被膜态与浮游态猪源乳杆菌上清液抑菌活性比较分析

试验旨在比较分析猪源约氏乳杆菌L-76和嗜淀粉乳杆菌L-102被膜态和浮游态下其上清液对病原菌的抑菌活性。采用结晶紫染色法测定L-76和L-102的生物被膜形成能力,研究其被膜态和浮游态乳杆菌上清液及上清液与不同影响因素作用后的抑菌活性,并利用扫描电镜观察其两种状态下的上清液对指示菌形态的影响。结果显示,L-76、L-102乳酸菌具有较强的生物被膜形成能力,被膜态和浮游态乳杆菌L-76、L-102具有良好的抑菌活性,其上清液经蛋白酶作用后,被膜态L-76和L-102上清液的抑菌圈直径比浮游态明显变小;经过氧化氢酶和不同温度作用后,两种状态的乳杆菌上清液的抑菌活性无明显变化(P0.05),但在pH 3.0作用下,两种状态的乳杆菌上清液的抑菌效果最好;扫描电镜结果显示,被膜态乳杆菌上清液对金黄色葡萄球菌的形态影响略大。综上所述,两种状态下乳酸杆菌上清液中均含有抑菌物质,且被膜态乳酸杆菌上清液中的抑菌物质含量略多或活性略高。     

被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39对比格犬血清免疫指标及肠道菌群结构的影响

本试验旨在比较被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39对比格犬血清免疫指标及肠道菌群结构的影响.制备被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39,采用平板计数法比较不同生物状态的植物乳杆菌LR-39经酸、胆盐环境处理后的存活率.选取15只3.5月龄比格犬,随机分为被膜组、浮游组及对照组3个组,每组5只.被膜组、浮游组每日早上采食犬粮后...     

广西猪源沙门菌血清学分型及生物被膜形成能力的研究

为了研究近年广西地区流行猪源沙门菌的血清型和生物被膜形成能力,对从广西区内不同地区规模猪场分离鉴定的35株沙门菌,用玻片凝集法进行血清学分型;应用结晶紫染色微量板定量法检测菌株的生物被膜形成能力。结果显示:试验菌株分属14种血清型,所有菌株均具有生物被膜形成能力:20株弱成膜能力,4株中等成膜能力,11株强成膜能力。其中,鼠伤寒沙门菌的成膜能力较强。     

猪源乳杆菌对大肠杆菌抑制效果的研究

本试验进行了猪源乳杆菌对常见致病性大肠杆菌K88的体外抑制试验。结果表明：分自健康仔猪肠道的6株乳杆菌培养物上清液，对致病性大肠杆菌K88均有较强的抑制作用，证明6株乳杆菌能产生抑菌素，为研究与开发抗仔猪大肠杆菌病的微生态制剂奠定了基础。     

一株牛源嗜酸性乳杆菌体外抑菌试验研究

为了验证微生态活菌制剂候选菌株的益生特性,将筛选出的牛源嗜酸性乳杆菌NL0908进行体外抑菌试验,通过共培养和上清液抑菌试验,分析发现,菌株NL0908对病原菌大肠杆菌有较强的抑菌作用。将其上清液进行相应的热处理、蛋白酶处理、中和酸等,结果表明,其抑菌物质主要是由有机酸和抗菌小肽物质共同作用。     

猪源罗伊氏乳杆菌GL001的分离与益生特性研究

为了给猪源益生菌制剂的研究与开发提供更多理论依据,从小型巴马猪粪便中分离获得罗伊氏乳杆菌GL001,对该分离菌株的生长特性、产酸性能、模拟胃肠道环境下的耐受能力、药物敏感性及动物安全性进行检测。结果显示：罗伊氏乳杆菌GL001能迅速进入对数生长期,在16 h达到最高生长点后,pH值也相应变平稳;罗伊氏乳杆菌GL001在模拟的胃液环境中,1.5 h的存活率为93.84%,3 h后为88.41%;对0.3%的胆盐环境耐受性强;罗伊氏乳杆菌GL001对阿莫西林、链霉素、多西环素、氧氟沙星敏感,但对青霉素不敏感;细菌的上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用;大鼠安全性试验表明,分离的罗伊氏乳杆菌GL001对雌鼠、雄鼠的生长和脏器指数均无影响,大鼠脏器没有细菌异位情况。研究表明,分离得到的罗伊氏乳杆菌GL001可作为潜在饲用益生菌进一步研究。     

金黄色葡萄球菌在生物被膜态与浮游态的转录组差异表达分析

金黄色葡萄球菌是引起奶牛细菌性乳腺炎的主要原因,生物被膜的形成是金黄色葡萄球菌在不利环境条件下持久性存在的关键因素。探索同一株菌在生物被膜态与浮游态生长状态下的耐药性与其生长状态的相关性,可为进一步探究金黄色葡萄球菌的耐药性机制奠定基础。本研究培养了金黄色葡萄球菌的生物被膜,使用光学显微镜和扫描电镜观察其形成过程。测定并比较了9种抗菌药物对32株金黄色葡萄球菌在生物被膜态和浮游态的最小抑菌浓度,并对两种状态下的金黄色葡萄球菌进行转录组学测序,筛选出具有显著性差异的细胞信号通路和表达基因,同时对主要差异表达的基因进行RT-qPCR验证。结果发现,在生物被膜形成前期,随着培养时间的延长,显微镜下观察到的生物被膜态菌聚集面积越来越大,结构也越来越紧密,培养至72 h后,生物被膜逐渐开始分散。MIC测定结果显示浮游态菌的抑菌浓度低于生物被膜态菌。转录组结果显示两种状态菌的差异表达基因共1 512个,其中,生物被膜态菌中上调基因760个,下调752个。GO与KEGG富集分析显示,相比于浮游态菌,生物被膜态菌中与代谢相关的通路显著富集,其次为氨基酸的生物合成和ABC转运蛋白通路。与生物被膜形成相关的基因,如编码ABC转运蛋白的基因表达上调,而与代谢途径相关的基因下调。RT-qPCR验证了10个主要差异基因,其表达差异趋势与转录组测序结果一致。这些差异可能对金黄色葡萄球菌生物被膜态的高耐药性和细菌毒力的研究有所帮助。     

一株猪源植物乳杆菌对大肠杆菌ATCC25922的抑制作用研究

以猪肠道黏膜中分离的猪源植物乳杆菌R-21与指示菌ATCC25922为研究对象,研究其在不同培养时间、不同发酵液处理时间、与指示菌共培养及多次连续传代培养等条件下对ATCC25922的抑菌特性和抑菌稳定性.结果表明:R-21上清液的pH随培养时间逐渐降至3.0,抑菌直径增至22 mm左右;经发酵上清液处理后,指示菌活菌...     

1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究

【目的】试验旨在研究植物乳杆菌GX20200417-1菌株的生物学特性及体外抑菌活性,探讨其在生产中应用的可能性。【方法】将植物乳杆菌GX20200417-1菌株接种至不同pH和含不同浓度胆盐的PBS,以及人工胃肠液中,使用菌落计数分析其对酸、胆盐和人工胃肠液的耐受性。使用牛津杯法检测GX20200417-1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的抑菌能力;通过与霉菌毒素共培养后使用ELISA方法研究GX20200417-1菌株对霉菌毒素的降解能力,并饲喂小鼠进行安全性试验。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1菌株能够耐受pH 2.0及0.3%胆盐,并在人工胃肠液中有至少1×10⁴ CFU/mL的活菌数;GX20200417-1菌株发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,对玉米赤霉素及黄曲霉毒素均有降解作用,但对呕吐毒素无降解作用;灌服GX20200417-1菌株后小鼠安全、无毒副作用。【结论】植物乳杆菌GX20200417-1菌株具有优良的益生特性,在畜禽生产中有一定的开发潜力。     

食淀粉乳酸菌在青贮饲料中的研究进展

淀粉是青贮原料中重要的营养成分,提高青贮饲料中淀粉的利用率是提升青贮饲料营养价值的有效方法之一。随着饲用微生物菌剂的大力开发,食淀粉乳酸菌(Lactobacillus amylovorus)在青贮中的添加引起广泛关注。青贮饲料接种菌剂可以提高青贮的发酵品质、养分利用率以及保质期。本文对青贮饲料中食淀粉乳酸菌的应用进行了综述,总结了在青贮中接种食淀粉乳杆菌对青贮发酵过程中淀粉含量,微生物组成和有氧稳定性的影响。     

唾液乳杆菌的生长特性及抑菌作用

为了探讨唾液乳杆菌的生长特性及抑菌作用,测定2株唾液乳杆菌的生长曲线,并选用口腔变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌及金黄色葡萄球菌为指示菌,采用牛津杯法进行体外抑菌实验.结果表明:2株唾液乳杆菌分别在接种2h和4h进入对数生长期,8h进入对数生长末期,14h和16h进入稳定期;2株唾液乳杆菌菌液及代谢产物对口腔变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌及金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,对口腔变形链球菌及牙龈卟啉单胞菌的抑菌作用强于金黄色葡萄球菌;2株唾液乳杆菌菌体及调整pH值为7.0的代谢产物没有抑菌作用;2株唾液乳杆菌的抑菌能力主要来自菌体的代谢产物,代谢产物中起抑菌作用的成分为酸或酸依赖性物质.     

食淀粉乳杆菌代谢产物对TGEV感染IPEC-J2细胞屏障功能的影响

本研究采用荧光定量PCR方法,检测了IPEC-J2细胞不同时间点紧密连接蛋白3(claudin 3,CLDN-3)、细胞角蛋白8(cytokeratin 8,KRT8)、黏蛋白1(mucin 1,MUC1)3种蛋白mRNA的表达量变化。本试验将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染IPEC-J2细胞,探索食淀粉乳杆菌代谢产物是否通过维持或改善CLDN-3、KRT8、MUC1蛋白mRNA表达来增强细胞的屏障功能,是否对IPEC-J2细胞感染TGEV后的屏障功能产生影响。试验结果发现,正常细胞对照组MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白mRNA表达量随时间没有显著变化(P> 0.05),MRS培养基对照组与正常细胞对照组相比没有显著变化(P> 0.05),食淀粉乳杆菌代谢产物单独处理组对细胞MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白mRNA表达量呈显著上调作用(P< 0.05);食淀粉乳杆菌代谢产物+TGEV试验组与病毒对照组相比,处理24、36和48 h,MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白的表达显著升高(P< 0.05)。结果表明,食淀粉乳杆菌代谢产物不仅能提高MUC1、CLDN-3及KRT8在IPEC-J2细胞上的表达,还能负调节TGEV诱导的MUC1、CLDN-3及KRT8在IPEC-J2细胞上的表达,从而加强IPEC-J2细胞对TGEV感染的屏障功能。     

Effects of Lactobacillus amylovorus Metabolites on the Barrier Function of IPEC-J2 Cells Infected by TGEV

This study used Real-time PCR to detect the changes of expression quantity of claudin 3 (CLDN-3), cytokeratin 8 (KRT8) and mucin 1 (MUC1) three proteins mRNA in IPEC-J2 cells at three different time points.IPEC-J2 cells were infected by TGEV, we explored whether Lactobacillus amylovorus metabolites could enhance cell barrier function by maintaining or improving mRNA expression of CLDN-3, KRT8 and MUC1, whether had effects on the barrier function of IPEC-J2 infected by TGEV.The results showed that mRNA expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 in the normal cell control group did not change significantly with time (P> 0.05); MRS medium culture group did not change significantly compared to the normal cell control group(P> 0.05); Gene expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 proteins in Lactobacillus amylovorus metabolites alone treatment group showed significant time-dependent effect (P< 0.05).After being treated 24, 36 and 48 h, gene expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 proteins in Lactobacillus amylovorus metabolites+TGEV experiment group was significantly higher than virus control group (P< 0.05).Lactobacillus amylovorus metabolites could improve MUC1, CLDN-3 and KRT8 expressions in IPEC-J2 cells, while being able to negatively regulate MUC1, CLDN-3 and KRT8 expressions that TGEV induced in IPEC-J2 cells, thereby inhencing the barrier function of IPEC-J2 cell against TGEV.     

一株新饲用乳杆菌的分离鉴定及益生性研究

从猪粪便中分离得到一株新饲用乳杆菌,对其16S rDNA基因进行了测序,该段基因序列已提交GenBank,登录号为HQ641209。将该菌株16S rDNA基因序列进行在线BLAST比对并与其他乳杆菌属菌株的16S rDNA序列建立系统发育树,结果显示该菌16S rDNA序列与NCBI公布的约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii (AB295648)的同源性为99.7%,因此该菌鉴定为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii),将其命名为"Lactobacillus johnsonii Sun001"。经测试,该菌株对E.coli K88、K99菌株的生长有抑制作用,在pH为2.5的模拟胃液中处理3 h存活率为68.8%,在0.3%胆盐浓度的模拟肠液中处理3 h存活率为21.4%。     

自然发酵泡菜汁中植物乳杆菌的分离鉴定与体外益生特性研究

利用MRS固体培养基从自然发酵的泡菜汁中分离到1株优势乳酸菌,将其命名为菌株R1,经16S rRNA基因序列分析,并结合生理生化特性和糖发酵试验将其鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。菌株R1具有很强的产酸能力,24 h内可使MRS液体培养基p H从6.14降为3.59。菌株R1的发酵上清液对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鸡肠炎沙门氏菌、大肠埃希氏菌均有很好的抑制作用。体外益生试验表明,菌株R1能耐受0.3%的胆盐、p H 3.0的酸度以及60℃、30 min的热处理,对人工胃液和人工肠液也有很好的耐受性。菌株R1对头孢类和青霉素类抗生素较敏感,对诺氟沙星、卡那霉素、链霉素等抗生素不敏感。     

长春地区猪源大肠杆菌的分离鉴定和耐药性分析

为了解吉林省长春地区猪源大肠杆菌的耐药情况,于2013年采集318份猪源样品,分离鉴定大肠杆菌275株。以氨苄西林、头孢噻肟等15种药物进行了药物敏感性实验,多重 PCR 方法进行系统进化分群。结果表明,大肠杆菌分离株对四环素、氨苄西林和磺胺甲基异恶唑耐药最严重（83.63%、52.72%、51.27%）,全部菌株对美洛培南、多粘菌素敏感,其中176 株菌表现为对3类以上抗生素的多重耐药（64.00%）。从仔猪腹泻样品分离大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素、四环素、氯霉素及磺胺甲基异恶唑的耐药率显著高于健康猪和猪肉样品分离株的耐药率。大肠杆菌分离株主要为 A 群和 B1群。研究获得了吉林长春地区猪源大肠杆菌耐药性的基本流行病学数据,为指导养殖业的临床用药及耐药性监测提供了依据。     

约氏乳杆菌对大鼠生长性能、血液指标及脏器指数的影响

本试验旨在研究约氏乳杆菌对大鼠生长性能、血液指标及脏器指数的影响。试验选取SD大鼠80只,雌雄各半。大鼠按照体重相近的原则随机分为4个剂量组,即阴性对照组、试验Ⅰ(5 000 mg/kg体重)、试验Ⅱ(1 000 mg/kg体重)和试验Ⅲ组(200 mg/kg体重)。试验期为30 d。结果表明:试验剂量为200~1 000 mg/kg体重时,约氏乳杆菌对大鼠体增重、总采食量、饲料转化率、血液学指标和病理学指标的影响无显著性差异(P>0.05);试验剂量为5 000 mg/kg体重时,谷草转氨酶、血糖、总胆固醇差异不显著(P>0.05);与其他剂量组相比,大鼠的体增重和总采食量显著降低(P<0.05),但饲料转化率无显著差异(P>0.05);谷丙转氨酶水平显著降低(P<0.05),白蛋白和总蛋白显著增高(P<0.05);雌性大鼠尿素氮和雄性大鼠肌酐显著增高(P<0.05)。综合分析,约氏乳杆菌剂量低于1 000 mg/kg体重时,对大鼠平均日增重、血液指标及脏器指数无影响;约氏乳杆菌剂量高于5 000 mg/kg体重时,对大鼠脏器指数有影响。     

抗菌肽BSN-37的抑菌活性及其稳定性分析

试验旨在研究抗菌肽BSN-37的抑菌活性和稳定性。采用微量倍比稀释法测定抗菌肽BSN-37的最小抑菌浓度(MIC),菌落计数法分析抗菌肽BSN-37对大肠杆菌CVCC1568的杀菌动力学特征,扩散法测定抗菌肽BSN-37的盐离子稳定性、酸碱稳定性、血清稳定性、胰酶稳定性、热稳定性、反复冻融稳定性、室温保持稳定性、药效保持时间稳定性。结果显示,抗菌肽BSN-37对革兰氏阴性菌(大肠杆菌和沙门氏菌)的MIC为1.5625～25μg/mL,对革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌)的MIC为1.5625～12.5μg/mL,对真菌(白色念珠菌)没有活性;抗菌肽BSN-37可在90min内完全杀灭大肠杆菌CVCC1568;除了Fe2+和胰酶会影响抗菌肽BSN-37的抑菌活性外,在75～100℃的高温、150～250mmol/L高浓度盐离子(Na+、K+、Ca2+和Mg2+)、20%～25%饱和浓度的Cu2+、pH 4～10、20%～25%的血清、10～12次的反复冻融、10～12d室温保存等条件下仍能保持较好的抑菌活性,药效保持时间可达7.5d。本试验结果表明,抗菌肽BSN-37具有替代抗生素成为新抗菌药物的潜力,为抗菌肽BSN-37的临床应用提供了理论依据。     

干酪乳杆菌LC2W抗菌物质的研究

采用异丙醇抽提的方法，从干酪乳杆菌LC2W（Lb．casei CGMCC NO．0828）细胞中抽提到痢疾志贺氏菌（S．dysenteriae CMCC（B）51387）具有拮抗作用的蛋白类物质。该物质对蛋白酶尤其是胰蛋白酶敏感，对热不敏感。采用SDS—PAGE聚丙稀酰胺凝胶电泳的方法测得抑菌物质的分子量分别为32．1，44．3，87．6kDa。