褪黑素合成酶AANAT/ASMT基因过表达绵羊生物安全评价研究

旨在研究乳腺过表达褪黑素合成酶基因AANAT和ASMT(HIOMT)绵羊的生物安全性,基于本实验室前期建立的乳腺过表达褪黑素合成酶基因AANAT和ASMT(HIOMT)绵羊模型,追踪阳性转基因绵羊的生长性状数据,分析血液及尿液生理生化指标,对肠道微生物、乳中褪黑素水平及乳成分进行检测。结果表明:1)阳性转基因绵羊0、6和12月龄的体重、体长、身高和胸围4项生长指标与普通绵羊均无显著差异(P0.05);2)阳性绵羊血液总蛋白、白蛋白、球蛋白、胆固醇含量和各类型细胞数量以及尿液中亚硝酸盐、蛋白质和葡萄糖含量等指标均属正常,且与普通绵羊均无显著差异(P0.05);3)菌群测序结果表明,阳性绵羊及普通绵羊肠道微生物群落组成及优势菌群均无显著差异(P0.05);4)转基因绵羊血液褪黑素表达水平与普通绵羊无显著差异(P0.05),夜间褪黑素水平显著高于白天(P0.05);乳中褪黑素水平极显著高于普通绵羊(P0.01),乳糖含量显著高于对照羊(P0.05),体细胞数极显著低于普通绵羊(P0.01)。综上所述,乳腺过表达AANAT和ASMT(HIOMT)转基因绵羊的生长发育、诸多生理生化指标、肠道微生物菌群等与对照组绵羊相比均无显著差异。此外,转基因绵羊乳中褪黑素和乳糖含量较高,体细胞数含量较低,可能是乳腺中褪黑素发挥抗炎作用,降低了乳中体细胞数。     

褪黑素合成酶在绵羊胃中的表达

为了解绵羊各胃中褪黑素的合成情况。采取绵羊瘤胃背囊、瘤胃腹囊、网胃、瓣胃和皱胃等5个部位,用免疫组化、Western blot、RT-qPCR等方法,探讨褪黑素合成的关键酶AANAT和HIOMT在不同胃的定位和相对表达情况。结果表明,AANAT和HIOMT蛋白在绵羊各胃均有分布,且在各胃的黏膜层呈强阳性表达,其中在皱胃的表达量最高,AANAT在瘤胃背囊和瘤胃腹囊的表达量最低,而HIOMT在瘤胃背囊的表达量最低;AANAT和HIOMT mRNA水平均显示在网胃最高,其中AANAT在瘤胃背囊和瓣胃表达最低,而HIOMT在皱胃中表达最低。综上所述,在绵羊不同胃中均有AANAT和HIOMT的表达,并且AANAT和HIOMT存在表达差异,说明绵羊胃也具有自主合成褪黑素的功能,提示褪黑素可能通过自分泌和旁分泌的作用方式对绵羊胃功能活动进行调控,为进一步研究褪黑素对绵羊胃功能的调控作用机制提供了理论基础。     

我国转基因生物安全评价现状及展望

转基因生物安全评价与转基因生物技术的发展相伴而行.随着生物工程技术日新月异的发展,转基因生物安全监管也日益完善,目前我国已设立一套相对完整的转基因监管体系.本文对转基因生物安全的提出与发展进行回顾,分析了转基因生物安全评价在农业生产中的意义,并通过对比我国与美国和欧盟的转基因管理体系异同,探讨了我国转基因生物安全评价的...     

过表达TLR4基因绵羊瘤胃与肠道宏基因组分析

胃肠道微生物生态系统参与机体物质代谢、生物屏障、免疫调控等生理过程,对维持宿主健康具有重要作用。Toll样受体4(Toll-like Receptor 4,TLR4)除在机体天然免疫过程中扮演关键角色之外,胃肠道中TLR4基因的表达可能参与微生物区系结构的塑造。本研究利用前期获得的过表达TLR4基因绵羊,基于宏基因组测序技术探讨TLR4基因高水平表达对绵羊胃肠道微生物群体多样性、丰度及生物学功能的影响。结果表明：TLR4基因过表达后对绵羊瘤胃(P=0.35)和肠道(P=0.56)中微生物Alpha多样性无显著影响;胃肠道中微生物优势菌群(相对丰度>1%)在门、属、种不同分类水平上的区系结构无显著变化。进一步分析TLR4基因过表达对胃肠道中革兰氏阴性菌群(相对丰度<1%)组成的影响,在瘤胃和肠道中分别鉴定出8个和13个差异菌属(P<0.05),33个和32个差异菌种(P<0.05);其中,Helicobactersp.MIT05-5293(P=0.03)和Yersinia pseudotuberculosis(P=0.048)在瘤胃中存在显著差异,Campylob...     

绵羊附睾褪黑素受体1的表达与定位

为研究褪黑素受体1（MT1）在不同年龄绵羊附睾中的表达模式,选用幼龄绵羊（2~3月龄）、青年绵羊（6~8月龄）和成年绵羊（2~3岁）的附睾,采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测不同年龄绵羊附睾各部位MT1基因mRNA的表达量和MT1的分布情况。结果表明：幼龄绵羊附睾尾MT1基因的转录水平极显著高于附睾头和附睾体（P<0.01）;青年绵羊附睾体和附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头（P<0.05）;成年绵羊附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头和附睾体（P<0.05）,附睾各部位MT1基因的转录水平随年龄增长呈明显降低趋势;定位结果显示,MT1在各年龄组绵羊附睾的各个部位均有分布,且主要分布在附睾上皮细胞中。综合上述结果,不同年龄绵羊附睾的不同部位均有MT1表达和分布,并随年龄增长各部位的表达量降低,相同年龄绵羊附睾尾MT1的表达水平较高。     

BECN1基因在绵羊皮肤毛囊上表达的研究

BECN1基因是细胞自噬的启动基因之一。检测该基因在细毛羊不同发育时期皮肤毛囊上的表达规律,可为细毛羊皮肤毛囊发育是否存在细胞自噬提供参考。利用实时荧光定量、免疫组化及免疫印迹法对BECN1基因分别在细毛羊休止期、生长期、退行期皮肤毛囊上的定位和表达进行了研究。结果表明,BECN1基因在细毛羊各个时期皮肤毛囊的内根鞘、外根鞘以及毛母质中均有阳性表达,但以退行期最为显著;在细毛羊各个时期的毛囊中均检测到BECN1基因的转录与蛋白表达,均以退行期表达量最高,且显著高于休止期和生长期（P<0.05）,而生长期与休止期间的表达量无明显差异（P>0.05）。上述结果间接表明,细毛羊的毛囊周期中均存在细胞自噬现象,并以退行期最为明显。     

绵羊幼畜超排生产效益评价

中国已发展成为世界最大的羊毛、羊肉生产国和出口国,合理利用幼畜超排技术,不但可缩短绵羊的繁育周期,而且具有优良遗传性状的母羊可被高效利用,同时也可加快绵羊品种的改良速度.文章结合现有的研究成果,对比分析幼龄羔羊和成年绵羊超排技术的生产效益,并进行了综合评价.结果显示:幼龄羔羊平均可用胚胎采集数和胚胎合格率(69.33％...     

绵羊MHC基因的研究现状

MHC是高度多态的基因区,在所有脊椎动物的免疫应答中发挥重要的作用并与动物疾病的抗性密切相关。文章综述了绵羊MHC的结构特点、多态性及疾病抗性的一些相关研究情况。     

褪黑素受体MT1和MT2在绵羊胃中的分布及表达

【目的】应用分子生物学技术探究绵羊不同胃室组织褪黑素(MT)特异性膜受体MT1和MT2的分布规律及表达模式,以初步探明绵羊不同胃室组织褪黑素调节胃消化的生物效应机制。【方法】采集绵羊瘤胃背囊、瘤胃腹囊、网胃、瓣胃和皱胃5个组织部位,用ELISA、实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blotting方法检测褪黑素特异性膜受体MT1和MT2在绵羊胃组织不同部位的分布规律及表达模式。【结果】ELISA结果显示,绵羊各胃组织中均含有褪黑素,且皱胃中褪黑素含量最高,瓣胃次之,瘤胃背囊、瘤胃腹囊和网胃中均较低。实时荧光定量PCR结果显示,MT1和MT2基因mRNA在皱胃中含量均最高,其次是瘤胃腹囊,在瘤胃背囊和网胃中含量较低。免疫组化结果显示,MT1和MT2蛋白在绵羊各胃组织中均有分布,主要表达于各胃组织的黏膜层,且在皱胃腺体中的分布呈从底部到颈部逐渐增多的趋势。Western blotting结果显示,MT1和MT2蛋白在网胃中表达均最高,瓣胃次之,在瘤胃背囊、瘤胃腹囊和皱胃中表达均较低。【结论】褪黑素在绵羊各胃组织中差异化表达从而发挥多样性生理功能,可能通过与胃组织上特异性受体MT1和MT2结合,通过信号传导系统而调控前胃受食糜刺激后发生反刍生理过程。     

AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢中的转录差异及DNA甲基化程度分析

试验旨在检测5-羟色胺-N-乙酰基转移酶(AANAT)基因在绵羊休情季节和繁殖季节(卵泡期和黄体期)卵巢组织中的转录差异,并分析转录差异是否由DNA甲基化修饰程度改变所导致。试验采用自然环境条件和饲养管理一致,且体重差异在0.5 kg范围内的空怀母滩羊作为试验动物,采集其休情期、卵泡期和黄体期(每个时期3只)的卵巢组织,采用SYBR染料法进行实时荧光定量PCR检测AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢组织中的转录水平。随后针对转录水平有差异的两个时期(休情期和卵泡期)的样本,利用MethPrimer 2.0在线软件预测AANAT基因启动子区和第一外显子区的CpG岛;用重亚硫酸盐测序法(BSP法)检测AANAT基因启动子区及第一外显子区的甲基化程度。试验结果显示,滩羊休情期卵巢组织中AANAT基因转录水平显著低于卵泡期的AANAT基因转录水平(P<0.05),休情期与黄体期滩羊卵巢组织中AANAT基因的转录水平差异不显著(P>0.05)。滩羊卵巢组织中AANAT基因启动子区上存在着一个长度为173 bp的CpG岛,第一外显子区存在着一个长度为118 bp的CG岛。然而,两个甲基化岛区内的单个CpG位点甲基化程度在滩羊休情期和卵泡期之间均不存在显著差异,暗示AANAT基因的表达受甲基化修饰外的因素调控。本研究结果可为进一步探讨AANAT基因在季节性发情和卵泡成熟中的功能提供参考资料。     

AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢中的转录差异及DNA甲基化程度分析

试验旨在检测5-羟色胺-N-乙酰基转移酶（AANAT）基因在绵羊休情季节和繁殖季节（卵泡期和黄体期）卵巢组织中的转录差异,并分析转录差异是否由DNA甲基化修饰程度改变所导致。试验采用自然环境条件和饲养管理一致,且体重差异在0.5 kg范围内的空怀母滩羊作为试验动物,采集其休情期、卵泡期和黄体期（每个时期3只）的卵巢组织,采用SYBR染料法进行实时荧光定量PCR检测AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢组织中的转录水平。随后针对转录水平有差异的两个时期（休情期和卵泡期）的样本,利用MethPrimer 2.0在线软件预测AANAT基因启动子区和第一外显子区的CpG岛;用重亚硫酸盐测序法（BSP法）检测AANAT基因启动子区及第一外显子区的甲基化程度。试验结果显示,滩羊休情期卵巢组织中AANAT基因转录水平显著低于卵泡期的AANAT基因转录水平（P<0.05）,休情期与黄体期滩羊卵巢组织中AANAT基因的转录水平差异不显著（P>0.05）。滩羊卵巢组织中AANAT基因启动子区上存在着一个长度为173 bp的CpG岛,第一外显子区存在着一个长度为118 bp的CG岛。然而,两个甲基化岛区内的单个CpG位点甲基化程度在滩羊休情期和卵泡期之间均不存在显著差异,暗示AANAT基因的表达受甲基化修饰外的因素调控。本研究结果可为进一步探讨AANAT基因在季节性发情和卵泡成熟中的功能提供参考资料。     

澳洲白绵羊和黑杜泊羊与湖羊杂交试验初探

本文利用澳洲白绵羊和黑杜泊羊与湖羊开展杂交试验,对其生长发育和繁殖性能进行观测,筛选适合临夏地区肉羊最佳杂交组合,促进临夏肉羊生产提质增效,加快推进肉羊产业高产、优质、高效健康发展。实验结果表明:产羔率湖羊>黑杜湖F1>澳湖F1,繁殖成活率澳湖F1>黑杜湖F1>湖羊;羔羊初生重三个组合之间差异均不显著(t<0.05),三月龄六月龄重澳湖F1与湖羊、黑杜湖F1与湖羊差异极显著(t>0.01);杂交羔羊出生时体高、体长均不显著(t<0.05),黑杜湖F1与澳湖F1两个杂交组合的胸围与湖羊之间差异极显著(t>0.01);三月龄两个杂交组合管围与湖羊之间差异极显著(t>0.01);六月龄体高黑杜湖F1与湖羊差异不显著(t<0.05),澳湖F1与湖羊差异显著(t>0.05),体长三个组合之间差异均不显著(t>0.05),胸围和管围澳湖F1与黑杜湖F1两个杂交组合与湖羊之间差异均为显著(t>0.05)。     

基于概率神经网络的凉山半细毛羊评价研究

根据凉山半细毛羊标准,通过MATLAB随机函数rand内插生成10个包含不同内插值数量的训练数据集,从中选取最优训练数据集用于构建4个概率神经网络。结果表明:网络分级与标准分级的回归分析相关系数(R)分别为0.9995、0.9996、0.9987和0.9960。进一步通过凉山半细毛羊样本数据对网络进行可靠性验证,分级的准确率达100%。说明以最优的训练数据集所构建的凉山半细毛羊概率神经网络评价分级模型准确可行。     

我国蒙古羊系统主要地方绵羊品种遗传分化的研究

应用中心产区典型群简单随机抽样的方法,检测控制湖羊、同羊、滩羊、小尾寒羊和洼地羊的血液酶和其他蛋白质变异的5个结构基因座位(Tf、X-p、Ary-Es、Hb-β、Ke)上的遗传变异,引用国内外学者以相同实验方法获得的其他分布于我国周边国家和地区的11个绵羊品种作为分析背景,对16个群体进行遗传距离分析及亲缘关系聚类。结果表明:中亚以东南绵羊群体可以划分为蒙古羊、藏羊和南亚-东南亚羊三大集团,湖羊、同羊、滩羊、小尾寒羊和洼地羊均属于"蒙古羊"系统。     

青海细毛羊,新疆细毛羊和藏系绵羊染色体比较研究

采用外周血微量全血培养法研究了生活在青海省三角城种羊场的青海细毛羊、新疆细毛羊、藏系绵羊的染色体核型及畸变。结果表明：三种绵羊二倍体细胞的染色体数目均为２ｎ＝５４，ＮＦ＝６２，公羊核型为５４，ＸＹ；母羊为５４，ＸＸ。染色体畸变类型主要为结构断裂和多倍体，其频率分别为：青海细毛羊１．５３０％和１．８４４％；新疆细毛羊２．２９２％和１．５６８％；藏系绵羊２．０２２％和１．１０３％，并对三种羊的畸变类型进行下检验，结果差异均为极显著（Ｐ＜０．０１）。     

青海绵羊血清铁传递蛋白的电泳研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对青海省５个品种共１０５０只绵羊的血清铁传递蛋白进行了电泳研究。结果发现青海绵羊的血清运铁蛋白共有１１个电泳变异体（Ｉ，Ａ，Ｇ，Ｂ，Ｌ，Ｃ，Ｄ，Ｍ，Ｅ，Ｑ，），构成３７种电泳表型（ＩＡ，ＡＥ，ＡＡ，ＡＧ，ＡＢ，ＡＬ，ＡＣ，ＡＤ，ＡＭ，ＡＥ，ＡＢ，ＧＧ，ＧＢ，ＧＬ，ＧＣ，ＧＤ，ＧＭ，ＧＱ，ＢＢ，ＢＣ，ＣＤ，ＣＭ，ＬＣ，ＬＤ，ＬＥ，ＣＣ，ＣＤ，ＣＭ，ＣＥ，ＣＱ，ＣＰ，ＤＤ，ＤＭ，ＤＥＤＱ，ＫＰ，ＭＱ）。在５个品种绵羊中，藏羊血清铁传递蛋白的电泳变异体和电泳表型最多，分别为１１个和２８种，茨盖羊的最少，分别为６个和１６种，青海细毛羊，新疆细毛羊和青海半细胞毛羊介于两者之间。     

凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊染色体畸变研究

以凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊为研究对象,以微量全血培养法制备染色体,经对大量分裂相的分析结果表明：凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊二倍体细胞核型均为公羊2n=54,XY,母羊2n=54,XX;两品种羊染色体数目变异频率分别为33.00%,32.25%;结构变异频率分别为12.00%,17.60%,染色体结构变异主要表现为染色体断裂、染色单体臂断裂及着丝粒处变异等;将染色体或染色单体断裂位点与Ag-NORs特殊位点作比较发现部分位点间存在一一对应情况;同源染色体不等长现象在两品种羊中均有发现,且凉山半细毛羊较山谷型藏绵羊明显。     

基于mt DNA D-loop区序列的野绵羊与新疆地方绵羊的系统发育研究

为研究新疆绵羊的起源以及野生绵羊对新疆地方绵羊品种的遗传贡献,采用生物信息学的方法研究野生绵羊与新疆地方家绵羊的亲缘关系,结果表明:塔什库尔干羊、巴什拜羊、哈萨克羊均起源A、B、C三个世系,与东方盘羊关系较近,而和田羊、阿勒泰羊单独聚为一类,可能为D进化支,且与盘羊关系较近。     

绵羊产业成本收益区域比较研究

本文基于2004—2016年绵羊产业成本收益数据分析影响内蒙古、新疆、青海和宁夏等地区绵羊产业成本收益的因素,比较各地区的净利润、成本、成本利润率和成本结构。结果显示:各地区改良种绵羊的收益和成本均略高于本种绵羊。饲草费、饲料饲盐费、家庭用工折价、雇工费用、医疗防疫费和死亡损失费是影响各地区绵羊产业成本收益的重要因素,但成本构成有差异。此外,各地区在养殖过程中技术服务投入匮乏。对此,建议在注重改良的同时要加强对于本土品种资源的保护,降低养殖成本,加大基础设施投入并倡导科学养殖。