禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc基因表达及凋亡的影响

【目的】 探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】 以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500 μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】 ①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】 REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。     

禽网状内皮组织增生病病毒分子生物学特性与免疫抑制

禽网状内皮组织增生病病毒为反转录病毒科禽类C型反转录病毒.禽网状内皮组织增生病病毒感染后主要引起感染家禽免疫功能抑制和慢性肿瘤,该病的控制对养禽业的健康发展和生物制品质量的提高具有重大影响.文章对禽网状内皮组织增生病病毒的生物学特性与引起免疫抑制机制的研究新进展进行了简要综述.     

禽网状内皮增生病病毒对不同日龄SPF鸡的致病性比较

本研究拟通过禽网状内皮增生病病毒(REV)分子克隆化病毒REV-C99株对1、8日龄SPF鸡的致病性比较,探讨REV的致病性与感染日龄的关系。在1、8日龄SPF鸡,分别腹腔注射REV-C99株1000个TCID50.只-1,以新城疫病毒(NDV)灭活疫苗免疫后HI抗体滴度的测定结果为指标,比较了REV对不同日龄SPF鸡的致病性。结果表明,与对照组相比,1日龄SPF鸡感染REV后,即使经过NDV灭活疫苗的二次、三次免疫,对NDV的HI抗体滴度仍然差异显著(P0.05);而8日龄SPF鸡感染REV后则随着感染时间的延长以及NDV灭活疫苗的二次、三次免疫,对NDV的HI抗体滴度差异不显著(P0.05)。本研究表明,REV感染1日龄SPF鸡可显著抑制对NDV灭活疫苗免疫后的体液免疫反应,并且这种免疫抑制作用可持续至4个月;而8日龄SPF鸡感染REV后更多表现为一过性的致病作用。显然,REV的致病性对雏鸡感染日龄具有很强的依赖性,从而揭示出控制REV早期感染的重要性并具有现实意义。     

禽网状内皮组织增生症病毒感染雏鸡血液T细胞数量和细胞因子含量变化

为探索禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染对雏鸡外周血液细胞免疫功能及其相关细胞因子的影响,将60只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和未感染REV的对照组,应用流式细胞术结合ELISA等免疫学方法,通过血液T淋巴细胞亚型数量与比值变化,以及其免疫相关因子含量等动态变化的检测,系统地研究REV感染对SPF雏鸡血液细...     

禽网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其体外复制研究

禽网状内皮组织增生病是一种重要的肿瘤病和免疫抑制病。本研究从黑龙江省某鸣场分离到一株禽网状内皮组织增生病病毒,经间接免疫荧光、PCR和电镜鉴定,将该株病毒命名为HLJR090l。克隆HLJR0901主要保护性抗原的基因gp90,并进行了序列分析。HLJR0901与我国早期分离的南方毒株HA9901亲缘关系较远,而与美国和台湾的某些毒株同源性较高。HLJR0901的TCID50为10^52／mL。通过绘制复制动力学曲线对HLJR0901在cEF细胞上的增殖动态规律进行了研究,发现d6和d7REV增殖的滴度最高。该研究丰富了REV流行病学调查,为后续研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。本研究不仅丰富了我国REV流行病学资料,也为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础。     

禽网状内皮组织增生病病毒感染性引起的鸡群免疫抑制

1999年8月，江苏省泰安州市某AA肉用型鸡父母代种鸡群呈现生长缓慢，鸡新城疫疫苗免疫注射后HI效价不高及多发性腹膜炎，心包炎等免疫抑制性症状，55日龄时，随机从4只患鸡采集血浆样品接种鸡胚成纤维细胞，7d后在间接荧光抗体反应中均对网状内皮增生病病毒（REV）的单克隆抗体11A25呈强阳性反应，结果表明，该鸡各的免疫抑制状态主要由REV的早期感染及其持续发现毒血症所引起。     

用单抗介导的免疫荧光试验检测组织切片中的禽网状内皮组织增生病病毒

以禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus，REV)的单克隆抗体11B154作为一抗，建立了从组织病理切片中检测REV的免疫荧光技术(Mc-IFA)。运用该技术对人工接种REV的肉鸡和疑似REV病鸡的肝脏、脾脏、心脏和肾脏等器官的组织切片进行了检测，并与病毒分离和斑点杂交试验的敏感性和特异性进行了比较。结果表明，在人工接种的感染肉鸡中，3种方法均为阳性；在30份疑似REV的病料中，用Mc-IFA可以检测出10份阳性，而病毒分离只有8份样品为阳性。由此表明，Mc-IFA的特异性和敏感性均较高，完全可以用于REV的检测。     

网状内皮组织增殖病病毒感染SPF雏鸡后局部体液免疫球蛋白含量变化

试验对ＳＰＦ雏鸡接种网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）后,应用间接酶联免疫吸附分析法检测了泪液、气管液、肠液和胆汁的免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量的动态变化。结果发现,感染ＳＰＦ雏鸡泪液、气管液、肠液和胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量于感染后７～４２ｄ明显降低,表明ＲＥＶ感染鸡的局部体液免疫能力降低     

雏鸡母源抗体滴度与抗禽网状内皮增生病病毒感染间的相关性分析

为分析雏鸡母源抗体滴度与抗禽网状内皮增生病毒(REV)感染之间的相关性.将蛋用型海兰褐种鸡在用REV弱毒疫苗免疫接种,种鸡均在2周内产生REV特异性抗体.来自免疫REV疫苗种鸡的雏鸡均呈母源抗体阳性,而且母源抗体滴度与对应种鸡的抗体滴度呈正相关性.分别对有母源抗体和无母源抗体的雏鸡人工接种REV低代毒,比较它们的生长速度和对新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(AIV)灭活苗免疫后的抗体反应.结果表明,种鸡提供的母源抗体,不仅可预防REV野毒感染引起的生长迟缓,也可预防REV引起的对NDV和AIV灭活疫苗免疫反应的抑制作用.雏鸡的REV母源抗体水平与对NDV和AIV的灭活疫苗免疫后的抗体滴度呈正相关性.     

禽网状内皮组织增殖病的实验室诊断

禽网状内皮组织增殖病（RE）是由网状内皮组织增殖病病毒（REV）引起的鸡、鸭、鹅、火鸡以及其它禽类以淋巴网状细胞增生为特征的肿瘤性疾病，是包括致死性网状细胞瘤、矮小综合症和慢性淋巴组织瘤等在内的一类病理性综合征。     

网状内皮增殖病病毒(REV)感染SPF雏鸡后局部免疫组织抗体生成细胞的变化

对 SPF雏鸡人工感染 REV后局部免疫组织盲肠扁桃体和哈德氏腺的 Ig A、Ig G和 Ig M抗体生成细胞数量动态变化进行了检测。结果发现 ,REV感染 SPF雏鸡后 7～ 4 9天消化道局部免疫组织盲肠扁桃体和呼吸道相关局部免疫组织哈德氏腺的 Ig A、Ig G和 Ig M抗体生成细胞数量明显低于未感染对照雏鸡。表明雏鸡感染 REV后消化道局部组织盲肠扁桃体和呼吸道相关免疫组织哈德氏腺体液免疫机能均显著下降。     

禽网状内皮组织增生症病毒囊膜糖蛋白gp90的原核表达

根据禽网状内皮组织增生症病毒（REV）SNV株的前病毒基因组cDNA序列，设计并合成1对引物，以SNV株前病毒CDNA全基因组克隆为模板，通过PCR技术，扩增出该病毒囊膜糖蛋白（env)gp90基因部分片段。将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGEX-5X-3载体中谷胱甘肽-S-转移酶（GST）的下游，将重组质粒转化进宿主菌BL21中，在1.0mmol/L IPTG(37℃）诱导下，gp90基因部分片段以融合蛋白的形式获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，确定其表达的融合蛋白相对分子质量为64000。将表达产物从凝胶中回收后免疫小鼠，所得的抗血清可与REV野毒株感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）在免疫荧光试验中起反应。由此表明，体外表达的SNV株gp90-GST融合蛋白保留了天然蛋白所具有的抗原性。     

肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查

对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV（A、B亚群）抗体检测。在572份血清样品中，除了一个8．1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13．3％和75％外，其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫，抗体阳性率均为100％。在212份血清样品中，REV抗体阳性率在16．7％～62．5％之间；ALV（A、B亚群）抗体阳性率在0％～75％之间。本研究结果表明，所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。     

Effects of Reticuloendotheliosis Virus on the Viability and Reproductive Performance of Japanese Quail

The effects of reticuloendotheliosis virus (REV) infection were studied using an experimental model in Japanese quail during 2 consecutive generations. The REV used in this study (APC-566) was isolated from Attwater's prairie chickens (Tympanuchus cupido attwateri). Tumors were induced by APC-566 as early as 6 wk of age. Mortality was significantly higher in groups of quail with a higher frequency of REV infection. Egg production, hatchability, and fertility rates decreased in infected quail as compared with uninfected control quail. The BW of infected quail were significantly reduced at 8 wk of age in the first generation of infected quail (breeders) and at 3 and 6 wk of age in the second generation (quail broilers) compared with uninfected quail.     

我国白羽肉用型鸡群中CAV、REV和REOV感染状况的血清学调查

为了解鸡传染性贫血病毒（CAV）、禽网状内皮增生病病毒（REV）和呼肠孤病毒（REOV）在我国白羽肉用型鸡中的感染状态，在2003—2004年，检测了来自5省市8个公司不同年龄鸡群血清样品中3种病毒抗体的存在状况。结果表明，在送检的75个鸡群中，对CAV、REV和REOV呈现抗体阳性的鸡群分别有64个（85．3％）、36个（48％）和74个（96％）。在总共检测的1764份血清样品中，对这3种病毒的平均抗体阳性率分别为51．4％、9．8％和75．1％。在1日龄雏鸡，对CAV和REOV的平均母源抗体阳性率可达100％和81．1％，但对REV只有7．4％。抗体阳性率随年龄变化的动态分析表明，对REV和REOV的母源抗体在出壳后2～3周内消失，而对CAV的母源抗体则可持续3～4周。对CAV和REOV的抗体从5周龄起再次出现，到20周龄时，所有送检鸡群全部阳性，平均阳性率在90％以上。有近一半送检鸡群对REV呈现抗体阳性，抗体阳性率普遍较低，即使在达到开产年龄后，仍还有很高比例鸡为抗体阴性，即对REV仍为易感鸡。研究表明，我国多数鸡群中都同时存在着这3种病毒的感染，但它们在感染的程度和动态等流行病学特点上显著不同，应根据鸡群中抗体的阳性率分别采取不同的措施。     

禽网状内皮组织增生病病毒和马立克氏病病毒共感染对鸡的致肿瘤作用

用禽网状内皮组织增生病病毒(REV)和马立克氏病病毒(MDV)共感染肉鸡，研究这2种病毒对鸡的致瘤作用，结果表明肉鸡共感染MDV和REV后13d即可发生死亡．接种后100d死亡率达84％。死亡鸡的肝脏、脾脏、肾脏和心脏等可以形成2种外观明显不同的散在的大肿瘤结节和弥漫性的小肿瘤结节。取发病鸡的肝脏、脾脏、肾脏、心脏和腺胃等组织样品做连续石蜡切片，HE染色后发现这些脏器均存在2种不同类型的肿瘤细胞增生。对这些连续切片分别用MDV和REV的单克隆抗体进行间接荧光试验，则同1份样品存在可以与REV和MDV分别呈现阳性反应的肿瘤细胞团，结果表明REV和MDV可以在感染鸡的体内分别诱发形成肿瘤。在接种后14、21、28和42d随机采集3只鸡的全血分离MDV和REV，均可以同时分离到MDV和REV。表明REV和MDV的共感染延长了病毒血症的时间。     

实验性感染H9亚型禽流感病毒对鸡的免疫机能及免疫器官的影响

以 H9亚型禽流感病毒 (AIV) Ck/YZ株人工感染罗曼蛋鸡 ,在其免疫器官中仅引起法氏囊部分淋巴滤泡髓质区内的淋巴细胞轻度减少 ,而胸腺、脾脏、哈氏腺、盲肠扁桃体均未出现病变。与对照组相比 ,感染组鸡的外周血淋巴细胞在白细胞中的分类计数未出现明显变化。实验性感染 AIV Ck/YZ株后 ,再进行新城疫 系苗免疫 ,可引起罗曼蛋鸡血清中抗 NDV的 HI抗体滴度轻度下降 ,但免疫后 18d用 NDV强毒攻击时 ,仍能完全保护。     

SPF雏鸡感染REV后免疫器官免疫功能的动态变化

试验通过对 1日龄 SPF雏鸡人工感染网状内皮组织增殖病病毒 ( REV) ,观察了免疫器官胸腺、法氏囊和脾脏 T、B淋巴细胞增殖反应的动态变化。结果表明 ,雏鸡感染 REV后胸腺 T淋巴细胞的增殖反应于7、2 1、4 2和 4 9日龄明显降低 ( P<0 .0 5) ,于感染后 1 4、2 8和 3 5日龄极显著减弱 ( P<0 .0 1 ) ;脾脏 T淋巴细胞的增殖反应分别于感染后 1 4～ 2 8d和 3 5～ 4 9d较对照组雏鸡明显或极明显降低 ( P<0 .0 5,P<0 .0 1 )。法氏囊和脾脏 B淋巴细胞增殖反应分别在感染后 7～ 4 9d和 1 4～ 4 9d极显著减弱 ( P<0 .0 1 )。免疫器官胸腺重量和脾脏重量与体重比值及体重分别于感染后 7～ 4 9、7～ 3 5、7～ 4 9d明显降低 ( P<0 .0 5,P<0 .0 1 )。说明SPF雏鸡感染 REV后 ,免疫器官 (胸腺、法氏囊和脾脏 )淋巴细胞发生变性坏死、数量减少和功能降低 ,机体的细胞免疫和体液免疫功能均发生明显降低或抑制     

传染性法氏囊病病毒超强毒感染SPF鸡免疫器官中CD4+和CD8+T淋巴细胞动态分布

利用免疫组织化学染色对传染性法氏囊病病毒（IBDV）超强毒LX株感染SPF鸡免疫器官中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的动态分布进行了研究。超强毒LX株接种2周龄SPF雏鸡，在其法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓和哈氏腺中均可检出IBDV抗原的存在和CD4^ 与CD8^ T淋巴细胞的数量改变。在法氏囊中，CD4^ 淋巴细胞主要存在于淋巴滤泡间隙和滤泡皮质，而CD8^ T淋巴细胞则丰在于整个淋巴滤泡和滤泡间隙，并且CD8^ T淋巴细胞数量明显多于CD4^ T淋巴细胞，在接种后14d仍未见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞数量减少。脾脏中CD4^ T淋巴细胞主要存在于外周小动脉淋巴鞘或散在，而CD8^ T淋巴细胞则多存在于外周小动脉淋巴鞘和红髓。接种后胸腺中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞在皮质中减少，但在髓质增多，尤其是CD8^ T淋巴细胞数明显多于CD4^＋T淋巴细胞。盲肠扁桃体中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞主要存在于发生中心，尤其是CD8^ T淋巴细胞数比CD4^ T淋巴细胞明显多。骨髓和哈氏腺中也可见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞，而且CD8^ T淋巴细胞更多。在这些淋巴器官中，病毒损伤部位出现CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的迁入聚集，表明T淋巴细胞可能参与IBDV超强毒的免疫致病过程。