美洲狼尾草不育系、恢复系及杂种F1的RAPD分析

利用RAPD技术对美洲狼尾草不育系23A、23DA、85DA,恢复系3B-6及其相应的3个F1杂交种基因组DNA进行了多态性分析,摸索出一套适合美洲狼尾草DNA提取、PCR扩增方法.对随机选取的27个引物进行扩增,结果有5个引物扩增出多态性条带,其中引物S.扩增的条带不仅重复性好,而且清晰,为美洲狼尾草亲本材料及其杂交种鉴定和纯度分析提供了一种快速、准确的检测手段.     

美洲狼尾草不良系、恢复系及杂种F1的RAPD分析

利用RAPD技术对美洲狼尾草不育系23A，23DA，85DA，恢复系3B－6及其相应的3个F1杂交种基因组DNA进行了多态性分析，摸索出一套适合美洲狼尾草DNA提取，PCR扩增方法，对随机选取的27个引物进行扩增，结果有5个引物扩增出多态性条带，其中引物S369扩增的条带不仅重复性好，而且清晰，为美洲狼尾草亲本材料及其杂交种鉴定的纯度分析提供了一种快速，准确的检测手段。     

利用SRAP标记分析鸡、鹌鹑及其属间杂交种的群体遗传结构

为了研究鸡、鹌鹑及其属间杂交种基因组的遗传变异程度及其关系,试验采用相关系列扩增多态性(SRAP)标记对鸡、鹌鹑及其属间杂交种进行了DNA多态性分析。结果表明:选用的7对引物组合共产生31个多态性条带,平均每个引物组合产生4.4个多态性条带,每个引物组合产生多态性条带的比例为22.3%;从聚类分析图可知,母本(鹌鹑)和属间杂交种的相似系数远高于属间杂交种与父本(鸡);生理生态学观察结果也显示属间杂交种和母本在外形、习性上更为相似。     

鸭沙门菌的随机扩增多态性DNA分析

以5株同一血清型的鸭沙门茵为研究对象，分别提取基因组DNA后，用20条随机引物对其进行RAPD分析。结果，20条随机引物中不能扩出任何条带的引物有2条，能扩出条带但扩增图谱中没有特异性条带出现的引物有10条，能扩出条带且扩增图谱具有多态性的引物有8条。对筛选到的具有多态性的8条引物进行分析，共扩增出46个DNA片段，片段大小为0．2～3．2kb，其中5个菌株共有的片段有13条，显示多态性的片段有33条。     

42份高粱与苏丹草及其2个杂交种DNA指纹图谱的构建

选用100个RAPD引物和95对SSR引物进行PCR扩增,旨在构建42份高粱和苏丹草品种资源及2份国审品种高粱-苏丹草杂交种的DNA指纹图谱。结果表明,从100个RAPD引物中筛选到9个多态性高、重复性好的引物,多态性条带比率为64.06%,利用4个核心RAPD引物可以为每份品种构建1张特定的数字指纹,并通过其中1个引物F-01构建了1张能鉴别2个杂交种的RAPD指纹图谱,不过该图谱不能区别皖草3号与其父本Sa。从95对SSR引物中筛选出多态性丰富的引物73对,多态性条带比率为86.06%,通过3对核心SSR引物就可以构建42份高粱和苏丹草的SSR数字指纹,同时利用其中1对SSR引物txp18,寻找到2个杂交种的互补带,从而构建了2个高粱-苏丹草杂交种的SSR指纹图谱,这张SSR指纹图谱不仅能鉴别皖草2号和3号,还可以把杂交种与其亲本区别开来。     

42份高梁与苏丹草及其2个杂交种DNA指纹图谱的构建

选用100个RAPD引物和95对SSR引物进行PCR扩增,旨在构建42份高粱和苏丹草品种资源及2份国审品种高粱苏丹草杂交种的DNA指纹图谱。结果表明,从100个RAPD引物中筛选到9个多态性高、重复性好的引物,多态性条带比率为64．06％,利用4个核心RAPD引物可以为每份品种构建1张特定的数字指纹,并通过其中1个引物F-01构建了1张能鉴别2个杂交种的RAPD指纹图谱,不过该图谱不能区别皖草3号与其父本Sa。从95对SSR引物中筛选出多态性丰富的引物73对,多态性条带比率为86．06％,通过3对核心SSR引物就可以构建42份高梁和苏丹草的SSR数字指纹,同时利用其中1对SSR引物txp18,寻找到2个杂交种的互补带,从而构建了2个高粱-苏丹草杂交种的SSR指纹图谱,这张SSR指纹图谱不仅能鉴别皖草2号和3号,还可以把杂交种与其亲本区别开来。     

鸭茅杂交种的SSR分子标记鉴定及其遗传变异分析

以140个鸭茅杂交种单株及其亲本(01996、YA02-103)为材料,用SSR分子标记技术研究杂种与其亲本间扩增谱带的多态性,以甄别真假杂种。SSR标记在供试材料中的扩增带型表现为互补型、父本型及其他型。利用3对特异引物A01G20、A03N16、A03K22可快速准确地鉴定出杂交种111份。试验所用的100对SSR引物中有13对引物分别在杂种和双亲之间存在扩增多态性。13对引物在供试材料中共扩增出多态性条带76条,平均每对引物扩增出6条,多态性百分率为84.24%。供试材料具有丰富的遗传变异,利用SSR进行鸭茅杂种鉴定及遗传变异分析是可行的。     

SRAP与SSR分子标记在柳枝稷杂种鉴定中的比较分析

利用SRAP标记和SSR标记对柳枝稷杂交种进行鉴定,比较2种标记在柳枝稷杂种鉴定方面的效率和准确性,为柳枝稷乃至异花授粉多倍体植物的杂种真实性鉴定提供科学依据。分别利用SRAP与SSR标记技术对柳枝稷165个杂交种单株和亲本DNA进行扩增,分析杂交种与亲本扩增的多态性条带数,并鉴别真假杂交种。与SRAP标记相比,共显性的SSR标记具有高效性,本研究中仅用1对SSR引物就鉴别了所有杂交后代的真实性,多态性条带比率为100%。而显性SRAP标记用了6对才能鉴别所有杂交后代的真实性,多态性条带比率为40%,相对较低。     

柞蚕杂交及回交后代的RAPD分析

本文采用RAPD分子标记技术对柞蚕品种选大1号和沈黄1号及其F1、F2代、回交F1代共13个群体的基因组DNA进行了分析,探讨了柞蚕品种的分子遗传机制。运用8个RAPD引物进行扩增,共扩增出74条清晰稳定的条带,其中有65条具有多态性,多态性位点比率为87.84%,其中也出现了特异性扩增位点。     

应用AFLP分子标记对6个家蚕品种的鉴定

利用AFLP分子标记技术对浙江省生产上应用的 6个家蚕品种 (包括正反交 )进行了DNA指纹分析 ,筛选出E AAC/M CTT、E ACA/M CAA、E ACC/M CTT、E AGG/M CAA及E AGG/M CTT 5对引物。这 5对引物在 6个家蚕品种中共扩增出 15 7条带 (平均每对引物扩增 31 4条带 ) ,其中有多态性带 5 4条 (平均每对引物扩增多态性带 10 8条 ) ,多态性比例为 34 4 %。通过这些多态性条带的不同组合 ,可明确将供试的 6个家蚕品种加以区分 ,并作为 6个家蚕品种鉴定的依据。     

不同种植密度及刈割次数对杂交狼尾草营养价值的影响

2009年4～11月在河北省大名县采用大田试验播种杂交狼尾草（Pennisetum americanum×P.purpureum）种茎,研究不同种植密度（6 944,13 889,27 778株/hm2）不同刈割茬数后其饲用价值的变化,为杂交狼尾草在生产实践中发挥较大的饲用价值提供理论依据。结果表明：粗蛋白含量随密度的...     

Diagnosis of canine Hepatozoon spp. infection by quantitative PCR

Hepatozoon (H.) americanum and H. canis are the etiological agents of canine hepatozoonosis, a disease that is found worldwide and is also prevalent in the southeastern United States. Current laboratory diagnosis of canine hepatozoonosis caused by H. americanum is usually dependent on visual identification of Hepatozoon "onion skin cysts" in muscle biopsies, an approach that requires invasive sampling and can result in false negatives. We have developed a diagnostic method for detection of Hepatozoon spp. DNA that integrates nucleic acid extraction with extensive agitation to maximize DNA extraction efficiency. The DNA extracted from canine EDTA-whole blood is subjected to real-time PCR, and fluorescence resonance energy transfer (FRET) probes detect a signature polymorphism in the amplified DNA. This PCR method amplifies a fragment of the Hepatozoon 18S rDNA gene, detects as few as 7 genomic copies of Hepatozoon spp. per ml of blood with high specificity, and differentiates between H. americanum and H. canis amplicons. A surprising 300-fold increase of H. americanum 18S rDNA targets occurred during 3-0 days of storage of positive blood specimens. Examination of 614 EDTA-blood samples submitted mostly from the southeastern Unites States from dogs with suspected hepatozoonosis identified H. americanum in 167 samples (27.2%). An additional 14 samples (2.3%) were positive for H. canis, and 14 samples (2.3%) were positive for both H. americanum and H. canis. These results suggest that the Hepatozoon spp. 18S rDNA quantitative PCR may be a valuable tool that can improve diagnosis and therapy of canine hepatozoonosis.     

杂交狼尾草新品系遗传关系的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术分析狼尾草属11个品种（品系）12份材料间的遗传关系,结果发现7个引物共扩增出82条带,其中多态性条带为60条,多态位点达73.2%,表明在这11个品种（品系）间具有较高的遗传多样性。从SPSS聚类分析结果发现,杂交狼尾草新品系1号、杂交狼尾草新品系2号与原品种杂交狼尾草有较为密切的亲缘关系,杂交狼尾草新品系1号与杂交狼尾草的遗传距离为0.033,杂交狼尾草新品系2号与杂交狼尾草的遗传距离也仅为0.067,从而为杂交狼尾草新品系1号、杂交狼尾草新品系2号与杂交狼尾草之间亲缘关系的确定提供了重要依据。此外,也发现象草新品系与摩特矮象草具有最小的遗传距离（0.033）。     

象草4CL基因片段的克隆及RNAi 表达载体构建

 象草是热带和亚热带地区广泛栽培的多年生资源植物。为探讨华南象草４-香豆酸：ＣｏＡ 连接酶（4CL）基因下调表达对木质素合成的影响,本研究设计１对特异引物,ＰＣＲ 扩增获得一段长为３７４ｂｐ的干扰片段。通过ＴＯＰＯ 克隆,将该片段克隆到载体ｐＣＲ ／ＧＷ／ＴＯＰＯ  ,构建了入门克隆载体ｐＥＮＴＲ-４CL;再经过ＬＲ 反应使ｐＥＮＴＲ-４CL上的干扰片段进入目的载体ｐＣＢ２００４Ｂ 上,形成表达载体ｐＣＢ２００４Ｂ-４CL,最后通过冻融法将其转入到根癌农杆菌ＥＨＡ１０５中。菌液ＰＣＲ 结果表明ＲＮＡｉ质粒已成功转入农杆菌,为进一步利用ＲＮＡｉ技术研究４CL基因的功能奠定了基础。     

尖孢镰刀菌分子检测技术的建立与应用

尖孢镰刀菌从形态学和分子生物学上与属内多种菌难于区分,为准确鉴定豆科牧草上的尖孢镰刀菌,本研究基于尖孢镰刀菌与其他镰刀菌的核糖体DNA基因间间隔区IGS(intergenic spacer)序列间的差异,设计了一对特异性引物P₁/P₂,检测体系可以特异地从尖孢镰刀菌中扩增出一条1081 bp的条带;引物P₁/P₂对尖孢镰刀菌基因组DNA的检测阈值为100 pg,对土壤中尖孢镰刀菌分生孢子的检测灵敏度为100个孢子/g土;同时,引物P₁/P₂也可以对发病牧草根部组织中尖孢镰刀菌的存在进行特异性检测。检测体系可不经过室内病原菌的分离纯化即可有效的从土壤和病株中提取的DNA进行PCR检测鉴定,是一种快速有效的豆科牧草根腐病病原菌分子检测技术。     

春播禾本科牧草品比试验

进行杂交苏丹草Sorghum sudanense,杂交狼尾草Pennisetum hybrid,美洲狼尾草Pennisetum americanum,饲用高粱Sorghum vulgare,墨西哥饲用玉米Euchlaena mexicana联5个春播禾本科牧草品种品比试验,结果表明:各品种均能适应试验地环境条件,试验期内未发生病虫害.其中以饲用高粱产草量最高,鲜草产量达到156 285kg/hm2,且草质好,适口性强,是继墨西哥饲用玉米后值得推广的优选品种.杂交狼尾草、美洲狼尾草不宜作高产栽培品种.试验为象山县丰富春播牧草栽培品种、推广常年牧草轮作模式、提高牧草生产效益提供了依据.     

PCR法筛选大黄鱼微卫星DNA

构建大黄鱼部分基因组DNA文库。以M13通用引物和根据微卫星核心序列所设计的引物，用PER法直接对文库进行扩增，获得15个PER阳性克隆，对阳性克隆测序。测序结果说明，6个阳性克隆中含有微卫星核心序列，用Primer3引物设计软件对侧翼序列进行微卫星引物设计。用6对引物扩增大黄鱼基因组，PER结果经6％聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，其中2对引物能得到稳定的扩增。     

鉴别牛早期胚胎性别PCR方法引物的设计与筛选

根据牛Y-染色体特异重复序列、睾丸特异蛋白基因以及性别决定基因序列设计合成5对公牛Y-染色体特异引物，依据牛骨胳肌α肌动蛋白前体基因和微卫星DNA序列设计合成4对牛DNA特异引物(内标引物)。单重PcR扩增牛基因组DNA，筛选出4对牛Y-染色体特异引物和1对牛DNA特异内标引物。将不同的Y-染色体特异引物与内标引物组合，多重PCR扩增牛基因组DNA、已知性别的牛成纤维细胞和克隆胚胎，筛选出2个可用于牛早期胚胎性别鉴别的PCR引物组合：B34／A12和B78／A12。     

应用PCR技术检测柞蚕微孢子虫

采用斑迹抽提法提取柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)基因组DNA,基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图谱中有大小约15kb的清晰、完整条带。选用已报道的微粒子属16S rRNA基因的保守序列设计P1/P2和N1/N22对引物,对柞蚕微孢子虫基因组DNA进行PCR扩增,结果2对引物分别扩增出1条大小不同的特异谱条带,其中用引物N1/N2扩增可检测出0.47ng的DNA模板。应用同样的PCR引物、体系和反应条件,可有效扩增出受感染柞蚕幼虫、成虫中的微孢子虫基因组DNA条带。该项检测技术有望应用于柞蚕微粒子病的早期诊断。     

热研4号王草和桂闽引象草的核型分析

采用常规压片法,对热研4号王草(Pennisetum purpureum×P.americanum cv.Reyan No.4)和桂闽引象草(P.purpureumcv.Guiminyin)的染色体数目和核型进行分析,以期为狼尾草属种质资源多样性保护利用和遗传育种研究提供理论依据。结果表明,两者染色体基数均为x=7。其中,热研4号王草为三倍体,有21条染色体,核型公式2n=3x=21=21m(3SAT),染色体相对组成I.R.L=9S+3M1+3M2+6L,3条染色体含有随体;桂闽引象草为四倍体,有28条染色体,核型公式2n=4x=28=18m(2SAT)+10sm(2SAT),染色体相对组成I.R.L=10S+6M1+4M2+8L,4条染色体含有随体。热研4号王草和桂闽引象草核型不对称系数分别为60.15%和62.19%,属于1B型和1C型,其核型都属于比较原始的类型。