无刺蜂蜂胶乙醇提取物的体外抗氧化及抗炎活性

【目的】 无刺蜂(stingless bees)是热带和亚热带地区重要的授粉昆虫之一,以尾部无蛰针为典型特征,其蜂胶采集量较意大利蜜蜂（ Apis mellifera ligustica ）更多,然而其蜂胶活性研究却相对匮乏。本文以来源于马来西亚无刺蜂 ( Heterotrigona itama )采集蜂胶的乙醇提取物(ethanol extract of H. itama propolis, EEHI)为研究对象,旨在探究其体外抗氧化和抗炎活性。【方法】 采用福林酚法和硝酸铝法测定EEHI中总酚酸和总黄酮含量,并采用DPPH和ABTS ^+·自由基清除能力评价EEHI的体外抗氧化能力;在此基础上,采用细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7炎症模型,通过CCK-8法检测EEHI对细胞相对存活率的影响,在保证EEHI对细胞无细胞毒性作用基础上,分别采用Griess法和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术评估EEHI对LPS诱导的RAW 264.7细胞中炎症介质一氧化氮（NO）释放量的影响以及其对炎症因子（ IL-1β 、 IL-10 和 INOS ）和抗氧化基因（ HO-1 ）信使RNA表达的影响;进一步利用免疫印迹和免疫荧光方法,以NF-κB炎症信号通路为切入点,研究EEHI对LPS诱导巨噬细胞中p-IκΒ α 和IκΒ α 蛋白表达以及NF-κB-p65蛋白移位的影响,从而探究EEHI潜在的抗炎机理。 【结果】 EEHI中总酚酸和总黄酮含量分别为54.70 mg GAE·g^-1和116.20 mg QE·g^-1;DPPH和ABTS^+·自由基清除能力IC₅₀值分别为275.60和 284.00 μg·mL^-1。EEHI对RAW 264.7细胞的安全浓度为0—40 μg·mL^-1。在LPS诱导的Raw 264.7细胞炎症模型中,相对于LPS刺激组,0—40 μg·mL^-1的EEHI以浓度依赖方式显著地抑制了LPS诱导的RAW 264.7细胞中NO的释放量,且降低了细胞中炎症因子 IL-1β 、 IL-10 和 INOS 的基因表达量,并增强了抗氧化基因 HO-1 的表达。进一步研究发现,0—40 μg·mL^-1的EEHI以浓度依赖方式显著抑制了LPS诱导的RAW 264.7细胞IκΒ α 蛋白的磷酸化,且40 μg·mL^-1的EEHI显著降低了NF-κB-p65蛋白的核移位现象,因此推测EEHI可能是通过抑制LPS诱导的NF-κB信号通路的激活进而发挥了体外抗炎活性。 【结论】 无刺蜂蜂胶乙醇提取物中含有大量多酚类化合物,具有较好的抗炎和抗氧化效果,极具开发利用价值。     

大果藤黄乙醇提取物的降血脂与抗氧化性

为充分挖掘大果藤黄的药用功能,利用超声波辅助提取大果藤黄果的活性成分,通过两性霉素B-细胞模型观察大果藤黄乙醇提取物(EG)对细胞内胆固醇生物合成的抑制作用,检测中国仓鼠卵细胞(CHO)的存活率;采用灌胃血脂康和不同剂量的EG建立高脂大鼠模型,测定血清、肝脏和心脏中的胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白以及磷脂含量。结果表明:EG能明显抑制胆固醇生物合成,不同治疗组能明显降低血清、肝脏和心脏中的胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度胆固醇(LDH)的含量和增加高密度胆固醇(HDL)和磷脂的含量;同时,EG也能明显降低肝组织中的MDA含量和提高SOD、CAT和GSH含量。大果藤黄的乙醇提取物具有较好的降血脂和抗氧化效果。     

丹参须根乙醇提取物抗氧化及抑真菌活性研究

以没食子酸为标准品,对丹参须根乙醇提取物各萃取物中酚性化合物含量进行测定,并采用DPPH.法对各萃取物进行自由基清除实验;以3种植物病原真菌为供试菌,采用离体实验方法对丹参须根乙醇提取物各萃取物进行抑菌效果研究。结果表明,(1)石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及水溶物5部分的酚性成分含量依次为2.74%、11.11%、51.48%、31.80%、1.69%。(2)抗氧化实验显示,各部分清除DPPH.的IC50值分别为210.00、122.00、6.00、42.001、0 277.00μg.mL-1。(3)相关性分析表明,丹参须根乙醇提取物各萃取部分的抗氧化活性主要源于其中的酚性化合物。(4)在浓度为1 mg.mL-1时,石油醚萃取相抑菌效果最好,对番茄灰霉、棉花立枯、苹果炭疽3种病原菌抑菌率为81.44%、85.58%、82.73%。(5)不同浓度石油醚萃取相对相同病原菌的抑菌效果差异显著,对番茄灰霉、棉花立枯、苹果炭疽病原菌的72 hEC50值分别为0.361 5、0.422 1、0.270 8 mg.mL-1。     

蟾酥醇提取物的体外抗炎作用研究

为了考察蟾酥醇提取物的体外抗炎作用,用LPS诱导RAW 264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞建立细胞炎症模型,采用Griess法测定蟾酥醇提取物对细胞上清液中的NO水平,ELISA法测定TNF-α、ILlβ、IL-6含量,荧光法测定细胞内ROS水平。结果显示,蟾酥醇提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞所分泌的炎症因子(NO、TNF-α、IL-1β、IL-6)有明显的抑制作用,与空白对照组相比明显降低,同时蟾酥醇提取物极显著降低LPS诱导的细胞内ROS水平(P0.01)。由此推测,蟾酥醇提取物通过抑制炎症因子、降低细胞内活性氧水平减轻细胞的炎症反应,具有良好的抗炎作用。     

露兜果实的抗氧化及抗菌活性研究

采用分光光度法,考察露兜果实浸膏的多酚含量及其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵（ABTS）自由基和羟自由基的清除活性,并采用生物自显影技术．考察露兜果实浸膏对马铃薯炭疽病菌、草莓炭疽病菌及黄柏炭疽病菌的抑制作用。结果表明：露兜果实浸膏中多酚含量为152．6Ia,g／mg,对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基均具有一定的清除活性,且呈现量效关系：此外,还发现其对马铃薯炭疽病菌和草莓炭疽病菌的生长均有一定的抑制作用。     

蜂王浆高产蜜蜂与意大利蜜蜂哺育蜂唾液腺蛋白质组分析

【目的】比较蜂王浆高产蜜蜂（浆蜂,Apis mellifera liguatica）和意大利蜜蜂（意蜂,Apis mellifera liguatica）哺育蜂头唾腺、胸唾腺的蛋白质组差异,揭示唾液腺调控蜂王浆生产的分子基础,为解析浆蜂蜂王浆高产机理提供依据。【方法】解剖浆蜂、意蜂哺育蜂头唾腺和胸唾腺,提取蛋白质、液内酶切并进行液相色谱与串联质谱蛋白质组分析。采用MaxQuant软件对质谱数据定量和定性分析,利用Perseus软件对结果进行生物信息学分析。使用SignalP预测分泌性蛋白。利用ClueGO软件对唾液腺蛋白质组进行生物学进程和代谢通路富集分析。【结果】浆蜂和意蜂哺育蜂唾液腺共鉴定到2 335个蛋白,其中头唾腺1 823个,胸唾腺1 922个。浆蜂、意蜂头唾腺和胸唾腺核心蛋白表达谱相似,主要参与RNA代谢、核酸代谢、ATP代谢、蛋白质的翻译、翻译调控和分解代谢,为腺体行使生物学功能提供了必要的代谢能和核酸、蛋白质等原料。浆蜂、意蜂哺育蜂头唾腺和胸唾腺主成分分析（PCA）显示二者唾液腺分子基础在选育过程中出现了一定程度的分化。意蜂、浆蜂头唾腺分别上调表达254和333个蛋白,意蜂小分子、碳水化合物代谢等通路上调,浆蜂有机氮化合物合成、细胞氧化还原稳态、氨基酸代谢、氧化还原等通路上调,证明浆蜂头唾腺细胞蛋白质合成、氨基酸代谢旺盛、供能加强。意蜂、浆蜂胸唾腺分别上调表达412和162个蛋白,意蜂氧化磷酸化、翻译调控等通路上调,浆蜂氧化磷酸化、对有毒物质的反应等通路上调,说明浆蜂胸唾腺细胞抗逆水平提高。浆蜂、意蜂唾液腺共鉴定到43个分泌性蛋白,其中有15个也在蜂王浆中得到鉴定,蜂王浆主蛋白1、2、3、4、5、7同时在头唾腺和胸唾腺中检出,表明头唾腺和胸唾腺均参与了蜂王浆主蛋白的合成;参与花蜜转化的α-葡萄糖苷酶和参与化学信息素合成与释放的气味结合蛋白3、13、17、21同时在头唾腺和胸唾腺中检出,为花蜜转化和信息素合成奠定了基础。蜂王浆主蛋白1、2、3、7,昆虫储存蛋白70a、110,气味结合蛋白3、13、17、21以及与幼虫先天免疫紧密相关的转铁蛋白、载脂蛋白III样蛋白均在浆蜂唾液腺中高表达,说明浆蜂唾液腺信息素和蜂王浆蛋白质合成较意蜂旺盛。【结论】浆蜂、意蜂唾液腺具有相似的核心蛋白质组以保证蜂王浆蛋白质、信息素和转化酶的合成与分泌。经过长期选育,浆蜂、意蜂唾液腺分子基础出现差异,浆蜂哺育蜂唾液腺较意蜂蛋白质合成、氨基酸代谢旺盛,细胞供能、抗逆性加强且分泌性蛋白普遍在浆蜂唾液腺上调表达,为浆蜂提供了更加持久和高效的蛋白质合成系统,促成了蜂王浆的高产。     

卷柏乙醇提取物对14种植物病原菌的抑制活性

采用牛津杯法及琼脂打孔法测定卷柏(Selaginella tamariscina)乙醇提取物对4种植物病原细菌[柑橘溃疡病菌(Xanthomonas carotovora pv.citri、姜瘟病菌(Ralstonia solanacearum)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)、大白菜软腐病菌(Erwinia carotovora pv.carotovora)]的抗菌活性.结果表明,在浓度为1 mg/mL时,卷柏乙醇提取物对4种供试细菌具有较好的抑制活性,抑菌圈直径13.6～15.3mm,对姜瘟病菌和水稻白叶枯病菌的最低抑菌浓度为125 μg/mL.采用生长速率法测定提取物对10种植物病原真菌[香蕉酸腐病菌(Geotrichum candidum Link ex Pers)、苹果轮纹病菌(Physalospora nasei)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、苹果腐烂病菌(Valsa mli)、玉米小斑病菌(Helninthosporiun maydwas)、葡萄黑痘病菌(Sphaceloma ampelinum)、苹果斑点落叶病菌(Alternarial ternate f.sp.mali)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)、番茄棉腐病菌(Pythium ultimum)]的抑制作用,发现除对苹果轮纹病菌的抑制效果较好外(抑制率为56.3％),对其余供试菌的抑制率均低于50％.     

坝上油菜蜂花粉中多糖和乙醇提取物对亚硝酸盐清除作用的研究

目的研究油菜蜂花粉中多糖和乙醇提取物对亚硝酸盐的清除作用.方法采用水提醇沉法对油菜蜂花粉中多糖进行提取,采用超声法制备乙醇提取物.并用紫外分光光度法测定多糖和乙醇提取物中黄酮的含量及其对亚硝酸盐的清除作用.结果测定油菜蜂花粉中黄酮含量为2.43%.多糖含量为10.79%.花粉乙醇提取物浓度为2.333mg/ml时对亚硝...     

九里香叶的抗炎镇痛作用研究

采用小鼠扭体试验、热板法、二甲苯致耳朵肿胀法和角叉菜胶致足肿胀法研究了九里香[Murrayaexotica(L.)]叶的镇痛抗炎作用。结果表明,九里香叶醇提物可有效抑制醋酸致小鼠的扭体反应,延长小鼠的痛阈值,显著抑制二甲苯及角叉菜胶诱导的肿胀。表明中药九里香叶醇提物具有显著的抗炎、镇痛药理学作用,为中药九里香的二次开发提供了有益的科学依据。     

侧柏叶乙醇提取物抗氧化性的研究

采用分光光度法测定不同质量浓度的侧柏叶乙醇提取物对羟基自由基、超氧自由基的清除能力及其还原能力。结果表明:随着侧柏叶乙醇提取物质量浓度的增加,还原能力、清除羟基自由基和超氧自由基能力都随着增强,所有提取物清除羟基自由基的活性均高于超氧自由基。此外在高实验质量浓度下,50%乙醇提取物清除羟基自由基的能力最强,还原能力和清除超氧自由基的能力由强到弱依次为50%乙醇提取物、95%乙醇提取物、70%乙醇提取物。     

蔷薇红景天提取物不同极性部位体外抗氧化活性研究

[目的]通过体外试验初步研究蔷薇红景天（RhodiolaroseaL.）提取物的抗氧化活性。[方法]采用有机溶剂萃取法将蔷薇红景天提取物分为乙酸乙酯相、正丁醇相和水相3个不同极性部位,以还原能力及清除羟自由基（.OH）、超氧阴离子自由基（O2-.）和亚硝酸根离子（NO2-）为评价指标初步研究其体外抗氧化活性。[结果]蔷薇红景天提取物的不同极性部位均有抗氧化活性,其抗氧化效果因反应体系不同而不同,且不同极性部位的抗氧化活性有差异。乙酸乙酯相和正丁醇相的还原能力及清除O2-.和.OH的能力均强于水相,而水相对NO2-的清除效果好于乙酸乙酯相和正丁醇相。[结论]蔷薇红景天提取物具有较强的抗氧化活性,可作为天然抗氧化剂的良好来源。     

野生无刺蜂(Trigona ventralis Smith)生物学特性及繁养研究初报

无刺蜂是重要的热带植物传粉昆虫之一,为更好地利用野生无刺蜂进行授粉,对其生物学特征及过箱饲养进行了初步的研究,研究结果证明野生无刺蜂可以在北方进行过箱饲养,同时对无刺蜂应用前景进行了展望。     

阿尔泰瑞香提取物的体外抗炎及抗氧化活性

目的 探讨阿尔泰瑞香二氯甲烷提取物（Da-Dm）的体外抗炎及抗氧化活性。方法 以不同浓度（1、6、30 μg/mL）的Da-Dm作用于脂多糖（LPS,1 μg/mL）诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用CCK-8法测定Da-Dm对细胞增殖的影响;Griess法检测细胞上清液中一氧化氮（NO）的释放量;ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）的分泌量。以维生素C为对照,采用FRAP法、DPPH法评价Da-Dm总抗氧化能力。结果 Da-Dm在浓度为30 μg/mL及以下时对RAW264.7细胞增殖没有影响。与LPS组比较,1~30 μg/mL的Da-Dm可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的含量（P<0.05,P<0.01）,并呈现浓度依赖性。Da-Dm对DPPH自由基有较好的清除能力,其清除率的IC50为318.1 μg/mL,在FRAP实验中其对Fe²⁺离子具有较强的还原能力。结论 Da-Dm可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,它的抗炎作用可能与抑制NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的释放有关。Da-Dm具有较好的抗氧化活性。     

刺山柑果实醇提物正丁醇部位提取物抗炎镇痛效果分析

【目的】 研究刺山柑乙醇提取物正丁醇萃取部位的抗炎镇痛活性。【方法】 以总黄酮提取量为指标采用超声波辅助提取法并结合响应面优化乙醇提取物最佳工艺,将乙醇提取物浸膏通过萃取得到正丁醇部位。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性分析正丁醇萃取部位抗炎效果;以热板法和醋酸扭体考察正丁醇萃取部位镇痛效果。【结果】 正丁醇部位高剂量组、中剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用(P＜0.01);正丁醇部位高剂量组、中剂量组对小鼠毛细血管通透性有明显抑制作用(P＜0.01);正丁醇部位高剂量组、中剂量组可显著提高小鼠热板痛阈值,正丁醇部位高剂量组、中剂量组能明显减少醋酸所致小鼠扭体次数(P＜0.01)。【结论】 刺山柑果实醇提物正丁醇部位提取物具有潜在的抗炎镇痛作用。     

乌药总生物碱抗炎镇痛效果研究

用索氏法氨水-氯仿提取得到乌药[Lindera aggregata(Sims)Kosterm]总生物碱,采用p-二甲苯致小鼠耳廓肿胀法和角叉菜胶致后足跖肿胀法、小鼠热板法和乙酸致小鼠扭体法等方法来评估乌药总生物碱的抗炎镇痛效果。结果表明,乌药总生物碱有缓解p-二甲苯致小鼠耳廓肿胀及角叉菜胶致后足跖肿胀的效果,能显著减少小鼠在热板上舔后足的次数和减少乙酸致小鼠扭体的次数,镇痛效果显著。     

转录因子Relish在斑节对虾不同发育阶段的表达分析

对克隆获得的转录因子NF-κB/Rel家族成员Relish基因在斑节对虾发育阶段的表达特征进行分析。所获的PmRelish是Relish基因的亚型之一,与凡纳滨对虾LvRelish高度相似,结构域组成相同,其中RHD、IPT和DD结构域均具有100%的同源性,ANK结构域的相似性也高达97.7%。NF-κB/Rel家族进化树分析显示,PmRelish与对虾、昆虫等节肢动物的Relish聚为一支,并与P105(NF-κB1)和P100(NF-κB2)最为相近。PmRelish的表达在4个幼体发育时期都存在显著性差异,其中糠虾阶段表达量最高。PmRelish在不同发育阶段的精巢和卵巢中的表达特征相似,即未成熟期的表达相对较低,其中PmRelish在10～12 cm体长雄虾精巢中表达量最高,卵巢中的表达则在成熟期(V期)最高,为卵原细胞期的14.3倍。     

小鼠NF-κB p65亚基真核表达质粒的构建

[目的]构建小鼠NF-κB p65亚基真核表达质粒。[方法]扩增NF-κB p65亚基,然后构建其真核表达质粒(m-NF-κB-p65-p EGFPC1),并通过PCR和测序验证重组质粒中p65亚基的正确性;然后提取无内毒素的质粒,转染Hep G2细胞,通过观测重组蛋白所融合的绿色荧光蛋白,检测目的蛋白表达情况。[结果]PCR产物的电泳结果显示,成功扩增了小鼠NF-κB p65亚基,成功构建了小鼠NF-κB p65亚基的真核表达质粒,将其命名为m-NF-κB-p65-p EGFP-C1。在真核细胞中,重组质粒可以成功表达小鼠NF-κB p65亚基融合绿色荧光蛋白的目的蛋白。[结论]重组质粒NF-κB-p65-p EGFP构建成功,为后续开展NF-κB信号通路的相关研究奠定了基础。     

柿子皮醇提物中多酚含量及其抗氧化活性

以没食子酸为标准品,采用Folin-Ciocateau法对柿子皮醇提物的乙酸乙酯、正丁醇萃取物及水溶物三部分中的多酚含量进行测定,并用DPPH·法对各萃取物进行抗氧化活性测定.结果表明,①乙酸乙酯、正丁醇萃取物和水溶物三部分的多酚含量分别为36.70、4.96和9.51 mg/g.②抗氧化试验显示,三部分清除DPPH·...     

漆黄素对单增李斯特菌致BeWo细胞炎症反应的抑制作用

试验采用单增李斯特菌感染Be Wo细胞建立实验模型,利用MTT方法检测漆黄素细胞毒性,利用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫蛋白印迹(Western Blot)试验分别验证了漆黄素抑制炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达,以及核转录因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)信号转导通路的影响。结果发现:漆黄素显著减弱了炎性细胞因子的表达,同时抑制了NF-κB的激活,这说明漆黄素对单增李斯特菌致Be Wo细胞炎症反应的抑制作用显著。