河南省五种常见禾本科杂草病原真菌种类调查与部分菌株的致病性测定

为了解河南省常见禾本科杂草上的病原真菌种类状况,于禾本科杂草生长季节对河南9个县市的稗草、狗尾草、马唐、牛筋草和虎尾草的发病情况进行了调查和采样.从72份样本中共分离获得152个真菌菌株,对产孢的131个菌株经形态学观察和rDNA ITS序列比对分析,鉴定出9个属的真菌,其中70株鉴定为16种.明确了平脐蠕孢属、弯孢属、凸脐蠕孢属、内脐蠕孢属和长蠕孢属等蠕形分生孢子真菌是狗尾草、马唐、稗草等常见禾本科杂草上的主要病原菌.对其中来自发病严重样品、产孢量大的30个菌株用人工接种法进行了致病性测定,狗尾草平脐蠕孢NY1菌株和新月弯孢zxl07289a菌株均对供试杂草表现出很强的致病性.研究结果丰富了禾本科杂草的病原真菌种类信息,为生物除草剂的研发提供了材料和参考.     

东北地区四种常见禾本科杂草病原真菌资源调查及其致病性测定

为了解我国东北地区常见禾本科杂草病原真菌资源状况,于禾草生长季节对东北三省19个县市的稗草、狗尾草、马唐和虎尾草的发病情况进行了调查和采样。对病害样品用组织分离法分离获得186个真菌菌株,经形态学观察和rDNA ITS序列比对分析,鉴定到10个属的真菌。对其中分离率较高具代表性的或来自发病严重样品的31个菌株用人工接种法进行了致病性测定,明确了新月弯孢(Curvularia lunata)对稗草、狗尾草、马唐和虎尾草均有较强致病性,梭形凸脐蠕孢(Exserohilum fusiforme)和尖角凸脐蠕孢(E. monoceras)对稗草具有较强致病性,麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)、狗尾草平脐蠕孢(B. setariae)、嘴突凸脐蠕孢(E. rostratum)和链格孢(Alternaria spp.)对狗尾草具有较强致病性。不同菌株致病性有差异,一般来讲,对原寄主的致病性强于对其他寄主的致病性。研究结果丰富了禾草的病菌资源和信息,为真菌除草剂的研发奠定了基础。     

安徽歙县油茶林昆虫病原真菌物种多样性及其季节变化

为研究安徽歙县油茶林的昆虫病原真菌群落多样性,于2016-2017年对油茶林内自然罹病的昆虫标本进行分离和鉴定。结果表明,分离的昆虫病原真菌共计132株,鉴定为6属10种。球孢白僵菌Beauveria bassiana、环链棒束孢Isaria cateniannulata和细脚棒束孢I.tenuipes为歙县油茶林昆虫病原真菌的优势类群,3种昆虫病原真菌的数量占所有菌株的75.76%。同时对昆虫病原真菌物种的多样性研究表明,其物种数、多度、多样性指数、均匀度等指标在一年中变化不大。不同季节昆虫病原真菌数量变化较大,夏季菌株最为丰富,随着气温下降及降雨量的减少,菌株数量逐渐下降。本研究结果可为进一步开发生物农药奠定基础。     

三株病原真菌对稗草生防潜力的研究

从稻田中采集自然感病的稗草标样,分离获得10余种病原真菌,经生测,链格孢菌、尖角突脐孢菌和内脐孢菌是3株很有希望的稗草生防潜力菌。对它们的生长及产孢特性、寄主范围及孢子悬浮液喷雾接种对水稻和稗草的致病性等进行了研究。结果表明,3个菌各有优缺点。链格孢菌对稗草致病力稍差,对水稻有轻度感染,但其产孢速度快,产孢量大;尖角突脐孢菌对稗致病力强,对稻无影响,但产生孢子慢,产生菌丝多;内脐孢菌对稗致病力强,对稻安全,菌落生长较慢,但产孢速度快,产孢量多,气生菌丝少。黑暗、空气充足有利于3菌株的生长及产孢。     

一株莱氏绿僵菌的筛选及其对草地贪夜蛾的毒力

开展草地贪夜蛾病原真菌的筛选和毒力测定可为草地贪夜蛾的绿色防控提供新的生物制剂.本研究从广西南宁田间采集的草地贪夜蛾幼虫僵虫上分离获得一株病原真菌,采用形态学和ITS-rDNA序列分析相结合的方法对该菌株进行了鉴定,并采用浸虫法测定了该菌株对草地贪夜蛾的致病力.结果表明新分离的菌株为莱氏绿僵菌Metarhizium r...     

稻蝗肠道真菌的除草活性筛选及菌株DH03的鉴定

利用涂布平板法从中华稻蝗肠道中分离得到6株真菌,活性筛选试验表明菌株DH03具有较好的除草活性。当供试质量浓度为100 μg/mL时,该菌株发酵液的乙酸乙酯提取物对稗草和反枝苋根生长的抑制率均大于80%,比阳性对照2,4-二氯苯氧乙酸的活性好;进一步研究表明发酵液活性物质主要集中在中等极性部分;该菌株的发酵液对盆栽稗草幼苗生长表现出较强的抑制作用,当喷施发酵液原液时,稗草的受害率和均株高分别为36.1%和9.78 cm。经形态学观察和ITS序列分析确定该菌株为Cladosporium oxysporum。DH03作为微生物源除草剂值得进一步研究。     

狭卵链格孢菌株AAEC05-3及其毒素对稗草的致病性

为了确定稗草生防菌狭卵链格孢Alternaria augustiovoidea菌株AAEC05-3防除稗草的潜力,研究了其孢子接种浓度和喷液量对该菌株致病力的影响及菌株的寄主专化性。结果表明,接种浓度和喷液量显著影响菌株的致病力,接种浓度达到1×106个孢子/mL时,菌株对稗草生长抑制率达到85.32%。150mL/m2的喷液量对稗草的防除效果达到91.84%。进一步增加喷液量,菌株对稗草的生长抑制率降低。水稻、大豆、向日葵和绿豆对菌株不敏感,而小麦、玉米和谷子等作物对菌株较敏感,表明菌株寄主相对专一。通过柱层析法和高效液相色谱法分离到一除草活性化合物,化合物的最大紫外吸收峰在243nm和281.5nm。试验结果表明,采用C18柱并以甲醇∶水(v/v)=60∶40为流动相能较好地分离纯化该毒素。在100mg/L浓度下,毒素可完全抑制稗草种子的萌发。盆栽试验结果表明,在100mg/L浓度下,该毒素对稗草幼苗生长抑制率达76%。表明菌株AAEC05-3可有效防除稗草,具有微生物除草剂开发潜力。     

马铃薯块茎病原真菌拮抗菌株筛选及优良拮抗菌株鉴定

从马铃薯块茎上分离内生细菌,以块茎病原真菌为指示菌,采用平板对峙法筛选拮抗菌株,并利用形态学特征和16S rDNA基因序列分析对优良拮抗菌株进行鉴定。结果表明,从定西马铃薯块茎中共分离得到72株内生细菌,其中19株对5种块茎病原真菌的抑菌率均高于51.87%,特别是内生细菌6-5和5-6分别对马铃薯炭疽病菌Colletotrichum coccodes和马铃薯黑痣病菌Rhizoctonia solani的抑菌率达85.82%和72.18%,且具有固氮和产吲哚乙酸(IAA)功能,其产IAA量分别为3.37 mg/L和19.25 mg/L;根据形态特征及16S rDNA基因序列将菌株5-6鉴定为萎缩芽胞杆菌Bacillus atrophaeus,菌株6-5鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。     

空心莲子草病原真菌的分离筛选及其菌株SF-193种的鉴定

在空心莲子草上分离获得真菌295株,其中有191株对空心莲子草具有致病能力,有12株致病力较强(病级5级以上)。经过复筛发现菌株SF-193对空心莲子草的致病能力最强。在田间自然条件下人工接种200株空心莲子草,SF-193菌株能够导致发病程度为6级的可达到80%以上。采用18S rDNA和ITS核酸序列同源比对,对菌株SF-193进行形态学鉴定和分子鉴定,两种鉴定结果都为莲子草假隔链格孢。     

NYS-4菌株发酵液抑菌活性成分的分离及初步结构鉴定

NYS-4菌株是从秦岭地区土壤中分离到的一株放线菌。采用管碟法及抑制菌丝生长速率法测定了NYS-4菌株发酵液对多种病原细菌和真菌的抑菌活性。结果表明:NYS-4菌株发酵液对白菜软腐病菌 Erwinia carotovora var.、猕猴桃溃疡病菌 Kiwi ulcer disease germs 和枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 3种病原细菌具有较强的抑菌活性;对西瓜枯萎病菌 Fusarium oxysporum f.sp .Niveum 、烟草赤星病菌 Alternaria alternate 、油菜菌核病菌 Sclerotinia sclerotiorum 等8种病原真菌菌丝生长亦具有较强的抑制作用。采用离子交换树脂吸附、凝胶柱层析、反相高效液相色谱等方法,结合高效液相色谱-质谱联用(HPLC-ESI-MS/MS)技术,对NYS-4菌株发酵液的活性次生代谢物进行了分离和鉴定,从中分离鉴定出14个链丝菌素(streptothticin)类化合物,其中, N -乙酰化链丝菌素A、 N -乙酰化链丝菌素B、 N -乙酰化链丝菌素B酸和链丝菌素B酸经初步鉴定为新化合物。     

进境大麦中病原真菌的分离与鉴定

对来源于乌克兰、法国和加拿大的大麦所携带的病原真菌进行了分离,并通过形态学观察和分子生物学手段对分离物进行了鉴定。共分离出51个真菌菌株,经鉴定,共有13个菌种,其中检疫性真菌1种,为麦类壳多胞斑点病菌（Stagonospora avenae）;非检疫性真菌12种。侵染链格孢菌（Alternaria infectoria）的分离率最高,达40%,其次是互隔链格孢菌（Alternaria alternata）、大麦网斑病菌（Pyrenophora teres）、麦根腐平脐孺孢菌（Bipolaris sorokiniana）、梨孢镰刀菌（Fusarium poae）、大麦黑变病菌（Cladosporium herbarum）等。该鉴定结果对海关工作人员开展大麦真菌病害的检疫鉴定,防止检疫性有害生物传入,保护我国农林经济生产安全与生态安全具有重要意义。     

一株罗汉松内生真菌及其活性代谢产物

植物内生真菌能代谢产生多种生物活性物质,本研究从浙江建德千年古树罗汉松 Podocarpus macrophyllus中分离获得1株具有抗菌活性的菌株ZJDH255。通过形态和ITS rDNA序列分析,鉴定为稻黑孢霉Nigrospora oryzae。抑菌活性测试表明,菌株ZJDH255发酵粗提物对植物病原真菌灰葡萄孢Botrytis cinerea和瓜类炭疽菌Colletotrichum orbiculare具有较强抑制活性。采用正相硅胶和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20进行柱层析从发酵粗提物中分离获得3个具抗真菌活性的化合物,通过质谱和核磁共振波谱技术将其结构鉴定为蜂蜜曲菌素mellein、灰黄霉素griseofulvin和去氯灰黄霉素dechlorogriseofulvin。     

大豆根瘤菌抗性菌株的筛选及鉴定

从陕西西安、杨凌两地采摘的大豆根瘤中分离出32株菌,采用形态学方法筛选出11株菌进行实验.对供试菌株进行了5种有机试剂的抗性筛选、5种病原真菌拮抗性筛选,得到YR3和YR6两株优势菌株,进行分子生物学鉴定.结果表明:菌株XR3,YR3,YR6,YR7对二甲苯、苯酚、丙酮、丙烯酰胺、氟磺胺草醚抗药性较强;YR3,YR6两株菌对病原真菌拮抗性较强,生理生化研究和16S rDNA鉴定最后确定,菌株YR3应为Rhizobium leguminosarum U29386,菌株YR6应为Sinorhizobium americanum AF506513.     

美国进境大豆北方茎溃疡病菌的分离与鉴定

在对美国进境大豆检疫过程中,对大豆籽粒和夹带茎秆进行病原真菌的分离培养,使用形态学和分子生物学相结合的方法对可疑菌株进行鉴定,确定该菌为Diaporthe phaseolorum(Cke.&; Ell.)Sacc.var.caulivora Athow &; Caldwell。该病原菌是进境植物检疫潜在危险性病原真菌,在国内属首次截获。     

松阿扁叶蜂越冬期感病幼虫病原菌的分离鉴定及林间应用研究

实地调查了徂徕山林场松阿扁叶蜂越冬期幼虫感病死亡情况,并对引起幼虫感病死亡的致病菌分离纯化,进行了形态鉴定和分子鉴定.结果 表明,松阿扁叶蜂越冬感病幼虫在自然状态下感病致死率可达8.9％～21.3％,其病原分离物可分为真菌菌株和细菌菌株两大类.其中,真菌感染致死率为67.8％,细菌感染致死率为32.2％.从松阿扁叶蜂死...     

生防菌株BL-21的鉴定及其活性产物

为了明确生防菌株BL-21的分类地位和发酵液中的有效成分,对其进行了鉴定,并对其发酵液的抑菌谱和稳定性进行了测定。结果表明,该菌株为侧孢芽孢杆菌Bacillus laterosporus;其发酵液对全部供试植物病原真菌均有抗菌活性;发酵液中的抗菌活性物质对热和蛋白酶敏感,100℃10min、酶解37℃120min活性丧失;从菌株BL-21的发酵液中分离得到四种抗菌物质,均具有抗革兰氏阳性菌的活性,其中A组分和B组分还对植物病原真菌有抑制作用。     

稻瘟病标样中分离真菌的分析和鉴定

 通过分离稻瘟病标样中的病原真菌,回接稻瘟病菌普感的水稻品种—丽江新团黑谷,得到多个不能引发稻瘟病的菌株。随机选取2个致病的分离菌株和4个不致病的分离菌株,以稻瘟病菌Guy11为对照,观察它们的菌落形态和色泽、分生孢子形态和大小、分生孢子梗形态等生物学特性,发现6个分离菌株与Guy11的形态均较为相近。附着胞形成试验发现,不致病的分离菌株在疏水表面不能形成附着胞,但外源添加cAMP可使部分孢子形成附着胞。PCR扩增分离菌株的ITS、β-tubulin、actin和calmodulin等序列,测序并根据比对结果绘制相应的系统发育树,鉴定表明分离的2个致病菌株9-1、214属于Magnaporthe oryzae;4个不致病菌株18-1、18-2、122和132为梨孢属真菌Pyricularia。不致病菌株的发现和鉴定可为稻瘟病菌侵染机制研究和稻瘟病防治奠定基础。     

臂形草内生真菌HND5的GFP标记及其抑菌作用

臂形草Brachiaria brizantha内生真菌HND5及其产生的挥发性气体对多种植物病原真菌均有拮抗作用。本研究通过原生质体转化将绿色荧光蛋白（GFP）表达载体质粒pPKNTG转入HND5菌株中,获得了带绿色荧光且遗传稳定的转化子;PCR鉴定结果表明绿色荧光与外源质粒的插入相关。随机选取7个荧光转化子进行拮抗活性评价,发现其中5个转化子及其产生的挥发性气体对多主棒孢Corynespora cassiicola的拮抗活性与野生型菌株HND5相当。该结果为深入研究HND5菌株内生性及生防作用机理奠定了基础。     

除虫菊内生真菌Y2菌株的分离鉴定及其发酵产物抑菌活性初步研究

在对从除虫菊中分离到的内生真菌进行抑菌活性系统筛选的基础上,对其中活性较高的Y2菌株进行了初步的鉴定和活性物质的分离。经形态学初步鉴定该菌株为镰孢属真菌Fusarium sp.,其发酵液粗提物高抑菌活性馏分集中在丙酮、乙酸乙酯等中等极性馏分段。Y2菌株发酵液10倍稀释液对玉米大斑病菌Exserohilum turcicum等6种供试植物病原真菌菌丝生长的抑制率在80.41% ~93.26%之间,其5倍稀释液对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea和苹果炭疽病菌Glomerella cingulata孢子萌发的抑制率均大于80%。活体生测结果表明,该发酵液对番茄灰霉病和黄瓜霜霉病的保护效果大于50%,治疗效果不明显。     

中国稗草病原真菌对稗草及水稻的致病性

从稗草病叶上分离到８种病原真菌,它们是：链格孢、棒弯孢、月弯孢、画眉草弯孢、橙黄树座霉、紫附球菌、Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｓｃｈｏｅｍａｋｅｒ和尖角突脐孢。前４种病原菌对水稻有致病作用。在对水稻无致病作用的４种病原菌中,橙黄树座霉、紫附球菌和Ｂ．ｓｃｈｏｅｍａｋｅｒ对稗草的致病力弱,而尖角突脐孢对４．５叶期以下的稗草有极强的致病作用。寄主范围测定表明尖角突脐孢除了轻度侵染玉米幼苗,对其它主要作物如水稻、小麦、大豆、棉花、谷子、豌豆、芸豆、向日葵、芝麻、大麻无致病作用。本研究结果表明尖角突脐孢在我国可作为微生物除稗剂的候选菌