高温胁迫对小麦幼苗几个生理生化指标的影响

采用人工气候室控温,在大气相对湿度40%的条件下,以22℃为对照,在32,36,40℃的高温胁迫条件下,对烟农19二叶期小麦叶片内叶绿素含量、超氧化物岐化酶总活力、丙二醛含量和可溶性糖含量的变化规律进行了研究.结果表明:随着胁迫处理时间的延长,叶片内叶绿素含量迅速降低,且随胁迫温度的升高,叶绿素降解率增大;超氧化物歧化酶(SOD)活性及膜脂过氧化产物(MDA)含量呈现先上升后下降趋势;可溶性糖含量呈上升趋势,且随胁迫温度的升高,可溶性糖含量升高幅度呈上升趋势.这些变化可能是由于高温胁迫造成细胞内膜系统损害所致.     

土地整理中土壤肥力保持价值比较研究

土地整理不可避免地会对项目区的环境要素及其生态过程产生影响,基于生态服务价值理论,对邛崃市孔明乡土地整理项目区不同整理类型土壤肥力保持价值进行了比较研究,可为该地区土地整理决策、土地整理质量与效益评价等提供定量依据。结果表明,土壤肥力保持每公顷累积价值土地开发区为1.51万元,土地复垦区1.85万元,土地整理区0.49万元。土地复垦区积累价值率达到147.2%,远大于开发区和整理区,这一结果与复垦区土壤全部通过客土改造有关。土地整理后项目区土壤肥力保持总价值增加了733.88万元,其来源一是新增耕地面积,二是农地地力的提高。土壤肥力保持效费比分别为开发区0.05,复垦区0.09,整理区0.46,效益以土地整理区最高。说明以改善农业基础设施、提高地力为主要特征的土地整理类型投资少,土壤肥力保持效益高,值得提倡。     

NaCl 胁迫对芹菜生长、生理生化特性及品质的影响

通过研究NaCl胁迫对芹菜植株生长、生理生化特性以及品质的影响,以期为盐胁迫下芹菜品种的选用提供理论依据。选用西芹（京芹一号）、本芹（夏芹）和不同浓度NaCl（0,30,60,90,120 mmol／L）溶液为材料,通过盆栽试验,研究NaCl胁迫对芹菜植株生长、生理生化特性以及品质的影响。结果表明：NaCl胁迫可抑制芹菜的生长,株高、鲜质量、干质量随NaCl浓度的增加逐渐降低;芹菜叶片中的超氧化物歧化酶（ SOD）、过氧化氢酶（ CAT）活性及丙二酸（ MDA）、叶绿素含量均随着NaCl浓度的升高而升高,过氧化物酶（ POD）活性、可溶性糖含量随NaCl浓度升高而呈现先升高后降低的趋势;芹菜中Vc、纤维含量随NaCl浓度的升高而逐渐降低。盐胁迫对京芹一号生长、生理生化特性影响小于夏芹,京芹一号耐盐性大于夏芹。     

梭梭热激因子家族基因HaHsfA5的鉴定及其在高温胁迫记忆中的表达

植物能够对经历过的高温胁迫产生"胁迫记忆",从而更好地适应反复发生的高温胁迫。鉴定梭梭热激因子基因HaHsfA5序列和结构特征,分析其在梭梭幼苗高温胁迫记忆中的表达规律,对梭梭高温胁迫适应性研究有重要理论价值。本研究内容包括:以反转录PCR克隆HaHsfA5读码框全长序列;以在线生物信息学工具预测HaHsfA5的蛋白理化参数、蛋白结构域和基元;进行HaHsfA5的序列比对和进化树分析;以qRT-PCR分析HaHsfA5在高温胁迫记忆中的表达。生物信息分析显示HaHsfA5为分子量较小、不稳定、亲水的HSFs家族A亚族蛋白,与甜菜、菠菜、藜麦的Hsf A5有较近亲缘关系。qRT-PCR分析显示经过高温胁迫锻炼的梭梭幼苗在高温胁迫处理下HaHsfA5表达显著上调,而正常条件下生长的梭梭幼苗在高温胁迫处理下其表达并未显著上调。综合Ha HsfA5的结构特征和表达规律,提示HaHsfA5功能可能与梭梭幼苗的高温胁迫记忆有关。本研究为进一步分析Ha Hsf A5在梭梭幼苗高温胁迫记忆中的功能提供研究基础,对梭梭耐高温品系选育和耐逆机制研究可能具有推动作用。     

高温胁迫对化学感受蛋白在家蚕中肠与脂肪体中基因表达的影响

通过探讨高温胁迫对家蚕化学感受蛋白基因表达水平的影响,为家蚕高温耐受机理的阐明及耐高温品种选育奠定基础,本实验对BmCSPs基因序列进行聚类分析,并通过荧光定量PCR方法对高温胁迫不同时间后BmCSPs在中肠和脂肪体内的表达情况进行检测.实验结果表明,16个BmCSPs基因依据序列相似性主要聚为2个大类,其中BmCSP...     

一氧化碳(CO)在植物体内的生理生化作用研究进展

为了促进一氧化碳(CO)在植物生理生化方面的研究,本文归纳了CO在植物体中的生物合成途径,CO作为信号分子对植物各种生理功能的调控,以及CO与其他信号分子之间的相互作用。经过分析得出,CO在植物生物胁迫过程中的作用及其作用机制方面的研究还很少,因此,CO在这方面的研究将会成为今后的研究重点。     

木薯MeRSZ21a的克隆、生物信息学分析和表达模式分析

在非生物胁迫过程中,植物中SR蛋白(serine/arginine-rich proteins, SR)发挥着重要作用。本研究利用生物信息学分析方法,对木薯MeRSZ21a基因结构、理化性质、结构域、保守基序、系统进化等方面进行了分析,并分析MeRSZ21a在各组织中的表达,以及胁迫后其剪接模式和表达水平。我们之前的研究表明,木薯MeRSZ21a是SR蛋白家族中RSZ亚家族的成员之一。本研究结果表明MeRSZ21a基因全长为2 263 bp,编码160个氨基酸,蛋白大小为18 kD,属于亲水性碱基蛋白。MeRSZ21a含有RRM和zf-CCHC结构域,与野生大豆亲缘关系最近。在3个木薯品种‘W14’、‘Arg7’和‘Ku50’各组织中,MeRSZ21a在发育前期组织中表达量较低,在成熟的侧芽与叶组织器官中表达量较高。胁迫处理后,MeRSZ21a的转录本及表达量发生较大变化,其中叶片中转录本数均上升,并且对木薯进行不同温度(42℃,-3℃)胁迫处理后,根和叶中MeRSZ21a的表达水平显著性上调,表明在响应胁迫过程中,MeRSZ21a发挥着重要作用。这有助于进一步探索木薯MeRSZ21a在植物响应非生物胁迫中的功能。     

O型FMDV P1-2A基因与猪IFN-γ基因共表达质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达

为了构建O型FMDV P1-2A基因与猪IFN-γ基因共表达质粒并在BHK-21细胞中进行表达,本研究利用聚合酶链式反应(PCR)从阳性质粒pGEM-P12A克隆到P1-2A基因,将扩增产物纯化、双酶切后连接到pBudCE-IFN载体,构建重组质粒pBudCE-IFN-P1-2A.重组表达质粒鉴定后,在脂质体介导下转染BHK-21细胞,用RT-PCR和直接免疫荧光试验分别检测P1-2A 和IFN-γ在BHK-21细胞中的表达.RT-PCR检测显示,重组表达质粒转染细胞后P1-2A 和IFN-γ基因成功转录出mRNA;免疫荧光试验表明目的基因在BHK-21细胞中获得了表达.结果证明,本研究成功构建了重组质粒pBudCE-IFN-P1-2A并在体外进行了表达,这为研制抗FMDV DNA疫苗和IFN-γ的佐剂作用奠定了坚实基础.     

大白菜TPS基因家族鉴定及其在高温胁迫下的表达分析

为明确大白菜TPS(BrTPS)家族成员信息及对高温胁迫信号的响应,本研究利用生物信息学方法,在大白菜基因组数据库中鉴定了BrTPS基因家族成员,并对其理化性质、进化特征、蛋白结构及在高温胁迫下的表达模式进行分析。结果表明,大白菜全基因组含有15个TPS基因家族成员,分布于8条染色体上。除BrTPS14和BrTPS15外,其余成员各含有1个TPS和1个TPP结构域,并且所含motif的排列顺序也完全一致。理化性质分析发现,15个成员的氨基酸长度介于129~1459 aa之间,分子量大小在14.73~165.83 kD之间,大部分BrTPS蛋白为酸性蛋白和亲水蛋白,以无规则卷曲作为二级结构主要构成元件。进化分析表明,大白菜TPS基因家族成员可分为2类,其中ClassⅠ包含5个成员,ClassⅡ包含10个成员。本研究对高温胁迫前后不同组织和持续高温胁迫下叶片中的表达分析,发现大部分的BrTPS基因可对高温胁迫产生响应,但在表达规律上存在差异。这些研究结果为后续研究大白菜TPS基因提供一定参考。     

口蹄疫病毒3D基因真核表达载体pEGFP-3D的构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位

为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况.从重组质粒pMDl8.T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载体pEGFP-N1分别经Barn H Ⅰ/Hind Ⅲ酶切,进行定向亚克隆;重组表达质粒pEGFP-3D经PCR、酶切鉴定.阳性质粒进行测序.利用脂质体介导阳性pEGFP-3D质粒转染BHK-21细胞.免疫组化检测转染细胞中3D基凶表达情况和3D基因在细胞中的定位,Western blotting验证pEGFP-3D融合基因的表达.结果表明,成功构建了重组表达质粒pEGFP-3D,并在BHK-21细胞中进行了表达.免疫组化分析表明,3D蛋白主要定位于细胞核;Western blotting证实pEGFP-3D融合蛋白在80 kDa处出现阳性条带,说明表达的外源蛋白具有免疫活性.pEGFP-3D表达载体转染细胞后很快就能通过观察荧光蛋白而检测出基因的瞬时表达情况,为基因转染研究中确定转染效率、3D的表达情况及蛋白定位等提供了直观的靶标,有望应用于FMDV聚合酶分子的生物学特性研究.     

芝麻DNA和RNA同步提取方法

高质量的DNA和RNA是分子生物学实验顺利进行的基础。本文首次针对CTAB法提取芝麻DNA和RNA的效果进行了研究,在此基础上改进了提取程序和相关技术参数,总结出一套可同步提取高质量芝麻DNA与RNA的方法。利用该方法提取的DNA及RNA经RAPD、SSR、SRAP、DDRT—PCR、AFLP、cDNA—AFLP等分子试验验证,质量好,符合后续试验的要求。这套方法为顺利开展芝麻分子生物学研究奠定了基础。     

猪圆环病毒2型和伪狂犬病弱毒疫苗体外共接种对猪外周血单个核细胞调节性细胞因子mRNA表达的影响

为分析猪圆环病毒2型（PCV2）对伪狂犬病弱毒苗（PRV）免疫反应的影响,用real-time PCR技术检测了仔猪外周血单个核细胞（PBMC）体外单接种和共接种PCV2与PRV后调节性细胞因子IL-4、IL-10、IL-12p40及IFN-γ的mRNA表达水平。结果表明,PRV能引起IL-4、IL-12p40与IFN-γ的mRNA表达上调,PCV2能引起IL-4、IL-10与IL-12p40的mRNA表达上调;而且,PCV2能抑制PRV诱导IL-4、IL-12p40及IFN-γ的mRNA表达上调,其中对IFN-γ mRNA表达的抑制效果最为显著（P<0.05）,提示PCV2可能会对PRV的细胞免疫反应产生不利影响。     

Detecting genetic diversity in diploid bananas using PCR and primers from a highly repetitive DNA sequence

Summary The polymerase chain reaction (PCR) was used to detect polymorphisms among 29 diploid clones of Musa acuminata Colla. from Papua New Guinea. Primer sequences were derived from a 520 bp highly repetitive DNA sequence isolated from M. acuminata ssp. malaccensis. Primers, used individually, detected a total of 48 polymorphisms that were scored as unit characters and used to generate a Jaccard's similarity index. Principal coordinate analysis (PCO) was used to cluster clones and the unweighted paired-group method of analysis (UPGMA) was used to compute genetic distance among the materials examined. The abundance of diversity within the PNG diploids examined reflects the extreme genetic variability within the M. acuminata gene pool. PCR, utilizing primers from a highly repetitive sequence, is a rapid means of detecting genetic diversity in M. acuminata.     

两种同时提取小麦根腐离蠕孢菌DNA和RNA的方法比较

获得足够数量和高质量的RNA和DNA是进行分子生物学研究工作的基础。以小麦根腐离蠕孢菌为原料,分别采用溶菌酶法和液氮研磨法破碎真菌细胞壁提取DNA,用琼脂糖凝胶电泳、紫外吸收及聚合酶链式反应（PCR）技术进行核酸完整性和纯度检测。结果表明：两种方法在提取DNA时都同时得到了高质量的RNA;PCR检测结果表明DNA完整性比较高,两种方法得到的DNA质量相当;溶菌酶法中得到的RNA质量优于液氮法。利用溶菌酶破壁法提取小麦根腐离蠕孢菌DNA的提取体系可用于RNA的提取,为小麦根腐离蠕孢菌核酸的DNA和RNA的同时提取提供了一种简便、安全、可行的方法。     

The manipulation and modification of tomato fruit ripening by expression of antisense RNA in transgenic plants

Summary The common cultivated tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) provides a major focus for improvement of crop quality through genetic engineering. Identification of ripening-related cDNAs has enabled the modification of specific aspects of ripening by manipulating gene expression in transgenic plants. By utilizing antisense RNA to modify expression of ripening genes, we have inhibited the production of the cell wall-metabolising enzymes polygalacturonase and pectinesterase and created transgenic plants that contain, effectively, single, targeted mutations affecting these genes. Furthermore, this approach has been used with previously unidentified cDNA clones to enable both functional identification and manipulation of genes involved in ethylene production (ACC oxidase) and carotenoid biosynthesis (phytoene synthase). The use of antisense RNA targeted to specific genes to alter ripening phenotypes and improve commercial utility of fruit by affecting shelf-life, processing characteristics and nutritional content is discussed.We have used the extreme ripening-impaired mutant, ripening inhibitor (rin) to identify additional genes implicated in the ripening process. This approach has resulted in the cloning of several novel ripening-related mRNAs which are now being studied by antisense experiments. This may enable identification and manipulation of additional genes involved in processes such as softening, flavour and aroma generation and susceptibility to pathogens.Abbreviations ACC 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid - PE pectinesterase - PG polygalacturonase - SAM S-adenosyl methionine - SARs scaffold attachment regions     

Constitutive expression of Cry proteins in roots and border cells of transgenic cotton

Transgenic cotton plants expressing Cry1Ac and Cry2Ab, from the soil bacterium Bacillus thuringiensis (Bt), provide effective control of certain lepidopteran pests, however, little is known about the proteins below ground expression. We used ELISA to quantify in vitro expression of the Cry1Ac and Cry2Ab proteins in mucilage, root border cells and root tips in five transgenic cultivars of cotton compared to conventional cultivar Sicot 189. Expression of Cry proteins in roots and border cells of the transgenic cotton cultivars was constitutive and at detectable levels, with Cry1Ac and Cry2Ab protein expression ranging from <20 ppb to >100 pbb. To determine if genetically modified cotton demonstrated simple differences in properties of the root, when compared to an elite parental line (cv. Sicot 189), we enumerated border cells on seedling radicles. Border cell counts of 14 cultivars ranged from 0.2 to 1.1 × 10⁴ cells per root tip with an average of 5 × 10³ border cells. Border cell production in the transgenic cultivars was generally similar to that of both donor and elite parents, the exception being the cultivar Sicot 189, which had substantially more border cells than all of its transgenic derivatives. Comparison of border cell number with varietal disease resistance ranking found a limited relationship (r ² = 0.65, n = 7) between border cell numbers and the commercial resistance rank against Fusarium wilt of cotton. The implications of differences in cotton cultivar border cell number and root tip expression of Cry proteins for plant–microbe interactions in the rhizosphere and the soil ecosystem are yet to be resolved.