44.4％。经过5~6个月选择培养,抗性小苗经GUS染色、PCR 和 Southern杂交检测证明为转基因植株。     

超声波辅助发根农杆菌对黄瓜遗传转化的影响

 由于超声波处理可增加农杆菌与外植体之间的接触面积, 提高农杆菌对外植体的转化频率。本试验用野生型发根农杆菌A4 菌株感染黄瓜无菌苗的子叶和下胚轴, 建立了黄瓜的发根遗传体系。并对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮等影响因素进行了优化。     

农杆菌介导的CBF基因转化哈密大枣

以哈密大枣无菌苗叶片为试材,以根癌农杆菌LBA4404为媒介将抗寒基因转录因子CBF基因导入哈密大枣,利用PCR、RT-PCR对转化植株进行鉴定,建立了哈密大枣的遗传转化体系。结果表明:在对哈密大枣无菌苗叶片进行遗传转化时,预培养2d,农杆菌菌液OD600为0.5,浸染20min,共培养3d的转化效率为最高。试验共获得7个抗性再生转化系。经PCR鉴定,CBF基因在7个抗性再生转化系中均为阳性;经RT-PCR分析,CBF基因在7个抗性再生转化系中均得到表达。     

黄瓜遗传转化研究进展

分析了建立黄瓜遗传转化体系的各种影响因素,及目前黄瓜遗传转化工作中存在的问题和相应的策略,综述了黄瓜转基因分子育种中关注较多的标记基因、抗病基因、单性结实基因等方面的研究现状。     

农杆菌介导的蝴蝶兰基因转化系统的建立

 针刺后的蝴蝶兰‘White Hikaru’的类原球茎(PLB)，与含绿色荧光蛋白基因( )和潮霉素磷酸转移酶基因(^p￡)的pCAMBIA 1300一SmGFP的根瘤农杆菌LBA4404 共培养，培育出了转基因的蝴蝶兰。经绿色荧光蛋白检测和Southern印迹，证实了再生植株中含cop基因和hpt基因。     

黄瓜再生体系和除草剂抗性筛选体系的建立

试验以黄瓜自交系C-8子叶节为材料,比较了不同浓度的6-BA和IAA组合对其不定芽诱导的影响,建立了高效快速的再生体系;摸索了不同浓度的草铵膦对产生不定芽的影响,建立了C-8的草铵膦抗性筛选体系,为下一步的遗传转化打下基础。结果表明,最佳的诱芽培养基为MS+0.5mg·L-16-BA+2mg·L-1IAA,出芽率为77.5%,生根培养基为1/2MS。对于C-8黄瓜,草铵膦的最佳遗传转化筛选浓度为0.6mg·L-1。     

农杆菌介导菜豆铁结合蛋白基因(PvFer)转化番茄的研究

利用农杆菌介导的转化方法将菜豆铁结合蛋白基因（PvFer）导入‘粉红 908’番茄基因组中。经PCR、PCR-Southern、Southern blotting检测证实,外源基因已整合到2株番茄基因组中。半定量式RT-PCR检测表明,外源菜豆铁结合蛋白基因在2株转基因植株中得到了表达。测定番茄果实和叶片中铁、锌、锰含量表明,转ferritin基因株系T1的叶片铁含量提高了174%,果实中的铁含量提高了37%,锌在果实中提高了119%,而锰在果实中的含量却降低了56%。     

诱导黄瓜直接器官发生主要影响因素的研究

 对诱导黄瓜直接器官发生的主要因素进行了探讨。结果表明: 外植体类型、基因型及植物生长调节剂对再生频率均有显著影响。子叶节是最佳的外植体类型; ‘长春密刺’及‘龙杂黄七号’再生频率较高, 分别达到93. 2 %和92. 5 % , 前者每块外植体上的平均芽数(13. 2) 极显著高于后者(3. 1) ; 62BA 单独存在即可诱导产生丛生芽, 0. 5 mg/ mL 最佳。