大白菜游离小孢子培养中若干因素对胚状体诱导和植株再生影响

以多种类型的大白菜品系及F1为试材,探索了若干因素对大白菜游离小孢子培养效果的影响。结果表明：不同基因型的大白菜游离小孢子的成胚能力差异极大,产胚量最高的基因型达到187个／皿,最低的为0个／皿;NLN－13液体培养基中BA的浓度为0．2mg/L（毫克／升）,有利于小孢子胚状体的发生;NLN－13液体培养基中添加少量活性碳可明显促进小孢子胚状体的形成;大白菜小孢子植株在1／2MS＋3％蔗糖＋0．8％琼脂＋0．1mg/ml（毫克／升）NAA生根培养基上生根良好,将已生根的小孢子植株移到1／2塘土＋1／2粪土的盆中便可成活与生长。     

小白菜小孢子胚状体诱导成苗及利用

以10个小白菜F1为试材进行游离小孢子培养,研究小孢子胚发生及其成苗的主要影响因素,并对获得的双单倍体以及用其配制的杂交组合的园艺学性状进行鉴定。结果表明,品种间小孢子出胚率差异较大;NLN-13培养基中大量元素减半有利于小孢子胚发生,胚诱导率达100%;培养基中添加适量的6-BA和NAA可以提高小孢子出胚率;小孢子胚成苗培养基的适宜琼脂浓度为1.0%,小孢子胚成活率可达85.88%;MS+3%蔗糖+0.8%琼脂是小孢子再生植株继代和壮苗的适宜培养基,MS+3%蔗糖+0.8%琼脂+NAA0.1mg.L-1是小孢子再生植株生根的适宜培养基;双单倍体及其与自交系配成的杂交组合整齐一致。     

不同基因型大白菜小孢子胚状体诱导及植株再生

以9个大白菜品种的花蕾为试材,研究了基因型、6-BA以及不同固体培养基对大白菜小孢子胚发生的影响,以期为其它十字花科蔬菜小孢子培养体系的建立提供技术参考。结果表明:不同基因型大白菜的小孢子胚诱导率具有明显差异,9个大白菜品种中有6个诱导出胚状体,‘北京特好吃火锅菜’出胚率最高,达到每蕾12.38胚;添加0.3mg/L的6-BA可以促进小孢子胚状体的形成,以‘北京特好吃火锅菜’提升效果最显著;添加0.01g/L活性炭的MS固体培养基比B5培养基更适于成熟胚状体发育成苗。     

春结球黄心大白菜小孢子胚诱导和植株再生

以引自韩国和日本的14个春结球黄心大白菜优良杂交种为试材进行小孢子培养,对影响胚状体诱导和植株再生的因素进行了研究。结果表明,不同基因型春结球黄心大白菜小孢子胚诱导率达极显著水平;不同品种对培养基中添加生长调节剂的反应不同;40r·min^-1 低频振荡培养对小孢子胚诱导有促进作用;适宜的小孢子胚生芽培养基为MS+2.0 mg·L^-1 -16-BA+0.1 mg·L^-1 -1NAA+3%蔗糖+0.8%琼脂。     

白菜小孢子超低温保存及复苏后胚状体诱导

随着白菜游离小孢子培养技术的不断优化,通过诱导小孢子胚状体获得大量DH系在白菜育种等科研领域得到了广泛应用。但小孢子供体植株受生长季节、生长期等影响,无法长期持续获取高生活力白菜小孢子,成为目前阻碍白菜细胞工程相关研究顺利推进的重要问题之一。本试验利用超低温技术对10份白菜材料小孢子开展冻存复苏研究,结果表明：利用改良B5液体培养基作为冷冻保护剂,白菜小孢子生活力明显高于传统冷冻保护剂二甲基亚砜处理的白菜小孢子;小孢子-80 ℃(冰箱)和-196 ℃(液氮)冻存180 d后生活力仍保持在85%以上,且两个温度处理间差异不显著,实际应用中可选择-80 ℃冰箱冻存替代传统-196 ℃液氮冻存;利用0.5 mL冻存管保存的白菜小孢子最适复苏条件为37 ℃恒温水浴40 s,在-80 ℃冰箱冻存90 d后复苏的小孢子平均生活力达87.9%。复苏冻存30、60、90 d后易出胚材料的白菜小孢子诱导获得了胚状体及再生植株;复苏冻存180 d的白菜小孢子在高温热激诱导条件下仍可感应胁迫,表现为体积膨大,且具胚胎发生能力的小孢子能够进行细胞分裂。本试验为国内首次开展的白菜小孢子超低温冻存研究,建立了白菜...     

大白菜游离小孢子培养技术研究进展

综述了影响大白菜小孢子培养的主要因素,阐述了影响大白菜小孢子植株再生的因素,总结了大白菜小孢子胚再生植株的继代与加代技术,提出了该技术存在的问题,并展望了这项技术在研究和生产实践中的应用前景.     

菜用羽衣甘蓝的小孢子胚诱导和植株再生

 以引自日本村田种苗公司的菜用羽衣甘蓝杂交种‘绿叶多汁’为试材, 对小孢子胚诱导条件、胚状体转接时间、生芽培养基和生根培养基进行了优化筛选。在NLN-13 + 0.1 mg·L^{- 1} 6-BA + 0.1mg·L^-1 NAA和NLN-13 + 0.2 mg·L^-1 6-BA + 0.2 mg·L^-1 NAA两种培养基上获得了胚状体, 其发生率分别为1.38胚·蕾^-1和0.98胚·蕾^-1; 转胚时间以接种培养后25 d为宜; 适宜的胚状体生芽培养基为MS +2.0 mg·L^-1 6-BA + 0.1 mg·L^-1NAA + 3%蔗糖+ 0.7%琼脂, 丛生芽诱导率为56138%; 生根培养基以1/2MS + 0.1 mg·L^-1 NAA + 3%蔗糖+ 0.7%琼脂为宜, 生根率100%。     

球茎甘蓝小孢子培养胚诱导和植株再生研究

以10个球茎甘蓝品种（系）为试材,采用游离小孢子培养方法,研究胚状体发生及其再生植株获得方法。研究结果表明,添加适量6-BA不仅使胚诱导成功率达到了100%,还显著提高了出胚率;胚状体发育程度和整齐度与基因型及每皿出胚数有关;子叶期为最佳的转接时期;MS＋0.5 mg/L 6-BA＋0.1 mg/L NAA是最适的成苗培养基。     

甘蓝胚状体诱导成苗因素研究

以3个优良甘蓝品种为试材,进行了游离小孢子培养和胚状体植株再生技术研究,以期探讨不同甘蓝材料的基因型、胚状体类型、不定芽大小、烯效唑对不定芽诱导和生根的影响。结果表明:甘蓝子叶型胚容易发育单芽,鱼雷型胚和球型胚容易形成丛生芽;且单芽率和丛生芽率在不同基因型之间存在差异。高度大于2cm的不定芽转接到生根培养基上后生长速度先慢后快,生根数少且细长;小于2cm的不定芽生长速度先快后慢,生根数多且粗壮。小孢子不定芽在添加0.50mg/L烯效唑的MS+0.3mg/L NAA生根培养基中生根率最高且根系生长健壮,移栽成活率高达95.6%。     

黄瓜游离小孢子培养诱导成胚和植株再生

 以10个不同基因型黄瓜为试材进行游离小孢子培养,通过对成胚条件的系统研究,从‘7447’和‘Poinsett97’中获得了子叶形胚和再生植株。研究结果表明：基因型和小孢子发育时期是限制黄瓜游离小孢子成胚的关键因子。不同品种间胚状体产量差异显著,每皿产胚1.5～33.4个。单核靠边期是进行黄瓜游离小孢子培养的最佳时期。低温预处理有利于胚状体的诱导,4 ℃预处理2～4 d为宜,以处理2 d时胚状体产量最高。外源激素在诱导胚状体时并非必需,但低浓度的外源激素（0.5 mg·L^-1 2,4－D、0.2 mg·L^-1 6－BA）更能促进小孢子成胚。NLN和B5两种基础培养基在诱导胚状体上无显著差异。子叶形胚易分化成苗,而其它类型的胚状体不能获得再生植株。     

芥蓝游离小孢子培养初报

 以芥蓝的5个基因型为试材，对游离小孢子培养诱导胚状体发生及植株再生进行了初步探讨。结果表明：供体基因型对成功诱导胚状体发生至关重要；振荡培养明显有利于胚状体的发育；改良MS和B培养基对诱导植株再生没有差别。     

大白菜游离小孢子培养技术研究

游离小孢子培养技术是获得大白菜单倍体植株的有效途径之一。通过对影响大白菜游离小孢子胚胎发生的主要因素一材料基因型、供体母株生长状态、小孢子发育时期、培养方法、培养条件和影响植株再生频率的因素以及小孢子植株的加倍方法等进行了综述。     

番木瓜体胚发生及植株再生研究

研究了外植体类型及培养基的不同激素配比等因素对番木瓜愈伤组织诱导和体胚发生的影响。结果表明,番木瓜的子叶和幼胚两种不同的外植体均能诱导愈伤组织、体胚发生和实现植株再生,但在愈伤组织诱导上存在差异,在MS+2,4-D1.00mg/L+BA0.30mg/L+NAA0.05mg/L培养基上诱导的愈伤组织较好。添加一定浓度的硫酸腺嘌呤(ADS)、水解酪蛋白(CH)可以促进番木瓜体胚发生,在生根培养基上生根后,可移栽成活。     

大白菜游离小孢子培养胚胎发生中的加倍机制

 利用Leica体视显微镜, DAPI荧光染色观察比较大白菜小孢子正常发育为成熟花粉粒与游离小孢子培养胚胎发生细胞核的分裂方式, 探讨大白菜游离小孢子培养胚胎发生及其自然加倍的机理。观察结果显示以B途径为主要发育途径的大白菜小孢子, 胚胎发生的启动机制是热激诱导下单倍体小孢子体积膨大, 染色体发生自然加倍, 从而激发小孢子进入孢子体发育途径; 大白菜小孢子胚再生植株具有较高的自然加倍率, 这与小孢子培养热激诱导激发小孢子单核自然加倍为二倍体密切相关。     

芥蓝游离小孢子培养及植株再生研究

对12个基因型的芥蓝进行了游离小孢子培养及植株再生研究.结果表明:供体基因型对诱导胚胎发生至关重要;最佳热激温度为32℃,24h;单核靠边期到双核期的小孢子最适合进行胚胎诱导;NLN培养基中的最佳蔗糖浓度为130 g·L-1;添加活性炭可以提高成胚速度和质量;15～25 ℃的供体植株生长的环境温度决定着游离小孢子培养的成败,将子叶型胚胎转移到MS固体培养基上可直接发育成植株.     

小白菜小孢子培养再生植株的倍性与基因组DNA甲基化的关系

对小白菜品种进行游离小孢子培养,得到9株再生植株,其中2株为单倍体,7株为二倍体,二倍体自然加倍率为77.7 %。为 避免材料间差异,取单倍体和二倍体再生植株各2株,提取单株DNA,分别构建单倍体和二倍体DNA混合池。利用甲基化敏感性限制性 内切酶-PCR法,结合SRAP分子标记技术,对2个DNA混合池进行筛选,共筛选768对引物,只有在未酶切的单倍体和二倍体DNA池中SRAP 引物扩增无差异,而酶切后有差异的条带,才认为是单倍体和二倍体甲基化差异。试验共获得8对含有多态性的引物,试验结果证明 小白菜小孢子培养获得的再生植株的倍性与基因组DNA甲基化有关。     

结球甘蓝—大白菜异源三倍体小孢子培养的研究

 为创建结球甘蓝—大白菜异附加系, 以大白菜二倍体(AA, 2n=2x=20) 与结球甘蓝四倍体(CCCC, 2n=4x=36) 杂交获得的8个异源三倍体(ACC, 2n=3x=28) 单株系为试材, 进行游离小孢子培养研究, 获得再生植株, 并对其进行了染色体数目鉴定和性状调查。结果表明, 异源三倍体(ACC) 的小孢子诱导成胚的能力低于双亲; 在NLN中添加15%的蔗糖和0.1 mg·L^-1 6-BA、0.2 mg·L^-1 2, 4-D、0.05 mg·L^-1 KT的培养基上小孢子胚胎发生最高为0.0250个·蕾^-1, 8个株系间有差异, 平均为0.0100个·蕾^-1; 胚胎再生率只有33.3%。小孢子再生植株染色体数在14～27条之间, 田间性状表现多样。