广西猪源产肠毒素大肠杆菌毒力因子及多重耐药性分析

本研究旨在探究广西某猪场可能存在的病原菌及其致病的主要原因。试验采用细菌分离纯化、形态学鉴定、生长曲线测定、生化分析及药敏试验等进行细菌的分离鉴定,应用PCR技术对菌株16S rRNA、毒力基因及耐药基因进行检测。结果表明,该由病料分离的菌株为无芽孢、有菌毛、两端钝圆的粗短杆状的革兰氏阴性菌,其繁殖能力强、生长迅速,疑似为大肠杆菌。16S rRNA扩增结果显示,出现大小为1 474 bp的条带,测序结果表明其与大肠杆菌的同源性可达99%。该菌株对31种常见抗菌药物表现出极强的耐药性,对庆大霉素、替米考星、四环素、恩诺沙星、青霉素、林可霉素、磺胺甲噁唑等均呈现较高的耐药水平,耐药率高达87.10%(27/32),仅对阿米卡星、黏菌素2种药物敏感。毒力因子检测共鉴定致病岛FyuA、肠毒素STb和LT及黏附素F41和K88共5种毒力因子,检出率为35.70%(5/14)。扩增出β-内酰胺酶类bla_(TEM)和bla_(OXA)、四环素类tet(A)、磺胺类Sul2、氨基糖苷类aadA1和aac(3′)-Ⅱa、喹诺酮类GyrA、GyrB和ParC及氯霉素floR共10种耐药基因,检出率为66.70%(10/15),且耐药基因的检出与耐药表型呈正相关。综上,该菌株含多种毒力因子,耐药型复杂,多重耐药性情况严重,需采取相应的预防措施,防止蔓延和传播。     

河北地区水貂源大肠杆菌的分离鉴定及致病性与耐药性研究

为分析河北地区水貂源大肠杆菌的致病性与耐药性,本研究对河北地区送检病死水貂采集组织样品,经分离鉴定、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析,共分离得到24株水貂大肠杆菌。对分离菌株进行致病性试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因检测。结果显示,24株大肠杆菌感染小鼠后小鼠死亡率为20%～100%;24株分离菌中有22株检测到毒力基因,fimC毒力基因检出率最高,为70.83%(17/24);分离的24株株大肠杆菌耐药性较强,对替米考星、土霉素、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、复方新诺明耐药的菌株占80%以上,对头孢曲松最敏感,敏感菌株占66.67%(16/24),且分离菌均具有多重耐药性,耐5种以上药物的菌株占比高达100%;24株大肠杆菌均检测到耐药基因,耐药基因检出率为4.17%～79.17%,其中氨基糖苷类耐药基因addA1(79.17%)、喹诺酮类耐药基因gyrA(75%)、gyrB(70.83%)检出率较高,β-内酰胺类耐药基因ctx-M(20.83%)和SHV(4.17%)检出率较低;未检测到tetA、tetC、sul1、mefA耐药基因。上述结果表明,分离菌对小鼠均具有一定的致病力,且毒力基因检出数越多的菌株对小鼠的致病力越强;β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类的耐药基因与耐药表型基本相符,分离菌的其余耐药基因与耐药表型不符,提示分离的大肠杆菌可能存在其他耐药机制。本研究为河北地区水貂大肠杆菌病的防治提供参考依据,为大肠杆菌的致病机制和耐药机制的研究奠定基础。     

河南省部分规模化奶牛场奶牛乳房炎源大肠杆菌耐药性分析与耐药基因检测

为了解规模化奶牛场乳房炎源大肠杆菌耐药现状和耐药基因分布情况,试验对采自河南省部分规模化奶牛场感染乳房炎奶牛的852份乳汁样本进行大肠杆菌的分离鉴定与16S rRNA基因PCR鉴定,对分离的大肠杆菌菌株进行药敏试验及耐药基因检测。结果表明：共分离鉴定224株大肠杆菌,分离率为26.29%。分离菌株对11种抗生素均有不同程度耐药性,其中对恩诺沙星、氟苯尼考、环丙沙星、四环素、阿莫西林、阿米卡星耐药比较严重,耐药率为63.39%～82.14%;对头孢他啶、头孢曲松耐药率相对较低,分别为22.32%、27.67%;对亚胺培南最敏感,耐药率为0。耐3种及以上抗生素菌株有193株,占86.16%。对不同奶牛场的85株大肠杆菌分离株进行耐药基因检测,共检测到11种耐药基因,未检出耐药基因tetM、bla_VIM和bla_NDM。酰胺醇类耐药基因floR携带率最高(为61.18%),喹诺酮类耐药基因oqxB(42.35%)、qnrS(44.71%)携带率和四环素类耐药基因tetA(30.59%)、tetB(38.82%)携带率相对较高,多重耐药基因检出率为51...     

牛乳房炎致病性大肠埃希氏菌耐药性、毒力基因与生物被膜分析

为分析宁夏、甘肃部分地区奶牛乳房炎致病性大肠埃希氏菌(E.coli)耐药性、耐药基因、毒力基因、生物被膜及系统发育分型，对临床乳房炎奶牛乳样中分离鉴定的54株E.coli用肉汤稀释法、聚合酶链反应(PCR)和结晶紫染色法，对其进行耐药性、耐药基因、毒力基因、系统发育分型及生物被膜检测。结果表明，54株E.coli对头孢噻肟耐药率高达100%,对氨苄西林、四环素、氟苯尼考、庆大霉素、头孢吡肟、替加环素、恩诺沙星，耐药率依次为74.07%、57.40%、24.07%、18.51%、11.11%、11.11%、5.56%,对美罗培南均表现为敏感；β-内酰胺类耐药基因中bla_CTX基因检出率最高94.44%,bla_TEM基因检出率为33.33%;四环素类耐药基因中tetB检出率为55.56%,tetA、tetC检出率为1.85%、3.7%,耐药基因高检出率与耐药性表现一致。毒力基因检测结果显示，菌毛黏附素fasA为31.48%,α溶血素hlyA为16.67%,志贺毒素stx1为7.4%;系统发育分型结果显示A型是该地区主要的流行菌株，其携带毒力因子的...     

腹泻绵羔羊源大肠杆菌耐药性及LEE毒力岛部分相关基因的检测

为了解宁夏地区腹泻绵羔羊源大肠杆菌的耐药和肠细胞脱落位点(locus enierocyte effacement, LEE)毒力岛相关基因携带情况，试验从宁夏地区4个规模化羊场采集腹泻绵羔羊肛拭子样本120份，采用常规微生物分离培养方法对大肠杆菌进行分离培养，并进行16S rRNA基因PCR鉴定；对鉴定为大肠杆菌的分离菌株运用K-B纸片扩散法进行药敏试验，对分离菌株进行LEE毒力岛基因ler、eaeA PCR检测。结果表明：共分离得到87株大肠杆菌，分离菌株对恩诺沙星、复方新诺明、红霉素、四环素的耐药率分别为44.83%、29.89%、28.74%、27.59%,大于26.00%;对头孢唑啉、阿莫西林、氨苄西林、头孢拉定的耐药率次之，处于10.00%～18.00%之间；对链霉素、头孢氨苄、哌拉西林等12种药物的耐药率小于10.00%。LEE毒力岛基因ler、eaeA的检出率分别为83.91%和29.89%,二者同时检出率为25.29%。说明宁夏地区腹泻绵羔羊源大肠杆菌耐药率较低，携带LEE毒力岛可能是其条件性致病的原因之一。     

苏北及周边地区水禽致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为研究近年来禽致病性大肠杆菌(APEC)的耐药性,本研究室于2018年～2019年对江苏北部及周边地区228份水禽组织病料样品(鸭头、鸭肝样品;鹅头、鹅肝样品)进行了细菌分离培养和APEC的PCR鉴定。对分离到的APEC菌株采用K-B纸片法进行药敏试验;同时对其碳青霉烯类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、磺胺类、粘菌素类、喹诺酮类、四环素类7大类共计16种耐药基因进行了PCR检测。结果显示,在分离到的细菌中,共鉴定出50株APEC菌株。药敏试验结果显示,APEC分离菌株对四环素、氨苄西林、氟苯尼考耐药性较强,耐药菌株分别占100%、96%、86%;对头孢噻肟、恩诺沙星、链霉素、氧氟沙星中等耐药,耐药菌株分别占76%、70%、58%、36%;对美罗培南、呋喃妥因、丁胺卡那霉素的耐药性较低,耐药菌株仅分别占4%、4%、6%。其中多重耐药性较严重,耐4、5、6、7种抗生素的现象较普遍。在对其β-内酰胺类的耐药基因检测中,CTX-M、TEM、SHV的检出率分别为60%、58%、20%;氨基糖苷类:ant(3')-I a、aac(3')-I b的检出率分别为0,50%(25/50);磺胺类sul I的检出率为82%(41/50);粘菌素类mcr-1的检出率为6%(3/50);喹诺酮类:qnrB、parC的检出率分别为68%(34/50)、98%(49/50);四环素类:tetA、tetB的检出率分别为66%(33/50)、10%(5/50)。值得注意的是,从50株APEC分离菌中,鉴定出3株携带粘菌素类耐药基因mcr-1和2株携带碳青霉烯类耐药基因NDM的APEC,进一步经改良Hoge试验检测该2株菌均产碳青霉烯酶。表明这两株菌均耐美罗培南等碳青霉烯类抗生素,也进一步表明分离的APEC耐药情况的严重性。本研究为养禽场相关疫病的用药提供了参考依据。     

一株松鼠猴源粪肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了确定引起松鼠猴死亡的致病菌株及其耐药性情况,试验采用病原菌分离、革兰氏染色、生化试验、16S rRNA PCR扩增鉴定、致病性试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因扩增试验等方法对致病菌进行了研究。结果表明:该菌革兰氏染色阳性,马尿酸盐、V-P、6.5%Na Cl等生化反应呈阳性,阿拉伯糖、蔗糖等生化反应呈阴性;16S rRNA基因BLAST比对,与粪肠球菌相似性为100%;致病性试验显示,该菌株致病性不是很强;该菌株对苯唑西林、红霉素、复方新诺明、四环素等耐药,对青霉素G、呋喃妥因敏感,对万古霉素、米诺环素中等耐药;毒力基因hyl、asal、gelE、cylA、esp、acm和耐药基因TEM、ant(6)-I、ermB、aac(6')-aph(2″)、TetM扩增试验均为阳性。说明该菌株为粪肠球菌(Enterococcus faecalis),具有较强耐药性,但致病性不是很强,可能与毒力基因和耐药基因的高阳性率有关。     

吉林省猪源沙门菌毒力基因检测及耐药性分析

为了解吉林省规模化猪场猪群中沙门菌的携带、毒力基因分布及耐药性等情况,本试验于2013年间采集吉林省规模化猪场猪直肠拭子540份,经细菌分离、生化鉴定、分子生物学鉴定,共检出猪源沙门菌18株,检出率3.33%,同时对菌株进行药敏试验、毒力基因检测及致病性试验。结果显示,18株分离株对链霉素耐药率为72.22%,对四环素耐药率为72.22%,其他药物耐药率普遍高于22.2%,且多重耐药严重。此外,共检测10种毒力基因,其中sseC、spvA、spvR三种基因检出率分别为72.2%、72.2%、83.3%。小鼠致病性试验中,有11株分离株对小鼠具有较强的致病性(61.1%)。表明分离沙门菌存在多重耐药现象,且致病力的增强可能与毒力岛和毒力质粒的存在有关。     

山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品，采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定，用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性，采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示，从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌；大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%，多重耐药率为15.5%，其中对多黏菌素耐药率为52.2%，对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%，而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示，β-内酰胺类耐药基因中bla_TEM基因携带率为100%，其中全部为bla_TEM-1基因，bla_CTX-M基因携带率为32.4%，其中主要为bla_CTX-M-15基因，没有检测到bla_SHV、bla_OXA基因；多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%；喹诺酮类耐药基因中aac（6'）-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%，qnrB基因携带率为20.8%，没有检测到qnrA和qnrC耐药基因；对8种毒力基因检测分析结果显示，仅Hly毒力基因没有被检出，Ecs3703、Irp2基因的检出率较高，分别为90.1%和63.4%，71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子，检出率为15.5%，11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构，最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明，山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重，携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌，Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用，可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。     

新疆阿克苏地区奶牛乳房炎源大肠杆菌毒力基因检测及耐药性分析

为了解新疆阿克苏地区致奶牛乳房炎性大肠杆菌的耐药性及其耐药基因的流行状况,从患有乳房炎的奶牛病例中分离出20株大肠杆菌,采用K-B(Kirby-Bauer)法对其耐药性进行了检测,对其耐药基因进行了分子生物学检测。结果表明:分离菌株对氨苄西林的耐药性最高,耐药率达到了50%,对多西环素、四环素和链霉素的耐药性次之,耐药率为40%,而对环丙沙星、阿米卡星、诺氟沙星则比较敏感;能够检出的毒力基因为astA、escV、eaeA、sepA和hlyA,能够扩增出的耐药基因为tetB、tetC、GyrA、GyrB和ParC。说明新疆阿克苏地区奶牛乳房炎源大肠杆菌主要携带四环素和氟喹诺酮类耐药基因,耐药菌株的耐药基因型与耐药表型呈现正相关。     

伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及毒力和耐药性分析

为探究南宁伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的毒力和耐药情况，本研究采集犬、猫粪便拭子，通过分离培养、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、khe基因、毒力基因及耐药基因等方法对细菌特性进行分析。结果显示，分离的菌株中有4株能在麦康凯培养基上形成液状菌落，轻挑拉丝且镜检为短杆状革兰氏阴性菌，疑为肺炎克雷伯氏菌。16S rRNA测序结果显示，分离菌与肺炎克雷伯氏菌同源性达99%，同时肺炎克雷伯氏菌特异性基因（khe）阳性。其中，分离株GXKP-C14、GXKP-D15对大部分临床常用抗菌药物敏感，分离株GXKP-D1则表现出高水平多重耐药，分离株GXKP-D4耐药性稍低于GXKP-D1，对临床常用药氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、四环素、多西环素、呋喃妥因、复方新诺明表现耐药，对头孢吡肟、美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、多黏菌素等敏感。部分菌株携带tet（A）、QnrS、bla_SHV、sul2、mcr-1等耐药基因和WabG毒力基因。本研究结果为犬、猫源肺炎克雷伯氏菌病的检测、诊断及治疗提供了试验依据。同时，黏菌素耐药基因mcr-1的检出将为多黏菌素的耐药性控制和合理使用提供参考。     

屠宰场沙门氏菌耐药性分析和毒力基因检测

【目的】研究广东省茂名地区屠宰环节猪肉中携带的沙门氏菌的耐药性和毒力特征,为该地区食源性沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供依据。【方法】从广东省茂名地区屠宰场采集的猪肉、脾脏、肝脏样本中分离到19株沙门氏菌,采用K-B药敏纸片法检测其对β-内酰胺类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类和磺胺类抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测β-内酰胺类耐药基因(bla_TEM、bla_OXA-1、bla_SHV)、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrS、qnrB)、氨基糖苷类耐药基因(aadA1、aac(6′)-Ⅰb、rmtB)、四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC)、酰胺醇类耐药基因(Cat1、floR)、磺胺类耐药基因(SulⅠ、SulⅡ、SulⅢ)和10种毒力基因(mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB、spvR、spvA、spvB、spvC、spvD)的携带情况。【结果】19株沙门氏菌耐药严重,对四环素、多西环素、氯霉素、氟苯尼考、磺胺异噁唑的耐药率均>50%,对四环素、多西环素和氯霉素的耐药率最高...     

贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测

为考察贵州省猪源大肠杆菌对四环素类抗菌药的耐药情况和耐药基因的流行情况,本试验采用微量肉汤稀释法测定783株分离于贵州省8个地区规模化养殖场的猪源大肠杆菌对6种四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法检测其携带四环素耐药基因情况。结果显示,猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环素和替加环素的耐药率分别为97.3%、97.6%、96.6%、89.3%、48.0%和34.2%;土霉素和四环素的耐药水平最高,其MIC₅₀分别为256 和128 μg/mL,而MIC₉₀均为512 μg/mL,四环素的耐药倍数高于土霉素;米诺环素和替加环素的耐药水平最低,其MIC₉₀分别为32和4 μg/mL,耐药倍数相同;耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD和tetM的检出率分别为92.60%、41.50%、58.75%、58.62%和70.10%;耐药菌株中主要以tetA基因为主,且大多数以携带复合基因的形式存在;大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素和米诺环素的耐药性分别与耐药基因tetB和tetM呈极显著相关（P<0.01）,tetD基因分别与对米诺环素和替加环素的耐药性呈极显著相关（P<0.01）。贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况十分普遍,尤其是四环素和土霉素,金霉素和强力霉素有高度耐药的趋势;外排泵是四环素类药物主要的耐药机制;在兽医临床上越来越严重的耐药情况与耐药基因的广泛存在有很大关系。     

河北省犊牛腹泻大肠杆菌致病性及耐药性分析

为确定河北省犊牛腹泻大肠杆菌的致病性与耐药性,本研究对2018年1月至2019年6月期间从河北省石家庄、保定、承德、唐山、廊坊的部分肉牛场腹泻犊牛样品中分离到的50株大肠杆菌进行了致病性试验、药物敏感性试验、毒力基因和耐药基因检测。结果显示:50株分离菌均对小鼠具有致病性,致病菌占比100%(50/50)。毒力基因fyuA、irp2、eaeA、ler检出率分别为68.0%、66.0%、34.0%、34.0%。50株分离菌均对15种抗生素中的2种及以上表现为耐药,对10种及以上抗生素耐药的菌株占比达34%(17/50);分离菌对土霉素、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、替米考星4种药物表现为高度耐药,耐药率分别为90%、90%、94%、100%。除四环素类tetD基因检出率为0外,其它耐药基因均有检出,其中四环素类tetC、氨基糖苷类aadA1、喹诺酮类gyrA、gyrB基因检测率高达100%。试验的50株大肠杆菌均具有较强的毒力和多重耐药性。本研究为河北省大肠杆菌所致犊牛腹泻病的防治提供了实验依据。     

一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验从甘肃肃南县某羊场死亡羊中分离出疑似某球菌菌株XCP,为进一步确定该致病菌株及其耐药性情况,进行了病原菌分离、革兰氏染色、生化试验、16S rRNA PCR扩增鉴定、小鼠致病力试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因扩增试验研究。结果发现,该菌革兰氏染色阳性,高盐、蜜二糖、蔗糖等生化反应阳性,VP、马尿酸盐、阿拉伯糖等生化反应阴性;16S rRNA基因PCR扩增后,进行BLAST比对,结果与GenBank中的屎肠球菌16S rRNA基因序列同源性为100%;小鼠致病力试验发现,该菌株具有很强的致病性;该菌株对β-内酰胺类抗生素苯唑西林、青霉素G,喹诺酮类抗生素诺氟沙星、环丙沙星、左氟沙星,以及四环素等高度耐药,对红霉素、万古霉素、克林霉素等抗生素敏感;毒力基因Asal、cylA、acm和耐药基因TetM、ant（6）-Ⅰ、aac（6'）-aph（2"）、ermB扩增均为阳性。结果表明,该菌为屎肠球菌（Enterococcus faecium）,具有较强的致病性和耐药性,可能与毒力基因和耐药基因的高阳性率有关。     

辽宁地区奶牛乳房炎源大肠杆菌毒力基因及耐药基因检测分析

为了掌握辽宁地区规模奶牛场乳房炎源大肠杆菌携带的毒力基因和耐药基因,为奶牛养殖业提供更好的乳房炎防制方案,本研究采用PCR检测方法对辽宁地区多个规模奶牛场临床奶牛乳房炎奶样中分离的66株大肠杆菌进行了4种毒力基因和4种耐药基因的检测分析。结果发现,66株大肠杆菌中仅有1株未检出相关目的基因,其余65株中最少检出2种目的基因,最多检出7种目的基因。其中,毒力基因stx2e、eaeA、K99和astA的检出率分别为56.1%、47.0%、34.8%和31.8%,双重毒力基因的检出率达到43.9%,以eaeA/stx2e基因型的检出率最高;耐药基因sul3、sul1、cmlA及aacA4的检出率分别为87.9%、83.3%、40.9%和28.8%,双重耐药基因的检出率为36.4%,以sul1/sul3基因型检出率最高;三重耐药基因的检出率为37.9%,以cmlA/sul1/sul3检出率最高。本研究结果证实,辽宁地区奶牛乳房炎源大肠杆菌携带磺胺类耐药基因和氯霉素类耐药基因的比率较高,与大肠杆菌的耐药性有较直接的关系,该结果对于辽宁地区奶牛乳房炎的防制具有重要的指导意义,更具有重要的公共卫生意义。     

Detection and Analysis of Virulence Genes and Drug Resistance Genes in E. coli Strains Isolated from Dairy Cows with Clinical Mastitis in Liaoning Region

In order to understand the virulence genes and drug resistance genes carried by E.coli strains from dairy cows with mastitis in large-scale dairy farms in Liaoning region, and also provide improved programs for control and treatment of mastitis to dairy farmers, 66 strains of E.coli isolated from milk of dairy cows with clinical mastitis in several large-scale farms in Liaoning region were examined to detect 4 virulence genes and 4 drug resistance genes using PCR methods. The results showed that none of the target genes was detected in only one strain, while at least 2 and up to 7 target genes were detected in the rest of 65 strains. The detection rates of the virulence genes stx2e, eaeA, K99 and astA were 56.1%, 47.0%, 34.8% and 31.8%, respectively. In addition, the detection rate of dual virulence gene reached 43.9%, in which the genotype with the highest detection rate was eaeA/stx2e. The detection rates of the drug resistance genes sul3, sul1, cmlA and aacA4 were 87.9%, 83.3%, 40.9% and 28.8%, respectively. And the dual resistance gene detection rate was 36.4%, in which the highest detection rate was sul1/sul3 genotype; Triple drug resistance gene detection rate was 37.9%, and cmlA/sul1/sul3 presented the highest detection rate. These results confirmed that the E.coli isolated from dairy cow mastitis in large-scale dairy farms in Liaoning region had high detecting rates of sulfonamide resistance genes and chloramphenicol resistance genes, which was directly related to the drug resistance of the E.coli. These results provided important guiding significance for the prevention and control of dairy cow mastitis in Liaoning region as well as the safety of public health.     

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of Pathogenic Enterococcus feacium of Sheep

To further identify the pathogenic strains and analyze their antibiotic resistance, the methods of pathogen isolating, the methods of Gram staining, biochemical tests and 16S rRNA PCR amplification, virulence tests, drug sensitive tests, virulence genes and resistance genes PCR amplification were used. The results showed that the strain was Gram-positive and revealed positive after reacting with 6.5% NaCl, melibiose, sucrose and etc., while revealed negative reactions with VP, hippurate, arabinose and etc.. It showed 100% similarity with Enterococcus feacium 16S rRNA gene sequence in GenBank after PCR amplification of 16S rRNA gene and BLAST alignment. It was found severe pathogenicity after virulence tests in mice. The strain was highly resistant to oxacillin, penicillin G of β-lactam antibiotics and norfloxacin, ciprofloxacin, levofloxacin of quinolones antibiotics and tetracycline, while was sensitive to antibiotics of erythromycin, vancomycin and clindamycin. It revealed that virulence factor genes Asal, cylA, acm and resistance genes TetM, ant(6)-Ⅰ, aac(6')-aph (2"), ermB showed positive. The results showed that the bacteria was Enterococcus feacium, it had a strong pathogenicity and severe drug resistance, which might be related to the highly positive rates of virulence genes and drug resistance genes.     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及特征分析

为探究广西地区猪源奇异变形杆菌的毒力和耐药情况,本研究从不同规模养殖场收集病死猪病料98份,通过分离培养、形态学观察、染色镜检、16S rRNA测序对分离菌进行鉴定;采用微量肉汤稀释法进行药敏试验;PCR检测毒力基因、耐药基因和整合子及其可变区;可变区扩增产物克隆至pMD^TM19-T载体进行测序。鉴定结果显示,22株细菌在TSA培养基上弥漫性生长,在SS培养基上形成中心黑色边缘白色的单菌落,镜检为革兰氏阴性短杆菌,变形杆菌属特异性基因（TUF）阳性。16S rRNA测序结果显示,21株分离菌与奇异变形杆菌同源性达99%,1株分离菌与彭氏变形杆菌同源性达99%。药敏结果显示,21株奇异变形杆菌对四环素、多西环素、氨苄西林、磺胺甲噁唑耐药率均为100%,对头孢氨苄、头孢呋辛、头孢噻肟、亚胺培南、卡那霉素耐药率在57.1%以上,所有分离株均为多重耐药菌。PCR结果显示,21株分离菌毒力基因atfA、hpmA、ireA、mrpA、pmfA、rsb、ureC、zapA、ptA检出率均为100%,ucaA检出率为95.2%;ESBLs菌株为bla_TEM型、bla_CTX型或bla_TEM型和bla_CTX型,AmpC菌株均为bla_DHA型,携带ESBLs或AmpC基因的菌株比例为57.1%、14.3%,同时携带ESBLs和AmpC基因的菌株比例为14.3%;qnrA、qnrB、qnrS和aac（6’）-Ⅰb-cr检出率分别为9.5%、0、4.8%和80.1%。21株分离菌Ⅰ类整合子（intⅠ1）阳性率61.9%,检测到9种基因盒阵列（aadA2-linF、estX、dfrA32-ereA-aadA2、drfA5、drfA12-orfF-aadA2、arr3-aac （6’）Ⅰb-cr5、aac （6’）Ⅰb-cr5-bla_OXA-1-catB3-aar3、drfA1-orfC和aadA2）;Ⅱ类整合子（intⅠ2）阳性率76.2%,检测到1种基因盒阵列（drfA1-sat1-aadA1）。本研究结果表明,广西地区猪源奇异变形杆菌毒力高且耐药严重,为后期针对奇异变形杆菌的防治和研究提供数据支持。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定、耐药性分析及毒力基因检测

为确定屠宰场发病猪死亡原因,本研究对从死亡猪内脏中分离到的细菌,进行革兰染色镜检、生化鉴定和16SrRNA基因测序鉴定,并进行药敏试验、毒力基因检测及小鼠攻毒试验.结果显示,革兰染色镜检为细小或中等短杆状或丝状革兰阴性杆菌;生化试验特性分析及16SrRNA基因测序鉴定为奇异变形杆菌,命名为GZ2-2株.药敏试验结果显示...