γ干扰素体外释放试验在人和动物结核病诊断中的研究进展

结核病是给人类和动物健康造成严重影响的主要人兽共患传染病。早发现、早诊断、早干预对于有效地预防和控制结核病流行至关重要。γ干扰素是一种参与宿主抗结核感染的细胞免疫反应的细胞因子，基于其开发的γ干扰素体外释放试验可用于结核病诊断。鉴于目前酶联免疫吸附试验检测γ干扰素的方法存在诸多缺陷，例如耗时长、灵敏度低、无法区分潜伏性和活动性结核感染等，生物传感器正被尝试用于γ干扰素检测，以进一步提高诊断的灵敏性和特异性。本文归纳了将γ干扰素作为结核病生物标志物的多种检测技术，并讨论其适用范围和效果，以期为完善结核病诊断技术及开发新型诊断方法提供理论和技术参考。     

鸡II型干扰素存在亚型

采用RT-PCR法从惠阳胡须鸡克隆了II型干扰素基因(ChIFNγ2)。ChIFNγ2是含19个氨基 酸的信号肽和145个氨基酸的成熟蛋白，与已报道的鸡II型干扰素基因（ChIFNγ）长度一 致 ，核苷酸和氨基酸同源性分别为97%和92.7%；有12处氨基酸发生点变异。ChIFNγ2与禽类IFNγ和哺乳动物IFNγ在氨基酸水平上同源性分别为62.2% ～92.7%和26.5% ～31.8%。1980年国际干扰素命名委员会建议, 在一特定的干扰素型别内，氨基酸序列或组成方面有差异时可确 定为亚型。根据这些规定，惠阳胡须鸡ChIFNγ2可被定为一种新亚型的鸡II型干扰素。即II 型干扰素中存在亚型。     

羊干扰素α和γ融合表达及抗病毒活性分析

为进一步探究羊干扰素α和γ的抗病毒活性效果，根据GenBank羊IFN-α和IFN-γ基因序列，使用Linker连接合成目的序列，成功构建了3种重组表达质粒pET28a-OviIFN-γ、pET28a-OviIFN-α、pET28a-OviIFN-γ/α并进行原核表达。用细胞病变抑制法和RT-qPCR测定重组蛋白rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ的抗病毒活性。结果表明，rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ在牛肾细胞(MDBK)以及非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞中有抗病毒活性，且rOviIFN-α/γ的抗病毒效果最优；rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ能够显著上调MDBK以及Vero细胞中4种干扰素刺激基因(IFN stimulated genes, ISGs)的mRNA转录水平，且rOviIFN-α/γ对干扰素刺激基因的上调水平最显著。综上所述，本试验表达的重组蛋白都具有抗病毒作用，其中串联表达的重组蛋白抗病毒活性以及干扰素刺激基因转录水平较高。     

猪干扰素基因研究进展及其在抗病育种中的应用展望

干扰素是动物机体最重要细胞因子之一，目前计有5种猪干扰素(I型干扰素α、β、ω、δ和Ⅱ型干扰素γ)被发现。作者列举了主要猪干扰素(INFα、β、γ)的基因结构、抗病毒和免疫调节功能，概述了干扰素在机体中以JAK-STAT信号转导通路方式为主的抗病毒机理，同时分析了猪干扰素基因可能存在与猪综合抗病力密切相关的遗传多态性及其在猪抗病育种中的应用前景。     

鸡Ⅱ型干扰素存在亚型

采用RT－PCR法从惠阳胡须鸡克隆了Ⅱ型干扰素基因（ChIFNγ2)。ChIFNγ2是含19个氨基酸的信号肽和145个氨基酸的成熟蛋白，与已报道的鸡Ⅱ型干扰素基因（ChIFNγ)长度一致，核苷酸和氨基酸同源性分别为97％和92．7％；有12处氨基酸发生点变异。ChIFNγ2与禽类IFNγ和哺乳动物IFNγ在氨基酸水平上同源性分别为62．2％－92．7％和26．5％－31．8％。1980年国际干扰素命名委员会建议，在一特定的干扰素型别内，氨基酸序列或组成方面有差异时可确定为亚型。根据这些规定，惠阳胡须鸡ChIFNγ2可被定为一种新亚型的鸡Ⅱ型干扰素。即Ⅱ型干扰素中存在亚型。     

牛结核病γ-干扰素体外释放检测随时间变化规律

检疫-扑杀是牛结核病防控与净化的重要措施，而准确诊断是有效实施结核病“检疫-扑杀”控制策略的基础和前提。近年来，许多牧场在结核检疫净化中采用牛结核皮试辅以牛结核γ-干扰素体外释放检测作为判定标准。随着两种方法结合使用的增加，皮试是否影响γ-干扰素体外释放检测日益引起关注。本研究在两个牛场分别对48头牛和55头牛进行了连续6周的γ-干扰素体外释放检测跟踪，明确了奶牛结核病γ-干扰素体外检测检出率和验证率随时间变化的规律，皮试后6周内γ-干扰素体外试验检出率呈“V”字形变化；验证率逐步上升，在皮试后7～42d维持在100%。     

鸭α、γ-干扰素研究进展及遗传进化分析

本文对目前鸭干扰素α、γ干扰素基因的研究进展做了总结,并且利用DNAstar软件对鸭α、γ干扰素基因进行了序列和遗传进化分析。结果表明,不同序列的鸭α-干扰素核苷酸序列同源性在99.5%-100%之间,禽类间α-干扰素核苷酸序列同源性在71.4%-96.7%之间,不同序列的鸭γ-干扰素核苷酸序列同源性在99.6%-100.0%之间,禽类间γ-干扰素核苷酸序列同源性在81.8%-94.9%之间。     

重组牛γ-干扰素对牛外周血淋巴细胞分裂抑制作用

观察重组牛γ-干扰素对牛外周血淋巴细胞的作用。无菌采取牛外周血，分离培养淋巴细胞，取第一代细胞，分为试验组和对照组。试验组加入不同浓度的重组牛γ-干扰素，作用5d，观察细胞数量及细胞凋亡效应。结果为试验组淋巴细胞数目下降，细胞凋亡效应减弱。试验结果表明，重组牛γ-干扰素对牛外周血淋巴细胞具有抑制分裂及抗凋亡的作用。     

贵州白香猪γ-干扰素真核表达质粒的构建

为了构建贵州白香猪γ-干扰素真核表达载体,试验以已构建的含有γ-干扰素基因的pMD-GZ-IFN-γ质粒为模版,利用特异性引物进行PCR扩增,得到大小为501 bp的γ-干扰素基因的开放阅读框,将所得IFN-γ基因克隆至经相同双酶切处理后的pcDNA3.1（＋）真核表达载体中,构建重组质粒pcDNA3.1（＋）-IFN-γ。测序结果表明：克隆至pcDNA3.1（＋）的基因序列为γ-干扰素序列,说明γ-干扰素基因真核表达载体构建成功。     

贵州白香猪γ-干扰素真核表达质粒的构建

为了构建贵州白香猪γ-干扰素真核表达载体,试验以已构建的含有γ-干扰素基因的pMD-GZ-IFN-γ质粒为模版,利用特异性引物进行PCR扩增,得到大小为501 bp的γ-干扰素基因的开放阅读框,将所得IFN-γ基因克隆至经相同双酶切处理后的pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-IFN-γ。测序结果表明:克隆至pcDNA3.1(+)的基因序列为γ-干扰素序列,说明γ-干扰素基因真核表达载体构建成功。     

马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏茵中表达及其多克隆抗体制备

采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞（PBMC）中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素（Equine interferon-γ，EIFN-γ）基因，将其克隆至载体pCR2．1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒（pCR-EIFN-γ）中扩增马干扰素成熟蛋白（MatureEIFN-γ，mEIFN-γ）基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定，将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明，mEIFN-γ基因全长为441b口，含一个开放阅读框，编码146个氨基酸的成熟蛋白；对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，重组蛋白相对分子量约为18Ku，且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下，采用Ni^＋亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体，为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。     

牛γ-干扰素在牛结核检测中的研究应用

γ-干扰素是细胞因子超家族中IFN家族的重要成员,具有广泛的生物学功能,其功能的多样性是通过诱导细胞表达多种蛋白质而实现的。作者对γ-干扰素的产生、诱导、临床试验、检测诊断及γ-干扰素的优点和其他用途的研究进展进行综述。     

γ-干扰素的研究进展及在畜牧中的应用

γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)也叫免疫干扰素,在抗病毒、抗肿瘤和免疫调节上作用强大。针对IFN-γ及其受体、IFN-γ的基因表达调控、生物学功能及在畜牧生产中的应用作一概述。     

干扰素在猪白细胞中的组成型表达

用流式细胞术可检测出SPF猪外周血单核细胞中的α-干扰素和γ-干扰素阳性细胞,在一些感染、未感染猪繁殖与呼吸综合征猪及阴性猪中也可检测到γ-干扰素阳性细胞。γ-干扰素阳性细胞分为单核细胞和浆细胞样树突细胞。通过Western blotting可以检测外周血单核细胞中有无α-干扰素的表达;通过免疫沉淀反应可在健康SPF猪外周血单核细胞中检测到大小为32和55～57ku的α-干扰素条带;样品中同样可检测到γ-干扰素,细胞因子呈大小为24、37、54ku的条带。细胞内干扰素的巨大作用可能是由于齐聚反应形成的,与之前对人α-干扰素的描述相像。猪细胞内α-干扰素在牛肾细胞系细胞上表现出预期的抗病毒活性。结果表明,干扰素以其独特的分子特性在猪白细胞中呈组成型表达。     

干扰素在猪白细胞中的组成型表达

用流式细胞术可检测出SPF猪外周血单核细胞中的α-干扰素和γ-干扰素阳性细胞。在一些感染、未感染猪繁殖与呼吸综合征猪及阴性猪中也可检测到γ-干扰素阳性细胞。γ-干扰素阳性细胞分为单核细胞和浆细胞样树突细胞。通过Western blotting可以检测外周血单核细胞中有无α-干扰素的表达。通过免疫沉淀反应可在健康SPF猪外周血单核细胞中检测到大小为32和55～57ku的α-干扰素条带。样品中同样可检测到γ-干扰素,细胞因子呈大小为24、37、54ku的条带。细胞内干扰素的巨大作用可能是由于齐聚反应形成的,与之前对人α-干扰素的描述相像。猪细胞内α-干扰素在牛肾细胞系细胞上表现出预期的抗病毒活性。结果表明,干扰素以其独特的分子特性在猪白细胞中呈组成型表达。     

基因工程猪γ-干扰素对PRRSV和SIV混合感染猪的预防效果试验

应用基因工程猪γ-干扰素和血清对人工感染PRRSV(繁殖与呼吸综合征病毒)和SIV(猪流感病毒)仔猪的预防试验，结果表明猪γ-干扰素预防两种病毒混合感染效果显著，感染前和感染后肌肉注射5万单位猪的发病率分别下降71．2％和60％，猪γ-干扰素和特异性抗体联合使用效果最好，可100％预防病毒感染，表明干扰素和抗体在抗病毒感染方面起到协同作用。本试验不仅为PRRSV和SIV混合感染提供了良好的预防方法，还将对病毒病的预防和治疗起到借鉴作用。     

延边白鹅γ干扰素基因的克隆及序列分析

为了研究延边白鹅γ干扰素的生物学特性,本试验采用刀豆素（ConA）刺激延边白鹅外周血淋巴细胞,提取总RNA,经RT-PCR方法扩增鹅γ干扰素基因,将其克隆到pMD18-T载体中,进行序列和序列分析。结果显示,延边白鹅γ干扰素基因全长495bp,经序列比对发现,克隆到的延边γ白鹅干扰素基因（JX966250）与哈尔滨鹅γ干扰素基因（AY524421）核苷酸序列同源性高达100%,与广东狮头鹅（EU030377）核苷酸序列同源性达99.6%,而三者的氨基酸同源性为100%。本试验成功克隆到延边白鹅γ干扰素基因,为进一步研究鹅干扰素的分子生物学特性和抗病毒作用机理奠定了基础。     

牛γ-干扰素EIA与TST检测牛结核病的比较

采用牛γ-干扰素EIA（酶免疫分析）与结核菌素皮内试验（TST）两种方法对某奶牛场中182头奶牛进行牛结核病的检测,并对牛γ-干扰素EIA与TST两种检测方法进行比较。结果：TST检出阳性123份、可疑20份、阴性39份,牛γ-干扰素EIA检出阳性58份、阴性124份,TST的阳性率大于牛γ-干扰素EIA,EIA与TST相比,敏感性为30.30%、特异性为82.05%、符合率为39.56%。     

IFN-γ研究进展及其在猪繁殖与呼吸综合征研究中的应用

γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,又称为Ⅱ型干扰素或免疫干扰素,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子(macrophage activating factor,MAF),具有强大的免疫调节作用和抗病毒、抗肿瘤作用。目前,干扰素基因工程和基因治疗研究引起了广泛关注,已被应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究。作者就IFN-γ的基本特征、生物学活性、检测及其在猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)中的研究应用进行了综述。     

γ干扰素及其在动物疾病防控中的应用

γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,又称为Ⅱ型干扰素或免疫干扰素,主要由活化的T细胞和NK细胞产生.IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子(macrophge-activating factor,MAF),具有强大的免疫调节作用和抗病毒、抗肿瘤作用.目前,干扰素基因工程和基因治疗研究引起了广泛关注,已被应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究.文章就IFN-γ的基本特征、生物学活性及其在动物疾病防控中的应用做一综述.