中国美利奴羊胚胎骨骼肌发育的加权基因共表达网络分析

旨在对绵羊胚胎骨骼肌lncRNAs(long non-coding RNA)进行鉴定分析,以阐明其在肌纤维类型转换与肌纤维增粗过程中的调控机制。本研究选取体重相近的成年中国美利奴母羊进行同期发情和人工授精,通过全转录组测序技术对其妊娠第85(D85N)、105(D105N)和135天(D135N)的胎儿背最长肌组织进行测序,设置D85N vs D105N、 D105N vs D135N和D85N vs D135N 3个比较组,通过比较筛选出显著差异表达的lncRNA与mRNA。利用加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis, WGCNA)方法构建共表达模块,使用DAVID在线工具和R-package进行GO和KEGG富集分析以找到与肌肉发育相关的模块。最后从目标模块中筛选出高连通度的lncRNAs和mRNAs,通过它们与miRNAs间的靶向预测关系建立lncRNA-miRNA-mRNA共表达网络。根据WGCNA分析结果,共得到25个模块。功能富集显示,模块中的核心基因主要富集于细胞粘附、Wnt、紧密连接、mTOR、AMPK及ECM-受体相互作用等肌肉发育相关的信号通路,选出模块中连通度高的lncRNAs和mRNAs构建子网络,得到TNNI2、PIP5K1A、PDK4等关键相关基因,预测出MSTRG.3903、MSTRG.10154、MSTRG.1629、MSTRG.10496、MSTRG.9559、MSTRG.10178、MSTRG.10521、MSTRG.3911、MSTRG.4586、MSTRG.7232等10个与肌肉发育、肌肉疾病、细胞增殖相关的lncRNAs。本研究成功构建了肌纤维发育相关的lncRNA-miRNA-mRNA共表达网络,找到多个与妊娠后期胚胎骨骼肌发育相关的潜在候选基因,为深入研究lncRNA在中国美利奴羊胚胎发育过程中骨骼肌的发育调控机制奠定了基础,也为其他家畜骨骼肌发育机制的研究提供了参考和方向。     

中国美利奴和澳洲美利奴公羊后裔比较

<正> 中国美利奴吉林型细毛羊是以赶超澳洲美利奴羊为目标而选育的。羊毛综合品质经上海纺研院试纺结果表明,已达到进口同类56型澳毛水平。但其它生产性能如何?现将中国美利奴公羊(简称“中美”)和澳洲美利奴公羊(简称“澳美”)后裔若干性状对比材料报告如下: 一、基本情况 澳洲美利奴公羊是1984年西澳政府和西澳美利奴育种协会联合向中国赠送的澳美公羊20只,分给吉林省查干花场3只,这3只公羊引入该场后,经过一个生产周期的饲养,在本省区的自然环境条件下与中国美利奴公羊同样条件饲养,“中美”和“澳美”公羊的主要生产性能详见表1:     

中国美利奴和澳洲美利奴公羊后裔比较

中国美利奴羊,(吉林型细毛羊)是以赶超世界上细毛羊之冠—澳洲美利奴羊为目标而选育的,羊毛品质经过上海纺织科学院试纺结果表明,羊毛品质已达到进口同类56型澳毛水平,填补了我国优质细毛羊的空白。但其它生产性能如何?现将中国美利奴羊(吉林型细毛羊)种公羊和澳洲美利奴公羊后裔若干性状比较资料报告如下:     

德国美利奴羊与中国美利奴羊主要生产性能比较

德国美利奴羊引入新疆塔额垦区后,表现出良好的适应性.初生羔羊重4.17 kg±0.62 kg,3月龄断奶重25.78 kg±3.15 kg,经特培的育成公羊周岁体重达75.61 kg±18.97 kg;产毛性能稳定,油汗、弯曲、净毛率与中国美利奴羊没有较大差异,产毛量4.65 kg±0.71 kg,较中国美利奴羊略低一些,细度以64支为主,占总量的61.17％;产肉性能明显高于中国美利奴羊,6月龄羔羊屠宰率48.76％,净肉率36.29％.德国美利奴羊集优良的产肉性能与理想的羊毛品质于一身,可以认为是当今细毛羊中的优秀品种.推广德国美利奴羊,利用该品种生长发育速度快、成熟早、产肉率高、肉质好的优良特性,可大幅加快肉羊产业的发展步伐,是一项增加产肉量又不降低羊毛产量与羊毛品质的重要举措.     

中国美利奴羊MHC-DRB1基因PCR-RFLP多态性分析

应用巢式PCR-RFLP方法,对211只中国美利奴(新疆军垦型)羊的MHC-DRB1外显子2的遗传多态性进行检测,并对基因型频率和等位基因频率进行了统计,结果表明,中国美利奴(新疆军垦型)羊的MHC-DRB1基因外显子2在SacⅠ、Hin1Ⅰ和HaeⅢ的酶切位点存在多态性,这些酶切位点分别受2、2和6个等位基因控制,由于MHC-DRB1为多碱基突变的基因位点,综合3种限制性内切酶的酶切结果,在中国美利奴(新疆军垦型)羊中共发现24种等位基因;χ2适合性检验结果表明,中国美利奴(新疆军垦型)羊的MHC-DRB1外显子2在SacⅠ和Hin1Ⅰ酶切位点均达到Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05),但在HaeⅢ酶切位点未达到Hardy-Weinberg平衡(P＜0.01).     

非遗传因素对中国美利奴羊(新疆型)主要经济性状的影响

为探索非遗传因素对中国美利奴羊（新疆型）主要经济性状的影响,试验对拜城种羊场1992-2010年共19年周岁母羊鉴定记录进行统计分析,利用最小二乘方差分析法研究出生年份、群别及出生月份3个非遗传因素对周岁母羊鉴定记录的6个主观鉴定性状（头毛评分、毛密度评分、毛弯曲评分、毛细度评分、体型外貌评分、品种等级评分）和4个客观测定性状（毛长度、鉴定时体重、剪毛后体重、剪毛量）共10个经济性状的影响。结果表明,出生年份和群别对10个性状均有极显著影响（P<0.01）;出生月份对除毛密度评分、毛细度评分、品种等级评分外的其他7个性状均有极显著影响（P<0.01）。从毛细度、毛长度和剪毛量3个最主要的性状来看,2008年毛细度评分最高,显著高于2006、2007和2010年（P<0.05）;1996年毛长度最长,显著高于1994、2002、2004、2006、2007、2008和2010年（P<0.05）,与1995、2003和2009年差异不显著（P>0.05）;1995年剪毛量最多,显著高于1994和2009年（P<0.05）,与1992年差异不显著（P>0.05）;除此之外,其他年份的毛细度评分、毛长度和剪毛量均极显著低于最高值（P<0.01）。除2号群外,不同群别各有优势。1、2月份出生的羊较3、4月份好。由此可见,出生年份、群别和出生月份非遗传因素对中国美利奴羊（新疆型）的主要经济性状存在显著影响,因此,在遗传参数估计和遗传评定时应该综合考虑这些因素,从而为获得更为全面、准确的育种值及制定育种方案提供参考依据。     

中国美利奴羊IGFBP-3基因内含子4区的PCR-RFLP多态性分析

本研究针对在绵羊IGFBP-3基因内含子4区新发现的1个SNP位点(C218T),建立了PCR-RFLP的基因分型方法。利用该方法对353只中国美利奴羊(新疆军垦型)进行了多态性检测,结果显示,有CC（249 bp）、CT（249/216/33 bp）和TT（216/33 bp）3种基因型,基因型频率分别为0.52、0.41和0.07;有C、T 2种等位基因,等位基因频率分别为0.72、0.28。多重比较结果表明,不同基因型对中国美利奴部分羊毛生产性能有一定的影响,CC基因型个体的毛丛长度显著短于TT基因型个体(P＜0.05),其毛囊密度显著高于CT和TT基因型个体(P＜0.05)。     

中国美利奴羊（新疆型）产毛性状的相关及通径分析

利用998只中国美利奴羊（新疆型）周岁资料，应用通径分析方法研究了中国美利奴羊（新疆型）羊毛长度、剪毛后体重、毛弯曲分、毛油汗分和羊毛纤维直径对产毛量的影响程度，结果表明：这5个性状与产毛量的表型相关系数分别为0.5552、0.7048、-0.0759、-0.0917和-0.0105；对产毛量的直接通径系数分别为0.2103、0.6447、-0.0105、0.0324和0.1141。可见，剪毛后体重是影响中国美利奴羊（新疆型）产毛量的主要因素。     

绵羊骨骼肌生长发育调控基因研究进展

骨骼肌发育是一个复杂的过程,其中包括肌细胞的形成与增殖、肌管和肌纤维的形成及最后的成熟过程。骨骼肌生长发育直接影响到绵羊的生产性能。随着测序技术的发展,更多人尝试从基因层面来阐述骨骼肌发育过程中系统的调控网络,挖掘与肉品质、产肉性能等重要功能性状相关的分子标记。肌细胞增强因子2(MEF2)是控制肌肉基因表达的保守且功能显著的转录因子,在调节肌肉生成、神经发育与分化等方面起作用。成肌细胞决定因子(myogenic differentiation,MyoD)基因家族调控肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟。为了更深入地认识与绵羊骨骼肌生长发育相关的调控基因的功能,作者从骨骼肌的结构特点入手,重点介绍MEF2与MyoD基因家族的结构与功能,以及非编码RNA对骨骼肌中基因表达的调控作用。     

白萨福克羊与中国美利奴羊(新疆型)杂交效果分析

以著名肉羊品种白萨福克羊为父本,中国美利奴羊(新疆型)为母本进行杂交,产生的杂交一代母羊全部留作回交一代的母本,中国美利奴羊(新疆型)特级种公羊作为回交一代的父本进行杂交利用试验。结果表明:杂交一代(F1)3月龄体重、6月龄体重和14月龄剪毛后体重分别较中国美利奴羊(新疆型)提高51.7%、23.7%和8.0%,差异均极显著(P<0.01)。回交一代(B1)3月龄体重和6月龄体重分别较中国美利奴羊(新疆型)提高39.5%(P<0.01)和17.1%(P<0.01)。杂交一代(F1)毛长、毛纤维直径和产毛量分别比中国美利奴羊(新疆型)提高了-14.4%、13.1%和-27.3%,差异也极显著(P<0.01)。回交一代(B1)毛长和产毛量分别比中国美利奴羊(新疆型)降低8.9%(P<0.01)和18.2%(P<0.01)。说明杂种羊肉用性能较中国美利奴羊(新疆型)得到显著改进。但与此同时,毛用性能退化显著。从肉毛兼用性考虑,回交一代要好于杂交一代。     

中国美利奴羊内皮型一氧化氮合酶基因3个外显子多态性的PCR-SSCP鉴定

本试验旨在研究中国美利奴羊内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）基因第7、13、14外显子上的单核苷酸多态性（SNPs）和单氨基酸多态性（SAPs）。利用生物信息学方法对人、小鼠和中国美利奴羊eNOS基因上的第7、13、14外显子进行了相似性比较,并对GenBank SNP数据库上已公布的人和小鼠eNOS基因外显子多态性进行了统计分析,然后采用PCR-SSCP方法对120只中国美利奴羊eNOS基因的这3个外显子的扩增片段进行分析,通过分析发现在120只中国美利奴羊这3个外显子上并没有SNPs位点,说明中国美利奴羊eNOS基因上的这3个外显子区域相对保守。     

中国美利奴羊TLR2基因多态性及其与布鲁氏菌病的相关性分析

试验旨在研究Toll样受体2（Toll-like receptor,TLR2）基因的多态性及其与中国美利奴羊布鲁氏菌病易感性的相关性。利用生物信息学方法对NCBI上公布的绵羊TLR2基因序列进行比对,选出多态位点丰富的片段进行扩增,运用PCR-SSCP的方法对206个中国美利奴布鲁氏菌病阴性样本和80个中国美利奴羊布鲁氏菌病阳性样本进行TLR2基因的多态性检测,然后对不同等位基因的PCR产物进行测序,确定该基因的多态性位点,经卡方检验分析每个SNP位点的等位基因频率、基因型频率及其多态性与布鲁氏菌病易感性的相关性,利用生物信息学软件分析RNA二级结构及蛋白质的二级结构。结果表明,在279 bp的序列中共检测到3个SNPs,分别为：C1731T、G1737C和G1749T,均未引起对应氨基酸的改变,属于无义突变。这些位点在病例组和对照组之间的等位基因频率及基因型频率均不存在显著差异（P>0.05）。各突变位点均能引起RNA二级结构和最小自由能的改变,而蛋白质的二级结构均未改变。由此得出,中国美利奴羊TLR2基因的3个SNPs位点（C1731T、G1737C和G1749T）与中国美利奴羊布鲁氏菌病易感性无相关性。     

中国美利奴羊PROP1和PRLR基因的表达分析

本研究旨在探讨PROP1和PRLR基因在绵羊不同组织中的表达差异及其发育变化规律。利用荧光实时定量PCR技术分析了PROP1和PRLR基因在中国美利奴成年母羊13种组织中的表达谱信息,并检测了垂体组织中PROP1基因和垂体、卵巢、睾丸和皮肤组织中PRLR基因在0、7、14、30、60和90日龄时表达水平的发育变化。结果表明:PROP1基因仅在绵羊垂体组织中表达;而PRLR基因在绵羊各种组织中广泛表达,且在子宫和下丘脑组织中的表达量高于其它组织(P<0.01)。垂体组织中的PROP1基因表达量较低,在7日龄高于30(P<0.01)、14和60日龄(P<0.05)。垂体组织中PRLR基因表达量在30日龄时最高,之后急剧下降,各日龄间无差异(P>0.05);在卵巢组织中从7日龄起呈先下降后上升的趋势,90日龄高于0(P<0.01)、14和30日龄(P<0.05);在睾丸组织中总体呈上升趋势;在皮肤组织中呈现为生长前期高于后期的趋势(P<0.01)。绵羊PROP1和PRLR基因表达存在明显的组织表达差异和发育变化差异;PROP1和PRLR基因的表达可能对绵羊繁殖等性状的发育有一定的调节作用。     

The Correlation Analysis between Chinese Merino Sheep OLA-DQB1 Gene Exon 2 Genetic Polymorphism and Brucellosis Susceptibility

The single nucleotide polymorphisms (SNPs) of ovine lymphocyte antigen DQB1 (OLA-DQB1) gene exon 2 was amplified by PCR-SSCP method from 148 healthy and 60 infected with Brucella Chinese Merino sheep and then PCR products of different alleles were sequenced to determine the polymorphism loci of the gene.The differences in gene frequency and genotype frequency of each SNP loci were analyzed statistically to analyze its correlation with brucellosis susceptibility.The sequencing result showed that 43 SNPs were detected in 270 bp DNA sequence,the gene frequencies of G196A allele had extremely significant difference in case and control samples (P< 0.01),and its genotype frequencies presented significant difference (P< 0.05).Similarly,C211T allele was significantly different in case and control samples (P< 0.05).The results showed that the polymorphism of OLA-DQB1 gene exon 2 might be a significant association gene with brucellosis susceptibility.