鸡促性腺激素释放激素对鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

用不同剂量鸡促性腺激素释放激素（ｃＧｎＲＨ－Ｉ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ）单独或与鸡ＬＨ（ｃＬＨ）协同处理短期（３ｈ）培养的鸡卵泡颗粒细胞，以观察鸡ＧｎＲＨ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明：随着卵泡的成熟，孕酮分泌量逐渐增加，到Ｆ１卵泡时增加最明显；在本实验所用细胞孕酮分泌都有明显促进作用，ＧｎＲＨ－Ⅱ使Ｆ２至Ｆ４卵泡颗粒细胞孕酮分泌量有增加，而对Ｆ３卵泡颗粒细胞作用量明显，用鸡ＧｎＲＨ－Ⅱ的促进作用更明     

鸡促性腺激素释放激素对鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

用不同剂量鸡促性腺激素释放激素(cGnRH-Ⅰ和 cGnRH-Ⅱ)单独或与鸡 LH(cLH)协同处理短期(3h)培养的鸡卵泡颗粒细胞,以观察鸡 GnRH 对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明:随着卵泡的成熟,孕酮分泌量逐渐增加,到 F_1卵泡时增加最明显;在本实验所用剂量范围内,鸡 GnRH 对颗粒细胞孕酮分泌有促进作用,其中 GnRH-Ⅰ对 F_1至 F_4卵泡颗粒细胞孕酮分泌都有明显促进作用,GnRH-Ⅱ使 F_2至 F_4卵泡颗粒细胞孕酮分泌量有增加,而对F_3卵泡颗粒细胞作用最明显,用鸡 GnRH 预处理30min 能加强鸡 LH 对鸡卵泡的颗粒细胞孕酮分泌的促进作用,其中 GnRH-Ⅱ的促进作用更明显。     

促性腺激素(LH,FSH)对鸡卵泡孕酮分泌的影响

摘出垂体12 h 后的卵泡孕酮(P_4)浓度显著下降.单独添加 LH 时第一卵泡(F_1)的P_4浓度显著增加,同时添加 LH 和 FSH 时,所有卵泡的颗粒层 P_4浓度恢复到对照的水平.但是单独添加 FSH 时无促进作用.LH 和 FSH 的处理对卵泡的卵泡膜 P_4浓度影响极小.在细胞培养液中添加 LH 和 FSH 可以促进颗粒层的 P_4合成,这种反应以 F_1最为明显.LH 和 FSH同时添加时对颗粒层 P_4合成有显著效果,但是对卵泡膜 P_4合成无明显促进作用.表明 P_4在 LH和 FSH 的协同调控下,主要在 F_1的颗粒层中合成.     

cGnRH对鸡卵泡膜细胞增殖的作用

建立鸡卵泡膜细胞体外无血清贴壁培养模型，研究了鸡促性腺激素释放激素（cGnRH－Ⅱ）对鸡卵泡膜细胞增殖的作用。细胞在培养箱内预培养约24h后进行各项处理，继续培养72h后，分别用胰蛋白酶消化成单个细胞，然后计数。结果表明：cGbnRH－Ⅱ能促进膜细胞增殖，作用效果具有剂量依赖关系；该促进作用能被GnRH拮抗剂（G－Ant）所阻断。这提示cGnRH－Ⅱ对膜细胞增殖的刺激作用有可能通过与膜细胞上特异的GnRH受体结合而起作用的。     

哺乳动物促性腺激素释放激素（GnRH）研究进展

从基因结构、合成代谢、神经元分布、生物学功能及生产应用等方面对哺乳动物促性腺激素释放激素（GnRH）进行简要综述。     

促性腺激素释放激素主动免疫公鸡的研究

将１３日龄的石歧杂公鸡分成６组，第１组于７８日龄进行人工阉割，第２、３、４、５组分别以促性腺激素－ＢＳＡ偶联物作抗原加佛氏佐剂乳化后按不同程序免疫公鸡，第６组单以ＢＳＡ免疫作对照，结果表明：与ＢＳＡ免疫组相比，第４、５组及阉鸡组血清睾酮水平均发生显著下降，各免疫去势组公鸡睾丸，鸡冠及肉垂都有不同程度的萎缩，睾丸曲细精管发育不良或受到抑制，６０日龄免疫去势效果明显比２０及４０日龄免疫的差，以相同的抗     

促性腺激素释放激素(GnRHs)及其Ⅰ型受体在哺乳动物中的研究进展

促性腺激素释放激素(GnRHs)是调节动物繁殖的关键激素,在哺乳动物中主要以2种形式存在.GnRHⅠ调节促性腺激素,GnRHⅡ则具有神经调节和促进性行为作用.GnRHs可通过自/旁分泌在生殖组织和肿瘤中发挥作用.但GnRH Ⅰ和GnRHⅡ似乎仍有信号的差异,通过Ⅰ型受体而产生不同的下游效应.配体受体的相互作用和受体构象变化参与受体激活原理已被部分确定.这些研究结果为选择新的促性腺激素释放激素类似物提供潜在的更广泛和更具体的应用前景.另外,通过合成新的促性腺激素释放激素类似物,可在生产中发挥更广泛和更具体的应用.     

卵泡刺激素对原癌基因c-myc在鸡卵泡上表达的影响

[目的]本试验旨在研究c-myc基因在鸡卵泡上的表达及卵泡刺激素(FSH)对其的诱导作用,为明确c-myc在鸡卵泡发育过程中的相关机制提供理论基础。[方法]体外分离鸡小白卵泡(SWF)、大白卵泡(LWF)、小黄卵泡(SYF)、F4和F1卵泡颗粒层和膜层,检测c-myc mRNA和蛋白的表达;应用50 ng·mL^-1FSH处理小黄卵泡36 h,测量卵泡颗粒层的厚度和密度,检测颗粒层和膜层c-myc、标记基因和周期相关基因的表达;体外分离、培养小黄卵泡颗粒细胞,预培养16 h,用siRNA干扰c-myc 24 h后,加入50 ng·mL^-1 FSH处理24 h,检测c-myc mRNA的表达。[结果]c-myc mRNA在等级前卵泡的颗粒层和膜层的表达水平都显著高于排卵前卵泡,卵泡的颗粒层和膜层上都有c-Myc蛋白表达。与对照组相比,FSH处理后,小黄卵泡颗粒层厚度增加约25.5%(P<0.05),密度增加约27.8%(P<0.01)。在小黄卵泡颗粒层上,FSH降低了c-myc和类固醇激素合成急性调节蛋白(star)mRNA的表达水平...     

GnRH在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位

[目的]研究促性腺激素释放激素（GnRH）在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位。[方法]采用免疫组织化学SuperPicTure^TM二步法检测5头青年摩杂一代水牛下丘脑、垂体和卵巢中GnRH的分布情况,研究GnRH在下丘脑、垂体及卵巢的分布上的联系,进而了解GnRH在下丘脑、垂体及卵巢三者之间分泌释放的途径。[结果]GnRH存在于青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的各个环节。青年摩杂一代水牛下丘脑中各主要核团都有GnRH免疫阳性神经元的分布,尤其以视上核、视前核、室旁核分布较多。对于垂体,GnRH免疫阳性产物只存在于青年摩杂一代水牛的腺垂体中。青年摩杂一代水牛卵巢中生殖上皮细胞、颗粒细胞和黄体细胞发现有GnRH免疫阳性产物。[结论]为进一步研究GnRH在生殖中的生理和作用机制提供形态学依据,并对青年摩杂一代水牛的繁殖育种起到参考指导作用。     

同源GnRH对鸡卵泡颗粒细胞增殖的影响

在建立鸡卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型的基础上,用鸡促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)单独处理,或同时加入 GnRH 拮抗物(GA)或与羊 LH(oLH)协同处理,继续培养48 h 之后,用胰蛋白酶分别消化成单个细胞然后计数。获得结果是:GnRH-Ⅱ能刺激颗粒细胞增殖,同时加入 GA 能阻断 GnRH-Ⅱ的效果;单独加入 oLH 处理能刺激细胞增殖,在加入GnRH-Ⅱ,同时再加入 oLH 处理,其细胞增殖数明显低于单独用 oLH 处理的细胞增殖数目。     

小鼠卵泡膜细胞成熟过程中Dnmts表达变化的研究

 【目的】揭示小鼠卵泡膜细胞成熟过程中DNA甲基转移酶（Dnmts）表达的变化,并初步探讨其可能的机制。【方法】对新生昆明白小鼠第3、5及8天（days post parturition,dpp3、dpp5和dpp8）的卵巢进行切片,经H.E染色,分别观察原始、初级、次级卵泡膜细胞的形成情况,统计各级卵泡的比例并对卵泡外缘的膜细胞进行计数;半定量PCR检测成熟膜细胞特异性表达基因CYP17A1及Dnmts转录水平在dpp3、dpp5、dpp8卵巢中的变化;免疫组化观察Dnmt1蛋白在dpp3、dpp5、dpp8小鼠卵巢中的分布情况。【结果】小鼠dpp3卵巢中的初级卵泡外缘存在“梭形细胞”;随出生后时间的推移,原始卵泡比例持续下降（P＜0.01）,次级卵泡比例持续升高（P＜0.01）,dpp3、dpp5初级卵泡比例无显著差异（P＞0.05）,而dpp8下降（P＜0.05）;初级卵泡周围“梭形细胞”数量的平均水平在dpp3和dpp5无显著差异（P＞0.05）,在dpp8上升（P＜0.05）;次级卵泡周围“梭形细胞”数量的平均水平在dpp3和dpp5无显著差异（P＞0.05）,在dpp8上升（P＜0.01）。CYP17A1转录水平在dpp3、dpp5极低且无显著差异(P＞0.05),在dpp8升高（P＜0.01）;Dnmt1s转录水平在dpp3、dpp5、dpp8持续升高（P＜0.01）;Dnmt1o转录水平在dpp5升高（P＜0.05）,在dpp8下降（P＜0.01）;Dnmt3a转录水平在dpp5升高（P＜0.01）,dpp3和dpp8转录水平无显著差异（P＞0.05）。Dnmt1免疫组化显示,卵泡颗粒细胞在dpp5、dpp8卵巢中着色呈阳性,dpp3则呈阴性;同时,“梭形细胞”在dpp3、dpp5卵巢中着色呈阴性,dpp8则呈阳性。【结论】膜细胞成熟可能导致Dnmt3a转录水平下降。Dnmt1s转录及表达水平在膜细胞成熟前较低,分化成熟后上调从而在膜细胞增殖过程中维持新建立的甲基化模式。     

牛卵泡微环境对颗粒细胞和卵母细胞及早期胚胎发育的影响

[目的]研究卵泡微环境对颗粒细胞与卵母细胞质量及体外受精胚胎发育的影响。[方法]从不同直径大小的卵泡中收集卵母细胞和颗粒细胞,Hoechst33342染色观察卵母细胞核形态;采用Annexin-V-FITC/PI法染色、流式细胞仪检测颗粒细胞的凋亡情况;进行受精卵体外培养,并计算受精率及受精卵的囊胚率。[结果]大卵泡（〉10 mm）和小卵泡（〈3 mm）内颗粒细胞凋亡率明显高于3～7和7～10 mm卵泡内的颗粒细胞凋亡率（P〈0.05）大卵泡和小卵泡内的大量卵母细胞呈现出染色质固缩、核碎裂及胞浆浓缩等凋亡特征。3～7和7～10 mm卵泡内的卵母细胞成熟率明显高于大卵泡和小卵泡（P〈0.05）。来源于不同直径卵泡的卵母细胞,其卵裂率和囊胚率差异均不显著。[结论]卵泡微环境是影响牛胚胎体外生产的主要环节,直径为3～10 mm卵泡内颗粒细胞质量及卵母细胞的体外成熟率较高,卵泡直径对卵母细胞受精及受精卵的早期发育没有影响。     

Kisspeptin-10对无血清培养鸡F1级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制研究

【目的】研究kisspeptin-10对无血清培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用及可能机制。【方法】选取200日龄处于产蛋高峰期的伊莎蛋鸡,于排卵前剖腹收集F1卵泡,分离纯化颗粒细胞,于含胎牛血清培养基中培养24 h,换成无血清培养基稳定培养24 h后,用不同浓度的Kp-10、U73122、EGTA等单独或共同处理细胞,收集细胞上清,放射免疫学方法检测培养基中孕酮含量。【结果】（1）通过免疫细胞化学方法,显示颗粒细胞上有Kp-10免疫活性样物质的阳性表达;（2）Kp-10处理可显著增加无血清培养的颗粒细胞的活力,100 nmol•L-1时可显著促进孕酮的分泌（P＜0.05）;（3）与对照组相比,2 μmol•L-1 U73122（磷脂酶C抑制剂）对孕酮的分泌无显著影响（P＞0.05）,而0.5、2 μmol•L-1 U73122能显著降低Kp-10对孕酮分泌的促进作用（P＜0.05）;（4）钙离子阻断剂Verapamil（1-100 μmol•L-1 ）呈剂量依赖性降低孕酮的分泌,于100 μmol•L-1时达显著降低水平（P＜0.05）;与1 μmol•L-1 Verapamil单独处理组相比,100 nmol•L-1 Kp-10与1 μmol•L-1 Verapamil同时处理可显著增加孕酮的分泌,而与10、100 μmol•L-1 Verapamil共同处理不能逆转其对孕酮分泌的抑制作用（P＞0.05）,且胞内钙离子含量与上清液中孕酮分泌水平相一致;（5）与100 nmol•L-1 Kp-10处理组相比,1和5 mmol•L-1 EGTA共同处理时孕酮分泌显著降低,当再加入1.5 mmol•L-1 Ca2+时孕酮分泌量显著增加。【结论】Kp-10促进体外培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌,其机制可能与胞内Ca2+信号通路有关。     

鸡胸腺APUD（样）细胞的超微结构观察

应用透射电镜在鸡胸腺内观察一类ＡＰＵＤ（样）细胞,其主要特征是胞质内含有膜包小分泌颗粒,颗粒的形态、大小、数量、内部结构及电子密度等有差异,有的颗粒为中等电子密度,有的为均质状高电子密度,有的在中等电子密度中含有一高电子密度的致密核芯;在高倍放大下,有的颗粒在界膜与内含物之间有一低电子密度的晕轮,宽１０￣２０ｎｍ,根据其超微结构特征,可将这类细胞分为３型：Ⅰ型细胞的分泌颗粒呈圆形,直径１５０－３８     

炔雌醇和菲2种环境内分泌干扰物对斑马鱼的影响研究进展

炔雌醇和菲在各种水环境中广泛分布,其对水生动物的繁殖、发育和生长等各方面有显著的影响.斑马鱼容易饲育,遗传学工具成熟,是研究脊椎动物的一种模式动物.综述了炔雌醇和菲2种内分泌干扰物对斑马鱼发育的影响及其机制的研究进展.     

逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究

 【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe中获得重组逆转录表达载体;采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG共转入293 10A1包装细胞中进行病毒包装,得到病毒原液经超速离心浓缩200倍后注入种蛋(第X期)胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA,进行PCR检测和Southern杂交检测。【结果】构建含EGFP完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体pour-pBabe-EGFP,提取孵化5.5 d鸡胚基因组DNA,经PCR、Southern杂交检测,嵌合体阳性率分别为75%和66.7%。【结论】通过用重组逆转录病毒体内感染鸡胚盘细胞的方法可获得嵌合体鸡。