蓝色鳞（Cyprinus carpio blue vat）的细胞遗传学分析

采用体内注射PHA和秋水仙素,肾细胞短期培养,常规空气干燥法制备蓝色鳞鲤染色体,对100个中期分裂相记数统计,确定蓝色鳞鲤（Cyprinus carpio blue var）的染色体数为2n=100。测得核型参数按Levan等的染色体划分标准得出：蓝色鳞鲤有15对中部着丝点染色体（m）;13对亚中部着丝点染色体（sin...     

蓝色鳞（Cyprinus carpio blue vat）的细胞遗传学分析

采用体内注射PHA和秋水仙素,肾细胞短期培养,常规空气干燥法制备蓝色鳞鲤染色体,对100个中期分裂相记数统计,确定蓝色鳞鲤（Cyprinus carpio blue var）的染色体数为2n=100。测得核型参数按Levan等的染色体划分标准得出：蓝色鳞鲤有15对中部着丝点染色体（m）;13对亚中部着丝点染色体（sin）;22对端部和亚端部着丝点染色体（st,t）,其染色体总臂数（NF）为156,蓝色鳞鲤核型公式为2n=30m＋26sm＋44st,t。采用流式细胞分析仪测定了蓝色鳞鲤的DNA含量,与鸡血细胞标准对照相比为1．73±0．10,以鸡红细胞DNA含量2．3Pg．N^-1计,则蓝色鳞鲤的体细胞DNA含量为3．99Pg．N^-1。     

高寒鲤、荷包红鲤、松浦鲤和德国镜鲤同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对高寒鲤Cyprinus carpio、荷包红鲤Cyprinus carpio wuyuanensis、松浦鲤Cyprinus carpio Songpu和德国镜鲤眼(E)、心(H)、肾(K)、肝胰脏(L),和肌肉(M)组织中超氧物歧化酶(SOD)、乙醇脱氢酶(ADH)、α-淀粉酶(α-AMY)、过氧化物酶(POD)、苹果酸酶(ME)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、酯酶(EST),和山梨醇脱氢酶(SDH)等9种同工酶进行了电泳分析。结果表明:4种鲤同工酶谱具有明显的组织特异性,其中肝胰脏和肾脏表达最为显著。4个鲤群体9种同工酶共记录了17个基因座位,多态座位比例P平均为27.865%,平均预期杂合度He’介于0.1329~0.1451之间。Shannon’s多样性指数显示,4个群体的遗传变异由高到低依次为:荷包红鲤>高寒鲤>松浦鲤>德国镜鲤。4种鲤具有较丰富的遗传多样性,较高的遗传变异水平,对种质资源的研究开发及利用有重要意义。     

金乌贼同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳技术对金乌贼（Sepia esculenta）同工酶的组织特异性及其山东日照近海群体的遗传结构进行研究。对金乌贼眼、鳃、肌肉、口球、肝脏、鳃心6种组织的19种同工酶进行分析，检测出PGDH、GPI、MPI、IDHP、SOD、ME、AAT、DIA、MDH、LDH、G3PDH、PGM共12种同工酶在几种组织中有较稳定而清晰的表达。结果表明，金乌贼同工酶的表达有明显的组织特异性。选择金乌贼3种组织（眼、口球、鳃心）进行同工酶分析，共记录了18个基因座位，其中3个基因座位LDH-2^＊、G3PDH-1^＊、PGM^＊呈多态，其多态座位比例为0．1667（P0．99）和0．0556（P0.95），平均观测杂合度和预期杂合度分别为0．0159和0．0143，平均有效等位基因数为1．0201，表明日照近海金乌贼群体的遗传多样性较低。     

哲罗鱼(Hucho taimen)同工酶研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术对乌苏里江哲罗鱼肌肉、心脏、肝脏和眼4种组织中ADH、EST、G-6-PDH、IDH、LDH、MDH、ME、POD和SDH等9种同工酶的分布及表达进行研究。结果表明,9种酶在4种组织中的表达呈现出明显的组织特异性。遗传多样性分析共记录11个基因座位,其中有2个位点(Adh-2和Est-1位点)为多态,多态座位比例为18.2%;群体平均杂合度(H)为0.0395,位点有效等位基因数(Ne)为1.0511,Shannon’s信息指数(I)为0.068,表明哲罗鱼群体的遗传多样性程度处于较低水平;卡方检验结果表明哲罗鱼偏离Hardy-Weinberg遗传平衡。     

青海湖裸鲤同工酶表达的组织特异性分析

使用水平淀粉凝胶电泳方法,分析了20尾青海湖裸鲤的背部肌肉、肝脏、心脏和肾脏4种不同组织的13种同工酶(LDH,MDH,ME,CAT,IDH,EST,ACP,POD,HK,PGM,GDH,SOD,GPI)差异表达,并对部分同工酶基因位点及表达酶谱表型进行了初步分析,以期为其种质资源保护和开发以及遗传育种等方面的研究提供基础资料.结果显示,13种酶类中12种在4种组织中表现出明显的组织差异性,仅有ME在4种组织间差异性较小.其中HK以及GDH的组织差异性尤为明显,仅在肝脏组织中表达.同时使用了适用于这13种酶类表达的3种缓冲系统(TC8.0、TC7.0、EBT),共检测到26个基因位点.其中,Cat,Pgm,Est-1,Gdh,Hk和s-Mdh等6个基因位点为多态位点.进一步分析了这6种多态位点酶类的亚基类型、多态基因位点以及基因位点命名,并计算了多态位点比例(P0.99)为23.08%.     

天津地区养殖白鲢Hypophthalmichthys molitrix (Cuvier et Valenciennes)、建鲤(Cyprinus carpio var.jian)染色体核型(karyotype)调查与分析

采用活体注射PHA肾细胞培养法和外周血淋巴细胞培养法进行染色体制片,对天津地区养殖鲢、建鲤进行核型调查与分析,评价染色体数目及核型指标在养殖鱼类种质鉴定中的作用。调查结果表明,分布在不同养殖区的种质状况各不相同的12个采样点的养殖鲢、鲤样本染色体数目恒定,分别为2n=48和2n=100;各个采样点的养殖鲢、建鲤样本与以往相比在核型上均没有发生明显改变,这说明核型是种的标志特征,但与种质状况无明显的相关性。     

山东近海石鲽的同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳技术研究山东半岛南岸海阳近海石鲽同工酶的组织特异性及群体遗传结构。结果表明，石鲽的眼、鳃、肌肉、心脏、肝脏、肾脏、脾脏和鳍条共8种组织的17种同工酶表达有明显的组织特异性。对肝脏和肌肉两种组织的AAT、ADH、EST、GPI、G3PDH、IDHP、LAP、LDH、MDH、MPI、PGDH、PGM、SDH和SOD等14种同工酶进行了遗传学分析，共记录了21个基因座位，其中，GPI-2^*、JDHP-2^*、MDH-1^*、MPI-1^*、PGM-3^*、SDH^*共6个基因座位呈多态，其多态座位比例为0．2857(P0.99)，平均观测杂合度和预期杂合度分别为0．0321和0．0283，平均有效等位基因数为1．3650，遗传偏离指数均大于零。石鲽和圆斑星鲽同工酶比较分析表明，二者在AAT^*、ADH^*、GPI-1^*、IDHP^*、LDH^*、MDH-1^*、MDH-2^*、MDH-3^*、MPI-1^*、PGM-1^*、PGM-2^*、SOD^*和SDH^*存在基因置换或近于基因置换，两种间的遗传距离为1．3117。     

二、三倍体乌克兰鳞鲤染色体核型分析

以二、三倍体乌克兰鳞鲤为材料,采用植物血球凝集素(PHA)体内注射,肾组织细胞短期培养,常规空气干燥法制备染色体.其核型分析结果:二倍体乌克兰鳞鲤染色体2n=100核型公式为:26m+30sm+30st+14t,染色体臂数NF=156;三倍体乌克兰鳞鲤染色体的核型公式为3n=150=39m+45sm+45st+21t,染色体臂数NF=234,二、三倍体染色体数之比为1:1.5.二倍体核型与已报道的鲤鱼染色体核型相似.未发现性染色体.     

芬兰虹鳟鱼同工酶分析

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对芬兰虹鳟肌肉(M)、心(H)、肝(L)、肾(K)、眼(E)等5种组织中的乳酸脱氢酶(LDH)、乙醇脱氢酶(ADH)、苹果酸酶(ME)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)、过氧化物酶(POD)和酯酶(EST)进行了初步研究,并对各种酶的同工酶位点及酶谱表型进行分析。结果表明,除酯酶外,其他5种同工酶均表现出不同程度的组织特异性。同工酶表型种群遗传学研究发现,6种同工酶共记录15个基因座位,多态座位比例(P=40%)略高,位点有效等位基因数(Ne=1.4)较大,表明芬兰虹鳟种群遗传多样性偏高。     

建鲤和黑龙江野鲤自交以及正反交子代生长比较

以建鲤和黑龙江野鲤为亲本,建立黑龙江野鲤自交群体(HH)、建鲤自交群体(JJ)、黑龙江野鲤♀×建鲤♂群体(HJ)以及建鲤♀×黑龙江野鲤♂群体(JH)。于养殖198 d和588 d时测量体重、体长、体高和体厚4个生长参数。对生长性状、增重率、肥满度以及生长指数进行方差分析和LSD多重比较。结果表明,不同交配组合在这些指标上均有极显著差异(P0.01)。养殖198 d和588 d时,4个群体体重和体长大小顺序均为JHHHHJJJ。4个群体的绝对增重率和特定增重率均随养殖时间而减小。4个群体中,HJ在不同养殖时间内,特定增重率均为最大,JJ群体均为最小;而JH在不同养殖时间内,绝对增重率均为最大,198 d时JJ群体最小,588 d时HH群体最小,说明杂种群体生长性能优于自交群体。在不同的养殖时间内,JJ群体的肥满度均大于其他群体,随养殖时间增加,HH、JJ及HJ群体肥满度不断增大,而JH群体恰恰相反。4个群体的生长指数随养殖时间而增大,并均以JH群体生长指数最大。杂种优势分析表明,HJ群体体型介于黑龙江野鲤和建鲤中间,并随着养殖时间的增加,体型逐渐接近黑龙江野鲤。JH群体在养殖第588天时体高和体厚超黑龙江野鲤杂种优势出现了负值,其余数值均为正值,表现出显著的杂种优势。不同养殖时间,4个群体588 d与198 d体重间的相关系数均达到极显著水平(P0.01),JH群体558 d体长和198 d体长、558 d体高和198 d体高;HH群体558 d体厚和198 d体厚间的相关系数也达到了极显著水平(P0.01)。     

全州禾花鲤鳞片下层组织的结构及全长转录组分析

为研究全州禾花鲤(Cyprinus carpio var. Quanzhounensis)皮肤组织结构和转录组差异、丰富鲤鱼皮肤转录组信息,选用建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)和全州禾花鲤鳞片下层组织,利用透射电镜观察结构差异,发现禾花鲤与建鲤相比组织缺乏层叠排列的鸟嘌呤结晶且黑色素颗粒增多;利用牛津纳米孔(ONT)测序技术分析了转录组特征,获得高质量数据18.49 Gb,识别为全长序列17 182 183条,检测出可变剪接(AS)事件3 075个、可变多聚腺苷酸化(APA) 57 624个,预测新基因编码区序列15 615个、长链非编码RNA (lncRNA) 771个。其中,可变剪接事件中外显子跳跃、内含子保留数量在种间差异极显著(P<0.01),具有5个多聚腺苷酸化位点的转录本数量在种间差异极显著(P<0.01),表明可变剪接和多聚腺苷酸化参与性状形成相关的调控过程;共筛选出差异表达转录本841个,KEGG通路分析表明其在细胞外基质–受体相互作用、粘着斑等通路富集,GO分析发现其在细胞外隙、转录因子复合体、整合素复合物等词条显著富集,且最显著富集的KEGG通路和GO词条均与细胞外基质紧密关联,推测这些转录调控的变化可能导致皮肤细胞外基质的组成、密度和构象变化。后续研究应更多关注鸟嘌呤结晶缺失造成的皮肤性状变化,有助于全州禾花鲤种质资源开发与利用。     

铅在建鲤幼鱼组织中的积累与净化研究

采用半静态暴露染毒方式探讨了建鲤(Cyprinus carpio var.Jian)幼鱼肝胰脏、肠、鳃和肌肉中重金属铅的积累和净化特征,暴露水体含铅量为0.506μg/L。结果表明,不同部位中铅的积累量差异显著(P<0.05),积累量为肝胰脏>鳃>肠>肌肉。建鲤移入清水后,随着净化时间的延长,不同组织中铅的含量均逐渐降低,但变化趋势不同。肠中的铅被迅速净化;肝胰脏中铅的净化速度初期较快,之后变化缓慢,呈现波浪式起伏;鳃中的铅净化缓慢,肌肉中的铅含量下降缓慢,但在净化期其铅含量均低于国家标准。     

建鲤遗传改良的初步研究

用单养和混养法，对建鲤（Cyprinus carpio var.jian)后代选育群体和未选育群体；建鲤和黄河鲤（C.carpio)，建鲤和荷包红鲤（C.Carpio Var,wuyuanensis)的杂交种，亲本黄河鲤和荷包红鲤自后代6个试验组进行生长对比，结果表明，建鲤选育效果明显，品质提高；建鲤与黄河鲤杂交具有杂种优势，生长快且生长性能进一步提高。     

基于转录组测序的兴国红鲤微卫星标记筛选

采用Illumina高通量测序技术,对兴国红鲤(Cyprinus carpio var.singuonensis)垂体和性腺等组织进行转录组测序分析,筛选微卫星标记并分析其组成及特征。结果显示:共获得13 652个微卫星标记,对所得位点进行分类,单核苷酸重复类型占47.86%,二、三、四、五、六核苷酸重复类型所占比例分别为34.43%、16.32%、1.25%、0.12%以及0.02%。随机选取30个SSR位点进行PCR验证,有20对可以扩增出清晰稳定的条带。在24个兴国红鲤个体中对上述位点进行多态性分析,结果表明,具有多态性的微卫星引物为9对。不同位点得到的等位基因范围为2~4,平均等位基因数为3.111 1±0.993 8,观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)以及多态信息含量(PIC)平均值分别为0.597 2±0.233 2、0.539 7±0.178 0和0.467 2±0.172 1。9个微卫星位点中,有4个显著偏离哈代-温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE)(P0.05)。Illumina高通量测序提供了一种直观、高效开发微卫星标记的方法,所选兴国红鲤群体遗传多样性维持较好。     

建鲤新品系的选育

设计并采用家系选育、系间杂交和雌核发育技术相结合的综合育种技术培育成功的鱼类新品种建鲤,具有生长快、体型好、青灰色、肉质肉味好、饲料转化率高、适应性抗逆能力强等优点。为进一步提高建鲤的生长速度、遗传稳定性和抗逆能力,选用超大的亲本群体和选择强度、快速世代更新及低温繁育筛选等方法,对建鲤进行了3代选育和生产验证,而育成的建鲤新品系,较选育前的建鲤群体增重快13.6%～15.1%,日增重快13.7%～15.48%;青灰色、长体型等表型性状的一致性由选育前的96.2%和95%左右,提高到近乎100%。新品系体型增长,体色一致,群体整体性、美观性有明显提高,体长/体高比值平均增加0.37,增长13.8%,标准差减少11.4%,扩大了推广,进一步验证了建鲤的适应性和抗逆能力。表3参30     

亚甲基蓝在鲤体内消除规律研究

为探究常规用药条件下亚甲基蓝及其代谢物在水产动物体内的分布和消除规律,以鲤(Cyprinuscarpio)为研究对象,以质量浓度为15 mg/L的亚甲基蓝溶液浸泡试验鱼0.5 h后,将其饲养于水族箱中,采用高效液相色谱-质谱串联法检测亚甲基蓝及其代谢物在鲤各组织中的质量浓度,采用PK Solver药动学药效学数据处理软...     

建鲤基因组中一个ty3-gypsy反转录转座子的发现与分析

转座子是动植物基因组的重要组成部分,在前期研究中发现建鲤(Cyprinus carpio var.jian)基因组中存在一个ty3-gypsy反转录转座子类型的转座子,并将其命名为JRE转座子(Jian carp Retrotransposon,JRE)。为了研究JRE反转录转座子在建鲤基因组中的功能,采用PCR扩增、荧光定量PCR和原位杂交等方法对JRE转座子的特性进行了研究。JRE反转录转座子全长5126 bp,具有5?端470 bp和3?端453 bp长末端重复片段(long terminal repeat end,LTR),中间的开放阅读框(ORF)包括核心蛋白基因(gag)和酶基因区域(pol),其长度为4203 bp。pol基因具有典型的ty3-gypsy反转录转座子结构,基因顺序为PR-RT-RH-IN基因。对pol基因的同源分析表明,其与虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)、栉孔扇贝(Azumapecten farreri)、大堡礁海绵(Xiphophorus maculates)和斑剑尾鱼(Xiphophorus maculates)pol基因相似性分别为40.7%、40.0%、32.8%和30.1%,因此JRE可能属于JULE反转录转座子家族。采用实时定量PCR对JRE转座子在建鲤基因组内的拷贝数进行了测定,结果表明其拷贝数为124,同时对不同组织中的m RNA表达量的研究表明,JRE转座子在建鲤肝、肾、血、肌肉、性腺5种组织中均有表达,在肾和肝中表达量略高。染色体原位杂交结果表明,JRE转座子在建鲤的染色体上随机分布,没有明显的规律性。本研究表明,JRE转座子具有典型的反转录转座子结构,属于JULE转座子的分枝,在染色体上的分布不多,其转录活性并不是很高,对我们了解建鲤基因组构成和特点增加了知识储备,同时为利用转座子的活性进行转基因研究提供了一种新的途径和工具。