鸡传染性喉气管炎病毒的荧光抗体检测

建立了一种鸡传染性喉气管炎(ILT)的荧光抗体检测技术，用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体，对15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和10份健康鸡的气管分泌物进行了检测，并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示，人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达100％，ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为0；该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高。     

传染性支气管炎病毒(M41株)HI试验抗原的特异性和敏感性试验

采用本研究室制备的3批传染性支气管炎病毒(IBV,M41株)HI试验抗原,分别对100份和80份不同鸡血清进行IBV HI抗体检测,同时用IBV ELISA抗体检测试剂盒进行检测,比较两种不同方法检测的特异性和敏感性。结果显示,特异性试验中80份SPF鸡血清,自制抗原检测均为阴性,IBV ELISA检测79份为阴性,10份其他鸡病血清,两种方法检测9份均为阴性,10份IBV阳性血清两种方法检测均为阳性;敏感性试验中,74份已知IB疫苗免疫或IBV M41株感染鸡血清IBV HI检测72份为阳性,阳性检出率为97.3%(72/74),IBV ELISA检测74份均为阳性,阳性检出率为100%(74/74),SPF鸡血清及其他鸡病血清,两种方法检测均为阴性,两种检测方法总符合率为97.5%,差异不显著(P0.05)。试验结果证明,本研究室自制抗原具有良好的特异性,特异性为100%,抗原同时具有良好的敏感性,但IBV ELISA方法的敏感性要高于IBV HI方法。     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

Dot－ELISA检测兔血清中兔轮状病毒抗体方法的建立

应用生长良好的第２４～４３代ＭＡ１０４传代细胞接种兔轮状病毒（ＬａＲＶ），待出现９０％以上细胞脱落时收获病毒液．制作纯化抗原。用混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体．制备检测ＬａＲＶ抗体的快速诊断膜，进行Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验，检查１０只人工感染兔血清．于感染后第１０天出现阳性反应，２１天全部阳转。应用该方法做了ＬａＲＶ阳性血清阻断试验、其它病的兔血清排除试验，对３８只健康兔血清的检查均为阴性。利用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对１３１６份兔血清的检查中．群养兔阳性率８３．５９％，散养兔为２７．５％。试验结果证明本法特异性强、敏感性高，操作简便、快速．适于现地ＬａＲＶ免疫监测及流行病学调查。     

鸡传染性喉气管炎兔源高免血清的制备及其双向琼脂扩散试验

用不同方法纯化 IL T病毒抗原免疫实验家兔 ,收集免疫血清做双向琼脂扩散试验 ,并进行特异性、敏感性和田间试验。结果用化学法纯化的 IL T病毒抗原免疫家兔可获得高效价 IL T免疫血清 ,以此血清做双向琼脂扩散试验 ,检查 15羽人工感染 IL T发病鸡喉咽部分泌物和 10羽健康鸡分泌物 ,结果发病鸡阳性检出率 10 0 % ,健康鸡阳性检出率为 0 ,临床症状出现 1周内阳性率10 0 % ,自然发病鸡群阳性率 80 .6 %。表明用化学法纯化的 IL T病毒抗原免疫家兔可获得高效价血清 ,以此建立的双向琼脂扩散试验是一种特异性强、灵敏度高的 IL T病毒抗原检测方法     

应用ELISA双抗体夹心法检测传染性法氏囊病免疫器官病毒抗原分布动态

利用ＩＢＤＶ高免血清ＩｇＧ作为包被抗体，成功地建立了双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ，对人工感染雏鸡免疫器官抗原动态分布进行了检测。结果表明，不同毒株感染雏鸡免疫器官病毒抗原含量不一致，持续时间也有差异。采用本方法共检测ＩＢＤ阳性样品２７５份，检出率为１００％，检测对照阴性样品２５份，结果均为阴性，比ＡＧＰ法检出率高４０％左右，灵敏度高１００～２００倍。试验证明双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ可用于组织抗原分布的检测，并且该方法具有特异性、高度敏感性，稳定性、快速性等优点，是一种实用的组织病毒检测方法。     

应用Dot-ELISA检测家兔魏氏梭菌抗毒素的研究

将A型魏氏梭菌培养液经蔡氏滤器过滤,硫酸铵沉淀,再经Sephadex G-200柱层析,收集毒素峰洗脱液,浓缩后制备A型魏氏梭菌毒素纯化抗原。用混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,制备检测兔魏氏梭菌抗毒素的快速诊断膜。用Dot-ELISA检查6只魏氏梭菌高免兔的血清均呈阳性反应,对13只兔轮状病毒(LaRV)阳性血清、13只兔大肠杆菌(E.Coli)阳性血清、15只兔巴氏菌感染兔、16只波氏菌感染兔、9只葡萄球菌感染兔及27份健康兔血清检查均为阴性。A型魏氏梭菌阳性血清均可被特异性抗原所阻断。Dot-ELISA与SPA-ELISA对比差异不显著(P>0.05),两者阴、阳性符合率为89.06％。试验结果证明,本方法特异性强、敏感性高、操作简便、快速。为该病的监测净化提供了一种准确检验方法。     

检测兔抗大肠杆菌血清抗体的Dot-ELISA方法的建立

用兔大肠杆菌（ＲＣ８９１１２４）制备包被抗原，建立了检测兔抗大肠杆菌血清抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法，抗原最佳稀释度为１∶５，待检血清最佳稀释度为１∶１０，酶标记山羊抗兔ＩｇＧ最佳稀释度为１∶４０００。对３０只大肠杆菌菌苗免疫兔进行检测，免疫后８天血清抗体即全部阳转，敏感性为１００％。分别对２３只兔轮状病毒、２０只病毒性出血症、２２只巴氏杆菌、７只波氏杆菌、１８只链球菌、２１只葡萄球菌感染兔进行血清检测，大多数均呈阴性反应，其特异性为９３．７％；２０只健康兔血清，均为阴性。对现地采集的４５２份兔血清进行检测，污染率平均为４８．２％。试验证明，本方法敏感性高、特异性好、操作简便快速、具有良好的重复性，适用于现地检疫。     

免疫荧光技术快速检测鸡轮状病毒的研究

用分离的轮状病毒与福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂免疫家兔制备高免血清，分离球蛋白，用荧光素标记，建立荧光抗体快速诊断鸡轮状病毒技术。阴性试验、阳性试验、类症试验表明，建立的荧光抗体诊断技术特异性强、敏感性高，与新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒、大肠杆菌不发生交叉反应。人工感染试验结果表明，20日龄SPF鸡感染轮状病毒后12h，肠粘膜深层涂片可出现较强荧光。自然感染检测结果表明，荧光抗体诊断结果与病毒的分离鉴定结果一致，符合率达100％。     

鸡传染性法氏囊病快速诊断方法的研究

本文报道了一种既可以检测ＩＢＤ囊毒抗原，又可以检测ＩＢＤ抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗体夹心法。用本方法检测ＩＢＤ阳性法氏囊样品１２２份，结果检出阳性１２０份，符合率为９８．４％。检测阴性法氏羹样品８８份，均为阴性。本方法与琼脂扩散试验方法比较，共检测人工感染发病的病死鸡法氏囊９７份，结果琼脂扩散检出阳性法氏囊４９份（５０．５１％），阴性４８份（４９．４８％），而用本方法检测结果，全为阳性，检出阳性率为１００％，比ＡＧＰ法检出率高４９．４８％。检测高免蛋黄液的抗体。１６个样品（以２倍递增进行稀释），结果本方法比琼脂扩散试验高１～２个滴度。试验证明该方法特异、敏感，并且快速简便，试验在室温条件下进行，不需要任何仪器设备，用肉眼观察颜色的变化就可判断试验结果，试验反应时间仅需１０分钟左右。     

免疫层析试纸条(ICS)检测禽流感抗体

以纯化的禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）核蛋白作为捕捉抗原，金标兔抗鸡抗体作为金标二抗，建立检测禽流感血清抗体的胶体金免疫层析试纸条（immunochromatographic strip, ICS）。对标准阳性血清不同滴度进行检测，ICS试验的敏感性高于琼脂扩散试验（AGP）。特异性试验证实，禽流感的ICS试验与新城疫（ND）、传染性支气管炎（IBV）、鸡传染性法氏囊病（IBD）及减蛋综合症（EDS-76）均无交叉反应。同时，用ICS试验和HI试验检测105份鸡血清，两者具有较好的符合性。结果认为：禽流感ICS具有快速简便、特异、灵敏等优点。     

酶标单抗阻断ELISA检测鸡白痢和鸡伤寒抗体

以辣根过氧化物酶标记的沙门氏菌O9单抗3-47-0与包被的鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种抗体阻断EL ISA以检测鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌感染。该方法基于待检血清样品抑制酶标单抗与脂多糖的结合,以检测鸡白痢和鸡伤寒特异性抗体。对72份已知鸡白痢阳性血清(抑制率为(98.5±4.0)%)、54份已知鸡白痢阴性血清(抑制率为(15.3±8.0)%)、42份SPF鸡血清(抑制率为(0.8±7.2)%)检测的结果表明,该方法具有很强的区分能力。在人工感染试验中,从第2周开始,该方法能从全部鸡只中检测到特异性抗体,比全血玻板凝集试验(PAT)早1周时间。对344份种鸡血清的检测结果表明,单抗阻断EL ISA比PAT特异性好、敏感性高。另外,该方法也能检测出与鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌有共同抗原的沙门氏菌感染产生的抗体。     

乳胶凝集试验检测鸡新城疫病毒血清抗体的研究

用硫酸铵沉淀、透析浓缩的鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）抗原致敏乳胶,然后所鸡新城疫阳性血清进行方阵滴定,选择出最佳致敏条件并制成新城疫病毒乳胶抗原,由此建立超乳胶凝集试验（ＬＡＴ）,用来检测新城疫血清抗体;用所建立的乳胶凝集试验（ＬＡＴ）和血凝抑制试验（ＨＩ）同步检测６９份鸡血清,结果乳胶凝集试验阳性６２份,阴性７份;血凝抑制试验阳性６６份,阴性３份,两者的总符合率为９４．２％（６５／６９）,且两者的检出率基本一致。结果表明,乳胶凝集试验具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强且可用于现场检测等优点,是一种适合基层单位用来检测鸡新城疫病毒血清抗体的新方法。     

胰酶分散抗原间接荧光抗体法检测鸡肾型传染性支气管炎病毒及抗体的研究

本文采用胰酶分散法制备抗原，建立了间接荧光抗体法。用此法对人工感染鸡、人工感染鸡胚及自然发病鸡的抗原进行了测定，结果，人工感染鸡肾脏于７２～１６８ｈ１００％检测到特异性荧光，其余时间部分鸡检出特异性荧光；人工感染后病死鸡肾脏均１００％检测到特异性荧光；人工感染鸡胚于４８～１２０ｈ１００％检测到特异性荧光，其余时间部分检出特异性荧光；１７８例自然发病病例中检出抗原阳性病例１５３例。对抗原检测的结果与冰冻切片制备抗原建立的间接荧光抗体法完全一致。用胰酶分散法制备抗原，对已知阳性血清和待检血清进行检测，检测结果与用冰冻切片法制备抗原检测结果一致。该法将检测程序简化，检测时间明显缩短，适合于临诊应用及对鸡群进行抗体监测     

应用间接ELISA检测鸡病毒性关节炎抗体的研究

用本试验建立的抗鸡病毒性关节炎(AVA)抗体的间接 ELISA 方法检测了实验感染 AVA 病毒(AVAV)的鸡血清、自然感染鸡血清及 IBD,ND 和 MD 病鸡血清,证明其具有较高特异性.通过对鸡实验感染 AVAV 后不同时期的检测表明.间接 ELISA 可在感染后6天检出血清特异性抗体,且不同时期检出率均高于 AGID 法,并可在2小时内报告试验结果.适用于 AVAV 抗体的常规检测.用该法对来自南京、海宁、长春等地鸡场的162份血清进行检测,阳性率为10.5%.     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

免疫扩散法诊断家兔溶血性链球菌病的研究

用分离自家兔的溶血性链球菌制备琼扩抗原，以免疫扩散法对人工感染溶血性链球菌的免血清和现地兔血清进行检测，对前者检出率为１００％，对现地暴发本病的兔血清检出数为１７／３０．     

应用斑点-ELISA检测猪伪狂犬病

应用混合纤维素酯微孔滤膜作固相支持物进行斑点-ELISA(Dot-ELISA),对1337头份猪血清作了猪伪狂犬病血清抗体的检测。应用猪伪狂犬病高免血清和自然感染阳性血清作阻断试验,证明了本实验的特异性。猪瘟高免血清、猪细小病毒阳性血清、猪轮状病毒阳性血清、猪流行性腹泻阳性血清及未注过苗的健康猪血清均为阴性。与常规的病毒血清中和试验(NT)进行比较,Dot-ELISA阳性检出率为28.19％(53/188),NT阳性检出率为20.74％(39/188),前者的敏感性显著地高于后者。本法的优点是操作简便、省时、快速,不需特殊仪器设备,可用肉眼判定,诊断膜与试验标本膜可长期保存,适于基层单位的诊断和流行病学调查。     

ELISA检测鸡新城疫病毒特异性IgM抗体的研究

以新城疫病毒单克隆抗体包被板,用10％小牛血清-PBS封闭后,捕获尿囊液中的新城疫病毒作固相抗原.在此板上应用酶标抗鸡IgM单克隆抗体进行间接ELISA试验检侧鸡血清中新城疫病毒的特异性IgM抗体.试验证明该方法特异性强、敏惑性高.兔抗新城疫病毒阳性血清可特异性阻断反应,将新城疫病IgM阳性血清用2-ME处理可使ELISA反应呈阴性,与禽源多杀性巴氏杆菌鸡IgM阳性血清、鸡传染性支气管炎病毒IgM阳性血清无交叉反应.该试验可检测到La Sota免疫后3天鸡血清中的特异性IgM,对鸡新城疫病毒IgM阳性血清的检测效价可达1:320以上,并可检测到临床新城疫病鸡血清中的特异性IgM抗体.     

鸡马立克氏病(MD)的特异性诊断 Ⅱ、使用皮肤抗原作免疫扩散试验诊断MD的研究

使用从鸡马立克氏病病毒(MDV)实验感染鸡的主要羽毛区的皮肤制备的 MD 沉淀抗原,共检查了1,495只鸡。其中未感染 MDV 的健康鸡104只(全部阴性),实验感染 MDV 的鸡127只(72只阳性,占56.7%),火鸡疱疹病毒(HVT)免疫的鸡81只(全部阴性),实验感染鸡成髓细胞增生性白血病病毒(AMV)的鸡67只(全部阴性),实验感染鸡新城疫(ND)、传染性支气管炎(IB)和传染性喉气管炎(ILT)病毒的鸡各60只(全部阴性),未见 MD发病鸡场的鸡624只(119只阳性,占19.1%),MD 发病鸡场的鸡312只(168只阳性,占53.8%)。另外,还与英国的 MD 沉淀抗原对84份被检血清作了比较试验,皮肤抗原的反应强度较弱,但检出率与英国抗原完全一致。试验证明,用 MDV 实验感染鸡的皮肤制备的 MD 沉淀抗原检查被检鸡的血清对 MD 的反应是特异性的。这种抗原不仅具有实际应用于 MD 诊断的价值,而且也可以应用于 MD 的流行病学调查。