大肠埃希氏菌血清型鉴定及黏着素抗原的测定

对95株已鉴定的大肠埃希氏菌，采用玻板凝集法进行了O抗原血清型的鉴定，确定46株为O抗原血清型。同时采用免疫荧光技术和D-甘露糖抗血凝反应（MRHA）及其抑制试验测定，确定为O抗原血清型的大肠埃希氏菌的黏着素抗原，其中23株具有K88、K99、987P3种黏着素抗原。结果表明，同时采用上述2种方法筛选大肠埃希氏菌的黏着素抗原，其准确性和灵敏性更高。     

氟苯尼考与氯霉素对鸡大肠杆菌病的疗效比较

以试管肉汤2倍稀释法测定氟苯尼考及氯霉素对鸡大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度（MIC），然后对实验性鸡大肠杆菌病病鸡进行治疗试验，内服3d,2次／d。结果表明，氟苯尼考及氯霉素对鸡大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度分别是3.2μg/mL和1.6μg/mL；以氟苯尼考40mg/kg和氯霉素40mg/kg体重给鸡（每组40只）内服后，对大肠杆菌病的治愈率分别为77．5％和55．0％,而感染对照组的死亡率为95．0％。     

布劳恩脂蛋白对大肠埃希氏菌感染导致的小鼠体内细胞因子分泌及死亡的调节作用

细菌外膜成分布劳恩脂蛋白(Braun lipoprotein,BLP)在调控大肠埃希氏菌感染导致的宿主炎症反应过程中发挥的具体作用尚不清楚。该研究分析了野生型大肠埃希氏菌(BLP表达阳性)、大肠埃希氏菌JE5505(BLP表达阴性)和大肠埃希氏菌JE5505与BLP联合刺激小鼠后,体内促炎性细胞因子(TNF-α和IL-1β)、抗炎因子(IL-10)和趋化因子(RANTES)分泌的情况,以及小鼠的存活率和脏器的损伤水平。结果表明,大肠埃希氏菌JE5505组感染小鼠后导致死亡的速度比野生型大肠埃希氏菌组和大肠埃希氏菌JE5505与BLP联合刺激组更迅速;JE5505与BLP联合刺激组在感染20 h后小鼠不再出现死亡。在大肠埃希氏菌JE5505感染的小鼠血清、肝脏和肺脏中,促炎性细胞因子和趋化因子的分泌水平显著高于、抗炎细胞因子显著低于野生型大肠埃希氏菌组和大肠埃希氏菌JE5505与BLP联合刺激组的小鼠(P<0.01)。此外,BLP的存在可下调大肠埃希氏菌感染导致小鼠脏器中组织损伤标志物HMGB1和HABP2的蛋白表达(P<0.05)。说明细菌外膜成分BLP耐受可能通过调节炎症介质的产生,进而对细菌感染导致宿主脏器损伤和炎症反应发挥调控和保护作用,从而避免小鼠在被大肠埃希氏菌感染后出现快速死亡的现象。     

畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的LAMP检测及其耐药性分析

为深入了解畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的流行及耐药状况,采用建立的畜禽粪便中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的环介导等温扩增技术（LAMP）检测方法对山东省内牛粪污、猪粪、鸡粪、鸭粪中的金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌进行检测,进而对检测阳性样品进行分离,并对药敏试验中多重耐药性菌株进行耐药基因预测。结果表明,LAMP方法检测畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌与国家标准方法检测结果符合率为100%,重复性好,特异性高。从80份畜禽粪污样品中分离到的3株金黄色葡萄球菌均对青霉素耐药;34株大肠埃希氏菌对氟苯尼考、利福平的耐药比例高于50%,高于25%以上的还有氨苄西林、四环素、多西环素、磺胺异噁唑、头孢噻吩和头孢噻呋;耐药基因预测结果显示,鸡粪、鸭粪、牛粪和猪粪中的4株大肠埃希氏菌分别携带10、8、20和15种耐药基因;鸡粪中的1株金黄色葡萄球菌携带11种耐药基因。说明山东地区畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌耐药状况严峻,菌株普遍多重耐药,且携带多种耐药基因。     

中草药消除大肠埃希氏菌耐药性及耐药质粒的研究

在系统鉴定和药敏试验的基础上,对９株大肠埃希氏菌多重耐药菌株进行而药基因定位,结果表明有４株菌株的氨苄青霉素基因位于质粒上。通过对中草药煎煮、水蒸气蒸馏等方法提取其有效成分,对耐药大肠埃希氏菌进行耐药性消除试验,结果发展大蒜油等对大肠埃希氏菌氨苄青霉素耐药性有消除作用;鱼腥草、紫草等对大肠埃希氏菌庆大霉素而药性及耐药质粒有消除作用,消除率分别为２．９８％和４．２０％。     

牛源大肠埃希氏菌肌尾噬菌体的鉴定与特性研究

为了使大肠埃希氏菌噬菌体能在治疗大肠埃希氏菌所致疾病等方面发挥更好的作用,以牛源子宫内膜炎型大肠埃希氏菌为宿主,经双层琼脂纯化法从污水中分离到毒性噬菌体EP-CE。电镜下见EP-CE属肌尾病毒科,可被限制性内切酶DraⅠ切开,估算其双链DNA基因组大于50 kb;生物学特性研究表明EP-CE对40℃～55℃或pH 7～10的环境有一定耐受力;最佳MOI为0.01,潜伏期约30 min,爆发期约90 min,平均爆发量为26 PFU/cell;在与宿主菌共培养初始5 h内抗菌活性较强。     

整合子参与的大肠埃希氏菌多重耐药机制的研究

细菌耐药是一个严重的世界性难题。目前大肠埃希氏菌呈现多重耐药趋势,给临床抗感染治疗带来困难。大肠埃希氏菌染色体中存在多重耐药操纵子(maroperon),该操纵子编码的蛋白产物MarA可通过对数个远程基因的调控,影响大肠埃希氏菌细胞膜通透性、主动外排泵系统,形成大肠埃希氏菌     

应用间接ELISA检测微小隐孢子虫抗体的研究

以在大肠埃希氏菌中表达的微小隐孢子虫(Cryptosporidum parvum)子孢子表面抗原CPl5为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA。试验筛选出的最佳反应条件为：大肠埃希氏菌CPl5抗原包被量为1μg/孔，用100mL／L的兔血清进行封闭，以正常大肠埃希氏菌裂解上清液稀释待检血清。试验结果表明，应用CPl5重组蛋白作为诊断微小隐孢子虫抗体的抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

新疆部分地区动物源CTX-M大肠埃希氏菌的多重耐药性分析

为了解新疆动物源产CTX-M大肠埃希氏菌携带的CTX-M基因亚型和多重耐药性的特点，采用PCR方法检测新疆猪、牛、羊、骆驼、马、鸡、鹅、鸽、犬和猫源产CTX-M大肠埃希氏菌的CTX-M基因亚型(bla_CTX-M-1、bla_CTX-M-2和bla_CTX-M-9亚群),利用K-B纸片法对产CTX-M大肠埃希氏菌进行药物敏感性检测。结果显示，在148株产CTX-M大肠埃希氏菌中，bla_CTX-M-1亚群的检出率最高为76.35%(113/148),bla_CTX-M-9亚群次之为20.27%(30/148),2.70%(4/148)的菌株同时携带bla_CTX-M-1和bla_CTX-M-9亚群，0.68%(1/148)不可分型，未检出bla_CTX-M-2亚群。药敏试验结果显示，148株产CTX-M大肠埃希氏菌中对氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林、四环素、头孢噻肟和头孢曲松的耐药率在93.24%～99.32%,对环丙沙星、庆大...     

原场鸡大肠埃希氏菌多价灭活苗的制备及应用效果观察

用从豫北地区一家大型个体养鸡场分离到的致鸡大肠埃希氏菌病8个血清型菌株O1、O2、O78、O36、O11、O88和O50以及未知菌株的培养物,经0.4%的福尔马林灭活48h,制成原场大肠埃希氏菌多价灭活苗,含菌量为150亿/ml。分别免疫批10日龄鸡只,剂量0.2ml/只,使鸡只获得对原场大肠埃希氏菌株比较高的免疫力。该灭活苗的安全性和免疫原性良好,对同型菌株攻毒后对鸡只的保护率达90%以上,对鸡大肠埃希氏菌病有较强的预防作用。     

腹泻仔猪肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性研究

为探明仔猪细菌性腹泻肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌流行的血清型、耐药表型及耐药基因型,本试验采集了贵州省5个地（州）市7个规模化养猪场的128份腹泻仔猪肠道样本,并对采集的样本进行了大肠埃希氏菌和沙门氏菌分离与鉴定,通过动物试验鉴定菌株的致病性,利用血清学方法鉴定其血清型,并通过药敏纸片法对主要致病菌进行耐药性研究,采用PCR技术检测各致病菌株耐药相关基因,分析细菌耐药表型和耐药基因型相关性。结果显示,本研究共分离鉴定到78株致病性大肠埃希氏菌与21株沙门氏菌,致病性大肠埃希氏菌血清型以O138、O87为主,沙门氏菌血清型以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌居多;药敏试验结果表明,本试验分离到的78株致病性大肠埃希氏菌对β-内酰胺类药物耐药率达80%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均超过40%,分离鉴定的21株沙门氏菌对氨基糖苷类药物耐药率达50%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均达20%以上;本试验分离鉴定的致病性大肠埃希氏菌共检出12种耐药相关基因,沙门氏菌共检出10种耐药相关基因,两种细菌耐药基因型与耐药表型符合率均达60%以上,且均为多重耐药。本研究为仔猪腹泻的综合防控提供了理论依据。     

检测987p^＋肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立

以987p菌毛结构基因保守序列为靶序列，设计合成了1对可扩增459bp目的片段的引物，建立了检测肠毒素性大肠埃希氏菌987p菌毛基因的PCR方法。该方法对K88^ ( 为菌毛阳性）、K99^ 、F41^ 参考菌株和链球菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的检测结果均为阴性；该方法的敏感度可达10^2CFU，对20株腹泻仔猪粪例分离物进行检测，有1株为阳性，与血清学检测的结果一致。结果表明，此方法特异性和敏感性都很高，可用于临床987p肠毒素性大肠埃希氏菌病的快速诊断和流行病学调查。     

致病性大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱的建立

建立了致病性大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱。采用脉冲场凝胶电泳技术分离细菌DNA,EB染色,Info Quest FP聚类分析软件分析,结果获得了《中国兽医菌种目录》中收录的127株致病性大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱,其中CVCC212与CVCC213等12对大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱相似率在85%以上。实验通过建立127株致病性大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱,丰富了致病性大肠埃希氏菌背景资料,为进一步分析基因分型与致病性之间的关系提供了实验数据。     

腹泻兔病原菌的分离鉴定及耐药性检测

为了确定娄底地区兔腹泻的病原菌、致病性及耐药性,对采集的203份患腹泻的兔肛拭子、粪便进行病原菌分离鉴定,结果分离得到了30株大肠埃希氏菌、20株铜绿假单胞菌、17株产气荚膜梭菌、15株金黄色葡萄球菌;人工接种小鼠试验、KB药敏纸片法分别检测病原菌的致病性及耐药性,结果表明分离得到20株大肠埃希氏菌、15株铜绿假单胞菌...     

应用质粒图谱分析大肠埃希氏菌毒力差异的研究

对1株无致病性鸡源大肠埃希氏菌（O21）和5株已知毒力强弱的大肠埃希氏菌（O2、O1、X2、148和O78）进行质粒图谱（PP）分析。结果表明这6个菌株属于不同的6种质粒谱型，其毒力的强弱与其所携带质粒的数量和大小有关，但不同毒力株间也有少数几条相同大小的谱带，试验结果表明PP图谱法可作为大肠埃希氏菌分型和鉴别其毒力的间接分子生物学方法。     

伪狂犬病病毒闽A株糖蛋白gD基因去信号肽片段在大肠埃希氏菌中的表达

应用PCR方法从包含伪狂犬病病毒（PRV）Fa株糖蛋白gD基因的重组质粒pB13中扩增出糖蛋白gD基因去信号肽片段，将其克隆到大肠埃希氏菌表达载体pThiohisA中。测序结果表明，糖蛋白gD基因去信号肽片段长1155bp，与PRVFa株糖蛋白gD基因完全一致。经1mmol／L IPTG诱导后，重组质粒pThiohisA-gD在大肠埃希氏 菌XL1-blue、Top10、DE3和DH5a中均得到表达，其中在宿主菌XL 1-blue中表达量最高。Western-blotting结果显示，大肠埃希氏菌XL1-blue表达的糖蛋白gD具有免疫原性。     

鸡源大肠埃希氏菌流行病学调查及耐药性分析

为了解广东韶关地区鸡源大肠埃希氏菌的流行病学及其耐药性特点,本研究通过2022年对采集自广东韶关地区41个规模养鸡场和28个土鸡散养场的鸡喉头、肛门粪便、病死鸡的肝脏、心血、脾、肠道内容物共737份样品进行细菌分离纯化、病原菌的生化鉴定和药敏试验,研究广东韶关地区鸡源大肠埃希氏菌的流行病学及其耐药性特点。结果显示,541份样品分离到大肠埃希氏菌,检出率73.41%,总体泄殖腔大肠埃希氏菌检出率87.78%,咽喉部大肠埃希氏菌检出率58.24%,死鸡病料大肠埃希氏菌检出率78.38%,规模场大肠埃希氏菌检出率为73.72%,散养场大肠埃希氏菌检出率为73.01%。分离菌株普遍对阿奇霉素、头孢噻肟、阿米卡星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星敏感,对青霉素、氨苄西林、链霉素、卡那霉素、四环素、阿莫西林、氟苯尼考、泰乐菌素、林可霉素、克林霉素耐药,多重耐药比高达79.71%。规模场分离菌多重耐药比为97.56%,散养场多重耐药比为53.57%。本研究为广东韶关地区鸡源大肠杆菌病的防控提供了参考。     

番鸭O_(13)大肠杆菌和2型鸭疫里默氏菌混合感染的诊断

致病性大肠埃希氏菌(Escherichia coli)和鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer)是养鸭生产中最为常见的2种致病性细菌，它们在临床上多以原发或继发于其它疾病出现．有时则表现为二者的混合感染，对养鸭业的危害较大。对于禽类，致病性大肠埃希氏菌的血清型众多，鸭疫里默氏菌也存在多种血清型，二者的血清型之间存在交叉保护，     

牦牛ETEC灭活疫苗安全性与免疫效力试验

对本实验室制备的4批牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗进行了安全和免疫效力试验.结果表明,该疫苗对家兔和牦牛初次和再次倍量接种均是安全的,皮下和肌肉接种也是安全的.免疫效力试验结果表明,当免疫机体体内抗体效价达到1:128时,即可产生可靠的免疫力,抵抗牦牛大肠埃希氏菌的攻击.家兔对免疫攻毒保护率为80%,牦牛保护率为95%.说明牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗对于预防牦牛大肠埃希氏菌病安全有效.     

羔羊源产ESBLs与非产ESBLs大肠埃希氏菌耐药性差异比较及基因型分析

为了明确宁夏地区羔羊源大肠埃希氏菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与非产ESBLs大肠埃希氏菌的耐药性差异和相关基因携带情况差异,对实验室分离保存的87株羔羊源大肠埃希氏菌,采用ESBLs表型检测方法筛选产ESBLs的菌株和K-B纸片法进行药物敏感性试验,采用PCR法对分离株进行相关基因的检测。结果显示,87株大肠埃希氏菌中5株为产ESBLs菌株,检出率为5.75%。产ESBLs株对多数试验药物呈耐药性;而非产ESBLs菌株对多数试验药物敏感,仅对恩诺沙星、复方新诺明和红霉素耐药率超过50%。20种药物中,产ESBLs株大肠埃希氏菌对18种药物的耐药率极显著高于非产ESBLs菌株(P<0.01)。产ESBLs菌株携带blaCTX的阳性率极显著高于非产ESBLs菌株(P<0.01),产ESBLs菌株中的blaTEM和blaOXA基因的阳性率均高于非产ESBLs菌株,但差异不显著(P>0.05)。结果表明宁夏地区羔羊源大肠埃希氏菌产ESBLs菌株流行率低,产ESBLs菌株耐药性严重,且宁夏地区羔羊源ESBLs菌株优势基因型为blaCTX和blaTEM。