沙冬青种子总黄酮提取纯化与急性毒性及抗氧化活性研究

本研究旨在探讨沙冬青种子总黄酮的提取纯化、急性毒性和抗氧化活性等特性。采用超声辅助提取法提取纯化沙冬青种子总黄酮,用AlCl_3-CH_4O显色法进行沙冬青种子总黄酮含量测定;对纯化后沙冬青种子总黄酮进行急性毒性试验;采用体外Fenton体系产生羟基自由基(·OH)和邻苯三酚自氧化法产生超氧自由基(O~-_2),检测沙冬青种子总黄酮对·OH和O~-_2的清除作用;测定沙冬青种子总黄酮对衰老小鼠血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果显示,沙冬青种子总黄酮含量测定方法的精密度(RSD=0.78%)、重复性(RSD=0.52%)、稳定性(RSD=0.65%)、回收率(99.140%)均在误差范围内,提取纯化后沙冬青种子总黄酮含量达86.780%。沙冬青种子总黄酮属于无毒化合物,并对·OH和O~-_2具有良好的清除能力,在总黄酮作用剂量为1 250μg/mL时,对·OH和O~-_2的清除率分别达96.45%和50.39%。与衰老模型组小鼠相比,沙冬青种子总黄酮可极显著提高小鼠血清SOD活力(P0.01),其中,在150 mg/(kg·d)总黄酮剂量组,小鼠血清SOD活力高达102.42 U/mL。此外,与衰老模型组小鼠相比,沙冬青种子总黄酮可极显著降低小鼠血清中MDA含量(P0.01),以150 mg/(kg·d)总黄酮剂量组降低效果最明显。上述结果提示,沙冬青种子总黄酮具有良好的自由基清除能力和抗氧化活性,从而有效改善和提高机体免疫力。     

沙冬青种子总黄酮活性成分分析及对小鼠免疫功能的影响

本研究旨在通过高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）和高效液相色谱（HPLC）技术对沙冬青种子总黄酮主要活性成分进行分析及含量测定,并探索沙冬青种子总黄酮对小鼠免疫功能的影响。采用LC-MS分析沙冬青种子总黄酮主要活性成分,在HPLC优化条件下用标准品对主要活性成分的含量进行测定;采用MTT法和ELISA试剂盒检测沙冬青种子总黄酮对小鼠脾淋巴细胞增殖和IL-2、IL-4生成的影响,以及总黄酮对肝脏KCs细胞的增殖和NO、NOS含量的影响;运用定量溶血分光光度法和血清溶血素HC₅₀测定法检测不同浓度沙冬青种子总黄酮对小鼠抗体生成细胞和血清溶血素的影响。结果显示,沙冬青种子总黄酮中主要活性成分为芒柄花素、7,3'-二羟基-4'-甲氧基黄酮、黄豆黄素和穗花杉双黄酮,其中,芒柄花素含量高达52.48%,其次为7,3'-二羟基-4'-甲氧基黄酮,含量为11.20%。在2.5~100 μg/mL总黄酮作用下,沙冬青种子总黄酮对脾淋巴细胞的增殖和细胞因子的产生具有明显的促进作用,尤其在20 μg/mL时脾淋巴细胞增殖率和IL-2的分泌量分别高达217.62%和159.661 pg/mL,与空白对照组相比差异极显著（P<0.01）;在40 μg/mL时,脾淋巴细胞IL-4的分泌量高达149.274 pg/mL,极显著高于空白对照组（P<0.01）。沙冬青种子总黄酮对KCs细胞的增殖及NO和NOS分泌也具有明显促进作用,在60 μg/mL时,与空白对照组相比,KCs细胞增殖率达67.77%,NO和NOS的分泌量分别达180.106和29.942 μmol/L（P<0.01）。此外,沙冬青种子总黄酮能明显促进小鼠体内抗体生成细胞和血清溶血素含量的增加。综上表明,沙冬青种子总黄酮主要活性成分为芒柄花素和7,3'-二羟基-4'-甲氧基黄酮。沙冬青种子总黄酮对小鼠免疫活性细胞的增殖、相关免疫细胞因子和抗体的产生与释放等都具有显著的促进作用。     

枸杞多糖的提取纯化及体内外抗氧化活性研究

为研究枸杞多糖的抗氧化活性,依次通过水提醇沉法、去蛋白、DEAE-52纤维素柱对枸杞多糖进行提取纯化,分别得到枸杞粗多糖(LBPc)、去蛋白枸杞多糖(LBPp)、纯化的枸杞多糖LBPp1、LBPp2和LBPp3。通过自由基清除试验与H_2O_2所致的氧化溶血抑制试验,比较了5个枸杞多糖的体外抗氧化活性,筛选出活性较强的LBPp和LBPp1。将LBPp和LBPp1分别注射14日龄雏鸡,以维生素C为对照,分别于注射后7、14、21、28 d采血测定血清GSH-Px、SOD活性和MDA的含量。结果显示,LBPp和LBPp1能显著提高血清GSH-Px和SOD的活性,降低MDA的含量,效果显著优于维生素C对照组。结果表明,枸杞多糖经纯化后可提高其体内外抗氧化活性,其中LBPp1的活性最强,可作为抗氧化剂的候选药。     

地菍总黄酮的急性毒性及降糖活性研究

本研究旨在探讨地菍总黄酮的急性毒性及对糖尿病小鼠的降血糖活性。试验以单次最大给药剂量（5.6 mg/g体重）和最大给药体积（40 μL/g体重）的地菍总黄酮混悬液对正常小鼠进行灌胃。24 h内给药2次后连续观察14 d,记录小鼠的存活情况及一般状态,给药14 d后采集小鼠血清并检测谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）活性及肌酐（Cre）、尿素氮（BUN）含量,计算小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏的质量系数。采用一次性腹腔注射0.160 mg/g体重链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病小鼠模型,验证地菍总黄酮对糖尿病小鼠的保护作用。试验设空白组、模型组、二甲双胍组（0.6 mg/g体重）、地菍总黄酮高剂量、中剂量及低剂量组（1.2、0.8、0.53 mg/g体重）,连续给药21 d后,测定各组小鼠空腹血糖（FBG）、体重、采食量、饮水量及24 h尿蛋白含量。地菍总黄酮急性毒性试验结果显示,地菍总黄酮灌胃给药的日最大给药量为11.2 mg/g体重;给药后14 d,与正常组相比,给药组小鼠体重、各脏器质量系数、血清中AST、ALT活性及Cre、BUN含量无显著差异（P>0.05）。在验证地菍总黄酮降血糖活性试验中,与模型组相比,地菍总黄酮给药组小鼠FBG、饮水量、采食量显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）。上述结果证实地菍总黄酮安全性高,未引起试验小鼠明显的急性毒性反应,并可有效降低糖尿病小鼠血糖含量,缓解小鼠糖尿病症状。     

沙冬青属植物研究进展

自1959年以来科学家对沙冬青属(Ammopiptauthus Cheng f.)植物在基础生物学、应用生物学等方面开展了大量研究及保护实践工作。该属的2种植物蒙古沙冬青(A.mgolicus(Maxim.)Cheng f.)和新疆沙冬青(A.nanus(M.Pop.)Cheng f.)是亚洲温带荒漠罕见的常绿阔叶灌木,2种植物种子的硬实性高,需进行适当的处理并选择适宜的环境保存才能有较好的出苗率。对该属植物种子萌发期和幼苗期抗逆性研究较为广泛,但后期生长及物种遗传多样性相关研究鲜有报道。该属植物属于渐危种,濒危衰退原因主要集中在生境恶化、种子天然繁殖困难及人为干扰。因此,应加强就地保护工作,建立自然保护区,积极开展繁殖试验和引种驯化,使其作为草原化荒漠的建群物种发挥更大的作用。     

柿叶中总黄酮提取工艺模式的建立及抗氧化活性研究

采用黄酮类化合物的吸收波长510 nm为指标,以索氏回流法进行正交实验,将柿叶提取物进行紫外光谱检测,测定总黄酮的含量,对比优选出最佳提取工艺。测定提取的黄酮化合物对超氧负离子自由基O2-.的清除作用。结果表明,乙醇浓度、乙醇用量、回流时间、pH值对柿叶总黄酮的提取均有影响。其最佳提取工艺参数为：乙醇浓度60%、乙醇体积200 mL、回流时间1 h、碱提pH值9;柿叶中黄酮类化合物对清除自由基有一定的作用,且黄酮类化合物的添加量在实验范围内与其抗氧化性呈正相关。     

模拟干旱和盐胁迫下沙冬青种子硬实特性和抗逆性的研究

将1~5 d内每天吸胀的沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)种子视为不同硬实程度的种子T₁,T₂,T₃,T₄和T₅,与第5 d仍未吸胀的硬实种子(记作T_r)作为试材对其硬实特性和抗逆性进行研究,以期为沙冬青种子栽培驯化提供理论依据。结果表明:随着硬实程度的提高,种子的发芽势、发芽指数、活力指数呈上升趋势;电导率和丙二醛(MDA)含量逐渐下降;可溶性蛋白含量逐渐上升。不同处理对种子的硬实破除效果表明,80℃热水浸泡种子可达到最佳破除效果。通过测定模拟干旱胁迫和盐胁迫下不同硬实程度种子的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性和脯氨酸(Pro)含量,表明在相同逆境条件下,随硬实程度的加深,除极个别外,各项指标值均有不同程度的升高,且一定胁迫强度下硬实种子萌发幼苗的各酶活性和脯氨酸含量均极显著高于其他萌发幼苗(P<0.01),因此,硬实种子比非硬实种子有较强的保护酶调节系统。硬实程度越高,耐旱和耐盐能力也随之升高。     

黄芪总黄酮对小鼠的急性毒性和致突变性研究

用小鼠最大耐受量法、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验等方法,研究黄芪总黄酮对小鼠的急性毒性和致突变性作用。结果显示,黄芪总黄酮的小鼠急性经口最大耐受剂量(MTD)大于15g/kg,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验结果均为阴性。结果表明,黄芪总黄酮属无毒物,对小鼠体细胞、雄性生殖细胞均无致突变性。     

金环胡蜂蜂房总黄酮提取工艺及抗氧化活性分析

优化金环胡蜂蜂房总黄酮(Vespa mandarinia nidus total flavonoids,VMNTF)的提取工艺,并分析其抗氧化性,为VMNTF产品的开发利用提供参考依据。在单因素试验基础上,以VMNTF提取率为评价指标,通过L₉(3⁴)试验优化VMNTF提取工艺条件,同时测定VMNTF对Fe³⁺还原能力、羟基自由基(·OH)、1,1-苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·)的清除能力。结果表明：VMNTF最佳提取工艺条件为乙醇体积分数55%、超声温度60℃、液料比60:1(m L/g)、超声时间70 min、纤维素酶用量2%,在此条件下VMNTF平均提取量为20.132 mg·g^-1;VMNTF质量浓度为0.0644 mg·m L^-1时,使Fe3+还原产生的吸光值为1.262,对·OH和DPPH·的清除率分别为94.46%和95.02%,并且Fe³⁺还原能力、清除·OH和DPPH·能力均强于阳性对照维生素C。VMNTF具有很强的抗氧化性,是一种...     

全缘金粟兰总黄酮提取工艺优化及其抗氧化活性研究

试验旨在采用超声波提取全缘金粟兰总黄酮,综合单因素试验和正交试验结果优选其最佳提取条件,研究全缘金粟兰地上与地下总黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基及羟自由基的清除率。结果表明,全缘金粟兰总黄酮的最佳提取工艺条件为乙醇体积分数45%、超声时间15 min、液料比45 mL/g,在此条件下全缘金粟兰总黄酮提取率为7.68%。全缘金粟兰地上部位与地下部位对DPPH自由基及羟自由基的清除能力呈一定的量效关系,在0.425、0.460 g/mL时对DPPH自由基的清除率高达98.3%和98.2%,二者对于羟自由基的清除率在质量浓度为0.085~0.450 g/mL的范围内呈现一定的量效关系,但是同等浓度下二者对DPPH自由基及羟自由基的清除能力相反。研究表明,试验结果可为全缘金粟兰物质成分基础研究以及药材使用部位的选择提供研究方向和依据。     

裂叶荨麻根总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性评价

通过单因素及正交试验考察裂叶荨麻根总黄酮的最佳提取工艺,采用分光光度法测定根提取物石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相的总黄酮含量,以DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率和总还原力为指标评价裂叶荨麻根各萃取相的抗氧化活性。结果表明,裂叶荨麻根中总黄酮最佳提取工艺为料液比1∶15,乙醇浓度700mL/L,提取温度60℃,提取时间2h,提取物中总黄酮含量为50.53mg/g;各萃取相总黄酮含量为乙酸乙酯相(70.62 mg/g)>正丁醇相(45.48 mg/g)>水相(18.76 mg/g)>石油醚相(10.23mg/g),抗氧化活性为乙酸乙酯相>正丁醇相>水相>石油醚相,各萃取相抗氧化活性与总黄酮含量呈正相关。说明裂叶荨麻根具有抗氧化活性,乙酸乙酯相及正丁醇相的抗氧化活性作用较好,为将裂叶荨麻开发为抗氧化食品及药品提供了理论依据。     

紫花苜蓿叶总黄酮提取及抗氧化性

研究紫花苜蓿（Medicago sativa L.）叶总黄酮的最优提取工艺及体外抗氧化能力。在单因素试验的基础上设计正交试验,通过方差分析和多重比较确定最优提取工艺。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH）清除率测定法及还原力测定法评价苜蓿黄酮类化合物体外抗氧化活性。最佳提取工艺条件是：乙醇体积分数70%、提取温度60℃、提取时间30 min、超声功率180 w,总黄酮得率为6.43 mg·g^-1。苜蓿叶总黄酮在一定的质量浓度范围具有较明显的抗氧化活性,并随着质量浓度的增加活性增强。苜蓿叶总黄酮具有较强的还原力,清除DPPH自由基的半数抑制质量浓度（IC₅₀值）为0.608 mg·mL^-1。超声提取是一种高效的提取紫花苜蓿叶总黄酮方法。超声优化的苜蓿叶总黄酮提取工艺经济、稳定、合理可行。     

猪源大肠杆菌脂多糖的提取、纯化及活性分析

为了从猪源大肠杆菌中获得纯度高、产率高的脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）,并评价其毒力,本试验采集仔猪腹泻粪便作为病料,进行细菌分离鉴定和16S rDNA鉴定,采用热酚水法提取细菌的LPS,通过DNaseⅠ、RNaseA、蛋白酶K和醇沉法对LPS进行纯化,通过苯酚硫酸法、Bradford法和紫外分光光度法测定LPS多糖、蛋白及核酸含量,鲎试剂定量法测定其活性,采用小鼠急性毒性试验方法测定小鼠半数致死量（LD₅₀）。结果显示,分离获得一株具有高致病性的猪源大肠杆菌,纯化的猪源大肠杆菌LPS平均产率为3.74%,其中多糖含量为13.40%,蛋白含量为0.48%,核酸含量为0.06%,主要条带集中在14~160 ku范围内,鲎试剂定量法测定其活性为1.21×10⁷ EU/mg,提取LPS对小鼠的LD₅₀为31.86 mg/kg。该猪场仔猪腹泻是由致病性大肠杆菌引起,获得其毒力因子LPS纯度高、产率高、毒力强,这将为临床防制猪大肠杆菌病及LPS提取纯化提供理论依据。     

Extraction,Purification and Activity Analysis of Lipopolysaccharides from Escherichia coli Isolated from Swine

In order to obtain higher purity and high yield of LPS isolated from Escherichia coli, and evaluate its virulence,excrement of diarrhea piglet was collected as pathological samples, of which, some strains of Escherichia coli were isolated and identified. And furthermore, a strain of Escherichia coli was acquired by 16S rDNA identification. The LPS from this strain of Escherichia coli was isolated with the hot-phenol water method and purified by DNaseⅠ, RNaseA, proteinase K treatment and alcohol precipitation. The polysaccharide, protein and nucleic acid content of purified LPS were detected by phenol-sulfuric acid method, Bradford method and UV points spectrophotometric method. And its bioactivity and acute median lethal dose was determinated by tachypleus amebocyte lysate (TAL) method and acute toxicity experiment method, respectively. The results showed that a strain of highly pathogenic Escherichia coli was successfully isolated. The average yield of purified LPS was 3.74%, the proportion of the polysaccharide was 13.40%, the protein was 0.48%, and the nucleic acid was 0.06%. SDS-PAGE electrophoresis and silver stain showed that the bands were mainly concentrated in the range of 14 to 160 ku. The LAL bioactivity of the prepared LPS was 1.21×10⁷ EU/mg, LD₅₀ of the mouse abdominal cavity was 31.86 mg/kg. The results revealed that the diarrhea piglets in the farm was caused by pathogenic Escherichia coli,purified LPS from this strain of Escherichia coli had the advantages of higher purity, high yield and strong virulence, which would provide theoretical data for clinical prevention and treatment of diarrhea piglets.     

大孔树脂纯化苜蓿总黄酮及纯化前后抗氧化能力比较

为了探讨苜蓿(Medicago sativa L.)总黄酮的大孔树脂纯化工艺及其抗氧化特性,本研究以苜蓿干粉为试验材料,采用静态和动态试验,考察树脂种类、上样液pH值和体积、上样液总黄酮质量浓度对苜蓿总黄酮吸附和解吸附性能的影响,确定最佳纯化工艺条件,比较纯化后苜蓿总黄酮的抗氧化能力。结果表明,D101大孔树脂纯化苜蓿总黄酮效果较好,上样液pH值为3、体积为2 BV、质量浓度为0.8mg·mL^-1纯化参数条件下,吸附率和解析率分别为92.72%和75.99%,此条件下苜蓿总黄酮纯度为31.46%。纯化后的苜蓿总黄酮质量浓度为0.8mg·mL^-1时,对二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸、羟自由基和超氧自由基的清除率分别为92.46%,92.23%,87.79%和86.73%,羟自由基的清除能力高于Vc,其它3种自由基清除能力较Vc有所降低,纯化后苜蓿总黄酮抗氧化能力明显增强。     

Subacute Toxicity Test of the Total Flavonoids of Limonium aureum (L.)Hill.

To evaluate the safety of the total flavonoids of Limonium aureum (L.) Hill.and lay an experimental basis to study the pharmacological effects and clinical safety in the future,80 Wistarrats with same age and body weight were randomly divided into two groups (group Ⅰ,Ⅱ),and every group was divided into the high dose group (HG),medium dose group (MG),low dose group (LG) and control group (CG),respectively,of which the mice were given to the total flavonoids of Limonium aureum (L.) Hill.by gavage at the doses of 15,10 and 5 g/kg while the mice of CG were not given any medicine.The blood sample were collected and experimental indexes were measured at 10 (group Ⅰ) and 21 d (group Ⅱ).The results showed that comparing with CG,the weight gain of rats in MG and LG of group Ⅰhad no significant difference (P>0.05),and that of HG were significantly decreased (P<0.05);The weight gain of rats in LG of group Ⅱ had no significant difference (P>0.05),and that of MG and HG were significantly decreased (P<0.05);Organ indexes of experimental groups had no significant difference with CG (P>0.05);With increasing concentration of the total flavonoids of Limonium aureum (L.) Hill.,there was pathological damage to major organs and white lumps in lung and red bleeder existed in liver of rats in HG when given total flavonoids of Limonium aureum (L.) Hill.for 21 d.The results indicated that total flavonoids of Limonium aureum (L.) Hill.was low toxicity and could be safely used for animals with minding the dose was not too high.     

黄花补血草总黄酮亚急性毒性试验

试验旨在评价黄花补血草总黄酮的安全性,为今后系统研究其药理作用和作为临床安全用药提供试验依据。选取80只1日龄、体重接近的大白鼠,随机分为2大组（Ⅰ、Ⅱ组）,其中每大组分成黄花补血草总黄酮高、中、低剂量组和空白对照组,药物组按照15、10、5 g/kg的剂量灌胃给药,对照组不给药,在给药10（Ⅰ组）、21 d（Ⅱ组）后采血测定试验指标。结果显示,Ⅰ组中、低剂量组的大白鼠体增重与对照组相比差异不显著（P>0.05）,而高剂量组体增重显著低于对照组（P<0.05）。Ⅱ组低剂量组的大白鼠体增重与对照组相比差异不显著（P>0.05）,而中、高剂量组体增重显著低于对照组（P<0.05）;试验组大白鼠的各脏器系数与对照组差异不显著（P>0.05）;在病理解剖过程中发现,随着剂量组浓度的增大,黄花补血草总黄酮对主要器官有一定的病理性损伤,21 d中、高剂量组的肺部组织出现白色肿块,肝脏出现红色出血点。结果表明,黄花补血草总黄酮毒性低,可以安全用于动物,但其剂量不宜过高。     

通江产辣木叶总黄酮的提取工艺优化及含量测定

为了考察通江产辣木叶总黄酮的提取方法和含量测定,试验采用浸渍法,以乙醇溶液作提取溶剂,分别考察乙醇浓度、料液比、温度和时间对通江产辣木叶总黄酮提取率的影响,并利用响应面法考察不同因素、不同水平对辣木叶总黄酮提取率的影响情况,筛选出辣木叶总黄酮的最佳提取工艺,测定8、9、10月通江产辣木叶总黄酮的含量。试验结果表明,辣木叶总黄酮的最佳提取条件为:料液比1∶30(g/mL)、提取时间30 min、提取温度55℃、乙醇浓度75%。在最佳提取工艺条件下,辣木叶总黄酮提取率达3.018%。利用最佳提取工艺进行8、9、10月份采摘的辣木叶总黄酮的提取,得出10月份辣木叶总黄酮的含量最高。