山羊妊娠早期胎儿胎盘血管形成及相关基因的表达

旨在探究大足黑山羊妊娠早期胎儿胎盘血管发育、分布和血管生成相关因子表达状况,并对血管生成相关因子表达之间和血管发育进行相关性分析。本研究随机选取15只8月龄、体格相近、身体健康的国家级畜禽遗传资源—大足黑山羊青年母羊,经同一种公羊自然交配后(以末次配种当天记为0 d),经剖腹产手术采集妊娠第20、25和30天的胎儿和胎儿胎盘以及经屠宰采集妊娠第45和60天的胎儿和胎儿胎盘作为研究对象,通过免疫组化法评估胎盘血管发育和分布情况,采用qRT-PCR技术检测主要血管生成相关基因的mRNA表达水平,分析血管生成相关基因之间以及与胎盘血管发育分布的相关性。结果显示,胎儿体重和体长随着妊娠的进行逐渐增加,且血管内皮细胞阳性率处于较高水平(26%)。山羊胎儿胎盘毛细血管总面积/组织区域面积(CAD)逐渐升高;毛细血管总数/单位组织区域面积(CND)在妊娠25～30 d增加,30～60 d降低,毛细血管总面积/毛细血管根数(APC)呈相反趋势;毛细血管总周长/单位组织区域面积(CSD)无显著变化。妊娠早期胎儿胎盘VEGFA的表达量随着妊娠的进行逐渐升高,且与血管分布存在一定的相关性,其受体FLT1和KDR表达量呈先增高后降低的趋势,分别在30和45 d达到峰值。血管生成相关基因ANGPT1/2及其受体TEK和FGF2及其受体FGFR2的表达均在妊娠30 d时较高。综上表明,在妊娠30 d前,胎儿胎盘主要通过毛细血管形成分支促进血管面积的增加;而在30～60 d,主要通过单位血管的增粗促进血管面积的增加,并且血管生成相关基因的表达在妊娠30 d时较高,这可能和子叶开始形成有关。山羊妊娠早期胎儿胎盘中VEGFA可能通过其受体结合与其他血管生成因子共同作用调控胎儿胎盘血管形成。     

大足黑山羊妊娠不同阶段胎盘组织线粒体酶活性和超微结构变化

山羊的胎盘属于子叶型胎盘,胎盘子叶性状和结构与山羊繁殖性能具有较强的相关性。胎盘子叶组织线粒体发挥正常功能是保证胎儿生长发育,进而维持正常妊娠的关键。本试验采用大足黑山羊妊娠60,90,120d的胎盘和胎儿组织为研究对象,检测胎盘子叶及胎儿心、肝、脾、肺、肾组织的线粒体细胞色素C氧化酶(CCO)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、Ca++-Mg++-ATP酶和Na+-K+-ATP酶的活性变化,并通过透射电镜技术观测胎盘子叶组织线粒体的形态结构。结果发现,胎盘子叶及胎儿心、肝、脾、肺、肾的线粒体CCO、SDH及ATP酶的活性都有随着妊娠时间的增加而显著提高的趋势,且在妊娠90~120d的上升趋势高于妊娠60~90d,表明妊娠中后期的胎儿生长发育所需要的能量较多;在同一妊娠阶段,胎盘子叶线粒体酶活性均高于胎儿各组织,且差异显著(P<0.05),说明胎盘子叶是妊娠过程中的重要部位,胎儿组织器官在发育过程中存在先后顺序,并且与该器官的功能作用有关;透射电镜观察发现,随着妊娠时间的增加胎盘线粒体数量增多,密度增大且主要聚集在子叶绒毛附近,这体现了胎盘子叶的营养交换作用。     

奶牛妊娠早期血浆中微量胎儿DNA的提取与检测

妊娠奶牛外周血的血浆中存在的胎儿游离DNA片段,为进行早期奶牛胚胎的性别诊断提供了理论依据.本试验采集妊娠奶牛静脉血液,探索从血浆中提取胎儿游离DNA的无创伤性新方法,从而为妊娠奶牛早期胚胎的性别鉴定提供新的技术途径和方法.     

转录组测序筛选山羊妊娠早期胚胎附植相关基因

旨在通过胚胎附植前、后的山羊子宫角组织高通量测序筛选妊娠早期胚胎附植的关键基因。本研究选取2～4岁体重相近((44.76±3.49)kg)的经产努比亚母山羊16只,在同期发情-人工输精配种后的第15(D15)和第30天(D30)分别随机选取3只羊颈动脉放血处死。采集子宫角组织利用Illumina HiSeq进行高通量转录组测序(RNA-Seq),筛选差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)并对DEGs进行功能注释,基因功能查询进一步筛选与胚胎附植直接相关的调控基因,荧光定量PCR(qRT-PCR)对筛选的基因进行表达量验证分析。D15和D30子宫角组织转录本比较分析发现了 2 000个DEGs,其中上调基因620个,下调基因1 380个。GO功能聚类分析共分为3大类52组,其中细胞组分17组,生物过程23组,分子功能12组,获得细胞连接与增殖,生物粘附与调节,分子活性与转导等重要生物途径。以D15表达量高低为排序标准,从表达量最高的10个基因中筛选出了与胚胎附植有关的基因MGP和TAGLN;从上调和下调幅度最大的前10个差异表达基因中,获得参与妊娠相关糖蛋白合成与分泌的基因PAG-3、PAG-8、PAG-12,参与生长因子结合与生长激素释放激素受体活性相关基因GHRHR和胰岛素样生长因子结合蛋白基因IGFBP1。qRT-PCR结果显示,随机选取的6个基因在D15和D30子宫角中表达变化趋势与RNA-Seq结果一致。获得的基因MGP、TAGLN、PAG-3、PAG-8、PAG-12、GHRHR、IGFBP1在努比亚山羊胚胎附植中具有重要作用。     

妊娠山羊宫内胎儿脐动脉插管手术方法的研究

为了优化山羊胎儿脐动脉插管模型,本试验采用医用硬膜外导管对单胎妊娠120日龄的山羊进行胎儿脐动脉插管手术,对其手术途径、导管类型、插管方法、麻醉和术后护理进行研究。术后可顺利采集胎儿血液样本,1周后母山羊正常分娩。本试验建立的山羊胎儿脐动脉插管模型的手术方案,可为胎儿疾病的诊断及临床用药等提供试验基础。     

妊娠犬及其胎儿股动脉血管插管技术

对 12例妊娠犬及其胎儿股动脉血管插管术的手术途径、血管和导管选择、插管方法、麻醉和术后护理进行了探讨。 12例术后胎儿在母体内的存活时间分别为 :36 h 2例、4～ 5 d 2例、6～ 7d 3例、8～ 10 d 3例、12～ 14 d 2例。胎儿在母体内存活 4 d以上的 10例犬正常娩出经手术插管的胎儿 ,其血管插管保持完好 ,所产 10只幼犬全部成活 ,分娩前后均可从导管采集到血液样本。其余 2例犬发生流产。     

NO对胎盘功能和胎儿生长发育的影响

一氧化氮(NO)化学结构简单,性质活跃,广泛参与机体的生理、病理调节。在妊娠期,NO可降低血管对加压物质的反应性,降低外周阻力及血压。目前认为,NO产生减少是妊娠高血压征合征发病的重要原因,是导致母体妊娠期心血管系统发生血容量增加、血压下降、血液重新分布等生理性改变的重要因素,胎盘局部NO及其相关因子对胎盘功能和胎儿的生长发育有直接的影响作用。     

羊的早期妊娠诊断及产羔数预测研究进展

早期妊娠诊断能有效减少母羊空怀率,同时便于及时对妊娠母羊进行合理的分群饲养和管理,对提高羊的繁殖效率及增加养羊业经济效益具有重要意义。该文就羊的早期妊娠诊断技术及产羔数的预测方法进行了综述,旨在为养羊业生产实践提供技术指导。     

基于外周血液中基因差异表达分析的奶牛早期妊娠诊断

奶牛的早期妊娠诊断在实际生产过程中具有重要的意义,但是现有的妊娠诊断技术因存在诸多弊端而很少能够在生产中应用和推广。妊娠识别阶段某些关键基因在外周血液中显著差异表达规律为我们探索新的早期妊娠诊断技术提供了契机。本文对奶牛妊娠诊断的研究进展进行了简要阐述,提出了通过分析外周血液中关键基因的表达情况对奶牛进行早期妊娠诊断的方法,并着重就其基本原理、应用前景以及存在的问题进行了阐述。     

猪妊娠过程中胎盘发育及其调控基因研究进展

胎盘是母体与胎儿进行营养物质、气体及废弃物交换的重要器官。妊娠过程中,猪胎盘功能是影响母猪产仔数、死胎数及断奶前死亡率的最重要因素之一。作者介绍了猪妊娠早期胎盘的建立过程及形态变化、妊娠中期胎盘褶皱的形成、妊娠后期胎盘的进一步发育,阐述了这3个妊娠阶段猪胎盘的形态变化与其对应的胎盘功能之间的关系,并介绍了目前所发现的调控猪胎盘建立和发育的相关基因,包括透明质酸酶（HYAL）、组织蛋白酶（CTSB和CTSL1）及乙酰肝素酶（HPSE）基因,为提高母猪胎盘效率、增加母猪繁殖力提供科学依据。     

山羊流产衣原体ompA和CPAF基因的序列分析及原核表达

为了解山羊流产衣原体陕西分离株ompA和CPAF基因的遗传变异情况及制备检测抗原,根据GenBank收录的ompA和CPAF基因序列设计合成特异性引物,分别进行ompA基因和CPAF基因的基因克隆、序列分析及原核表达.结果表明,成功克隆出大小为1 053 bp的ompA基因和大小为1 056 bp的CPAF基因;核酸序...     

乐至黑山羊肾溶菌酶基因克隆及原核表达

本研究对乐至黑山羊肾溶菌酶(LZLyK)基因进行了克隆、表达,并对其活性进行了测定。采用比较基因组技术,成功克隆了LZLyK基因,其cDNA长444 bp,编码147个氨基酸。同源性分析结果表明,氨基酸同源性与绵羊溶菌酶2(M32498.1)最高,达96.9%。构建原核表达质粒pET- LZLyK,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白LZLyK得到正确表达,分子质量约为16、30 ku。采用比浊法测定了LZLyK蛋白的活性,其活性为15 U/mL,表明LZLyK蛋白具有一定抗菌活性。运用实时荧光定量PCR发现在乐至黑山羊肝脏、肾脏、气管和皱胃中均有肾溶菌酶基因的表达,在胃中表达量较高。     

金堂黑山羊白介素10基因的克隆及表达分析

为探究山羊白介素10（interleukin 10,IL-10）基因的序列特征及在组织中的相对表达情况,试验采用PCR法扩增并克隆金堂黑山羊IL-10基因,用DNAMAN、DNAStar、ExPASy等生物信息学软件进行序列分析,运用实时荧光定量PCR法检测IL-10基因在金堂黑山羊不同组织中的表达情况。结果显示,金堂黑山羊IL-10基因序列长为379 bp,开放阅读框为276 bp,编码91个氨基酸残基。IL-10蛋白二级结构中含有α-螺旋、β-转角和无规则卷曲,分别为76.92%、2.20%和20.88%。IL-10蛋白三级结构模型与人IL-10（1ilk.1.A）基因同源性最高（86.81%）。系统进化分析结果发现,金堂黑山羊IL-10基因与挪威山羊IL-10基因亲缘关系最近。实时荧光定量PCR检测发现,在金堂黑山羊肺脏中IL-10基因表达水平显著高于脾脏、心脏、肌肉和肾脏（P<0.05）,在肾脏中IL-10基因表达水平显著高于脾脏、心脏和肌肉（P<0.05）,在脾脏、心脏和肌肉中IL-10基因表达水平较低,但差异不显著（P>0.05）。本试验结果揭示了IL-10基因具有高度的保守性,可能参与调控山羊的免疫应答反应。     

B型超声诊断技术在波尔山羊妊娠早期的应用研究

为了提高波尔山羊的繁殖效率,试验采用B型超声诊断技术在波尔山羊妊娠早期进行了声像学监测.对早期妊娠诊断以及怀胎数目诊断进行了研究.结果显示:在波尔山羊妊娠早期,即妊娠40 d之前,主要以直肠检查为主,腹壁检查为辅;妊娠40d以后腹壁检查时胎体清晰可见,主要以腹壁检查为主,妊娠诊断的准确率为100%,双胎诊断的准确率为100%,单胎诊断的准确率为81.8%.     

WGCNA鉴定奶山羊妊娠至泌乳期乳腺发育关键基因

旨在通过加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）筛选奶山羊不同生理阶段乳腺发育的关键基因。本研究从GEO数据库中下载奶山羊不同生理阶段（妊娠46天、70天、90天、110天和产后40天）的乳腺组织微阵列数据集GSE14008,使用R语言的WGCNA包对数据进行共表达分析。将得到的模块与生理阶段进行关联分析,选择目标模块,并根据连接度选出枢纽基因。使用DAVID网站对模块进行富集分析后,使用String网站构建模块的蛋白互作网络,并使用Cytoscape软件得到核心基因,最终与枢纽基因取交集得到目标基因。对18个样本的8 443个基因进行加权基因共表达分析,得到30个模块,并选出4个与不同生理阶段相关的目标模块及每个模块的30个枢纽基因,同时也得到4个模块的蛋白互作网络及每个网络的20个核心基因。最终,4个模块共得到13个与乳腺发育相关的目标基因（UQCR、RGL2、NOTCH1、PTBP1、PPP5C、FZR1、UBE2L3、TNF、MAT2A、ITGB2、GPR18、JAK1、CSN2）。本研究通过WGCNA、GO富集分析和PPI网络等生物信息学技术,阐明了不同生理时期乳腺发育的关键过程,及在这些过程中起关键作用的基因,这为进一步研究乳腺发育机制提供了新的思路和线索。     

Identification of Key Genes of Mammary Gland Development from Pregnancy to Lactation in Dairy Goats by WGCNA

The purpose of this study was to select the key genes of mammary gland development at different physiological stages in dairy goats by weighted gene co-expression network analysis(WGCNA). GSE14008 mammary gland tissue microarray data set of dairy goats at different physiological stages (pregnancy 46 days, 70 days, 90 days, 110 days and 40 days postpartum) was downloaded from GEO database, and co-expression analysis was carried out using WGCNA package of R language. The target modules were selected by correlation analysis between the modules and physiological stages, and the hub genes were selected according to the connectivity degree. After enrichment analysis of the modules using DAVID website, the protein-protein interaction network of the modules was constructed using String website and the core genes were obtained using Cytoscape software, and finally the target genes were obtained from intersection of core genes and hub genes. A total of 8 443 genes from 18 samples were analyzed for co-expression of weighted genes. The 30 modules were obtained, and 4 target modules related to different physiological stages and 30 hub genes of each module were selected. Meanwhile, protein-protein interaction network of 4 modules and 20 core genes of each network were also obtained. Finally, 13 target genes related to mammary gland development were obtained from the 4 modules, which were UQCR, RGL2, NOTCH1, PTBP1, PPP5C, FZR1, UBE2L3, TNF, MAT2A, ITGB2, GPR18, JAK1 and CSN2 genes. The key processes of mammary gland development at different physiological stages and the genes that played the key role in these processes were elucidated by WGCNA, GO enrichment analysis, PPI network and other bioinformatics techniques, which provided a new idea and clue for the further research on the mechanism of mammary gland development.     

环氧合酶-1和环氧合酶-2在兔早期妊娠子宫内膜及早期胚胎中的表达

环氧合酶(cyclooxygenase，Cox)是由花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，而前列腺素在哺乳动物的生殖过程中起着很重要的作用。本试验采用RT—PCR方法对环氧合酶-1(Cox-1)及环氧舍酶-2(Cox-2)在早期妊娠兔子宫内膜中的表达进行了半定量研究和在早期胚胎中的表达定性研究。结果表明，Cox-1在早期妊娠兔子宫内膜中表达较平稳，呈组成型表达；在早期胚胎中各个时期均可以检测到Cox-1mRNA，表明它在早期胚胎发育过程中起作用。Cox-2在早期妊娠子宫内膜中的表达水平有很大差异，妊娠第l天表达水平较高，从第2天开始表达下降，到第6天表达又明显增加，第8天达到最高。Cox-2在囊胚之前的各个时期胚胎均未检测到，而在扩展胚泡和孵出胚泡中表达，Cox-2的时期特异性表达可能与兔胚泡孵出及胚胎着床等过程相关。     

CD58对妊娠早期山羊子宫局部细胞因子的调节

采用IL-2的生物学测定方法，IL-4、TGF-β1、TGF-β2试剂盒等方法，对正常妊娠组山羊妊娠早期（15-19d)子宫局部细胞因子IL-2、IL-4、TGF-β、TGF-β2水平（活性）的变化规律进行了研究，结果发现，妊娠早期山羊子宫两侧局部细胞因子水平（活性）无显著性差异，IL-2活性先上升，后出现下降趋势；IL-4水平一直呈上升趋势；TGF-β1水平较高，但呈不规则曲线变化；TGF-β2先上升，后趋于平稳，并保持在较高水平。证明妊娠早期山羊子宫局部细胞因子分泌及活性有一动态变化规律。对CD58处理后山羊妊娠16-18d子宫局部上述细胞因子水平（活性）与同期正常妊娠相比的变化情况的研究发现，CD58极显著抑制IL-2的产生，而明显促进IL-4的产生，对TGF-β2的产生具有一定促进作用，而对TGF-β1无影响，证明CD58对妊娠早期山羊子宫局部细胞因子的产生具有调节作用。     

孕酮在反刍动物早期妊娠中的免疫耐受作用

孕酮的内分泌调节与免疫功能对动物早期妊娠建立和维持十分重要。目前,在反刍动物生产中,胚胎丢失、早期流产等问题一直困扰着养殖户,而孕酮引起的免疫耐受机制还不很清楚。作者通过介绍孕酮的来源及作用方式、孕酮与机体免疫、孕酮介导妊娠免疫耐受等内容,阐述了孕酮在反刍动物早期妊娠中的免疫耐受作用,为孕酮在妊娠免疫耐受方面的研究提供理论参考。