根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化条件的优化

利用山东省广泛栽培的马铃薯品种为材料，对影响马铃薯遗传转化的抗生素浓度、农杆菌浓度、预培养时间和共培养时间等进行了研究。结果表明：（1）卡那霉素Km浓度以15－25mg/l作为马铃薯叶圆片转化时的选择压更合适；（2）羧苄青霉素（Cb）比头孢霉素Cefo更适合用于农杆菌介导的马铃薯叶圆片的遗传转化；（3）外植体预培养时间4d，共培养时间3d为最好；（4）菌液浓度以OD600＝0.5左右最好。上述条件的优化大大提高了马铃薯遗传转化效率。     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化的一些影响因素

对根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化过程中涉及的外植体选择、预培养、共培养时间等因素进行优化。结果表明,马铃薯的茎段和叶片均能诱导出愈伤组织并分化成苗;在转化前对外植体预培养2d,再用OD600为0.5的农杆菌菌液侵染10min,共培养3d,转化效率较高。利用优化的农杆菌介导法进行转化,对再生苗进行PCR检测,结果表明,特异切割马铃薯纺锤块茎类病毒的核酶基因已导入了马铃薯。     

野生型根癌农杆菌对马铃薯的遗传转化研究

用不同的野生型根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)T37、B6、TFA16YET、FA16YK对马铃薯普通栽培种甘农薯1号的块茎圆片、茎段、叶切片、试管苗,美国引进品种褐皮.布尔班克的块茎圆片以及新型栽培种NW-174实生苗的子叶及下胚轴等组织进行了离体侵染和整株侵染实验,发现:不同的菌种对同一组织以及相同的菌种对不同组织的侵染效果均不同。在供试菌株中,以TFA16YE的转化效果最好。对NW-174新型栽培种实生苗的子叶、下胚轴进行的侵染实验表明,这两种组织的转化率较高。结果表明,在离体转化程序中,外植体的生理状态、发育阶段以及供试菌株的代谢活性及培养条件等均是影响转化效率的重要因素。     

根癌农杆菌介导的番茄遗传转化

利用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA101携带LycB基因（番茄红素β-环化酶）和潮霉素抗性基因，以东农704、708、709三个番茄品种的子叶、茎段为转化受体对番茄进行遗传转化，经PCR分子检测初步证明，目的基因LyeB已整合进番茄基因组中．     

根癌农杆菌介导苹果遗传转化研究进展

论述和分析了影响苹果高效离体再生的主要因素 ,包括试验材料苹果的基因型、外植体生理状态、培养基类型、植物激素、Ag NO3、前期暗培养、抗生素等内外因子 ,以及影响根癌农杆菌介导苹果遗传转化的主要因素 ,包括苹果基因型、外植体生理状态、菌株类型、菌液浓度、活化物质的应用、共培养、预培养、选择培养、培养基成分等内外因子。并对其研究现状、存在的问题及应用前景作了简要概述     

根癌农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化条件的研究

以马铃薯茎段作为受体转化材料.通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,对影响马铃薯遗传转化的多种因素(抗生素质量浓度、农杆菌质量浓度、共培养时间等)进行研究.结果表明,卡那霉素(kanamycin,Kan)梯度在抗性愈伤组织诱导、芽分化过程中以100 mg·L-1为宜,但在生根过程中以50 mg·L-1为宜,菌液质量浓度以OD600为0.5,共培养时间为3 d,抑菌剂的选择以羧苄霉素(carbenicillin,cb)更适合.对转基因植株进行PCR检测表明,目的基因已整合到马铃薯基因组中.     

根癌农杆菌介导水稻遗传转化研究进展及展望

自1994年建立了农杆菌介导的粳稻高效遗传转化体系以来,在短短十几年里取得了飞速发展。概述了农杆菌介导水稻遗传转化的研究历史和原理、影响农杆菌介导水稻转化体系的重要因素、转基因水稻的特点和外源基因的稳定性,并探讨了农杆菌介导水稻遗传转化研究中存在的问题与对策。     

根癌农杆菌介导的植物遗传转化研究

介绍了农杆菌介导的植物原位转基因方法发展状况、技术环节以及在转化机制上的研究结果,并对存在的问题以及应用前景进行了讨论。     

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展

根癌农杆菌介导的遗传转化是近20年来真菌研究的主要技术之一。农杆菌介导转化(ATMT)技术已广泛应用于随机突变试验中,以确定哪些基因是真菌与昆虫、植物、哺乳动物甚至其他真菌的致病相关基因。该技术广泛地应用于正向和反向遗传学,使得许多真菌基因功能得以阐明。尽管ATMT技术影响深远,但该技术作为一种转化工具在真菌中的应用并不均衡。本文综述了ATMT技术在发掘真菌功能基因方面的最新进展,以及它的优点和局限性。     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系的研究

以NHD_3、NC、NF三种马铃薯品种的茎段为外植体,筛选出诱导形成愈伤组织的培养基,探讨不同转化条件对马铃薯遗传转化效率的影响。结果表明:在1.0 mg·L~(-1) 6-BA浓度不变情况下,愈伤诱导培养基中NHD_3、NC、NF茎段分别在NAA浓度为0.2、0.3、0.4 mg·L~(-1)时愈伤形成及生长最好;在茎段预培养2 d,共培养2d,农杆菌菌液在OD_(600)=0.6的条件下转化所得抗性愈伤诱导率最高。     

根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化研究进展

目前,利用根癌农杆菌介导方法获得了许多转基因植株,由于甘薯本身的特性致使部分甘薯的遗传转化受到限制,但在研究过程中可根据不同甘薯品种选择不同的受体、条件,用根癌农杆菌介导的方法也获得了成功。综述了根癌农杆菌介导法的转化机理及影响根癌农杆菌转化甘薯效率的诸多因素,如:植物基因型、转化受体、菌液浓度、选择标记等,以及采用遗传工程技术改良甘薯品种的进展。     

农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化体系优化研究

以甘肃主栽品种的茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性出芽的影响,初步建立了马铃薯品种“陇薯3号”和“台湾红皮”的遗传转化体系并获得了转化植株。卡那霉素生根筛选和PCR鉴定结果表明,再生的转化植株假阳性率比较高,要获得预期的转基因植株群体需加大遗传转化工作中转基因植株的数量。     

根癌农杆菌介导的水稻遗传转化影响因素研究

从组织培养体系和根癌农杆菌侵染体系两个方面,对影响根癌农杆菌介导的水稻遗传转化频率的各种因素作了具体的分析和综述。     

农杆菌介导半夏凝集素基因对油菜的遗传转化

以3～4d苗龄的甘蓝型油菜品种陇油2号带柄子叶为转化受体材料,通过农杆菌LBA4404介导将半夏凝集素抗虫基因（pta）导入,获得抗卡那霉素的抗性植株3株。实验中还对影响油菜遗传转化的外源激素种类和配比进行了研究,结果表明,在预培养阶段1．0mg／L 2,4-D与0．2mg／L6-BA配合使用比单独使用2,4-D效果好,在幼苗分化阶段2．5mg／L6-BA、0．1mg／L NAA和0．5mg／L GA3配合使用有促进芽分化、抑制根分化的作用。     

根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究进展

介绍了近年来国内外根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究的受体系统、研究现状、主要影响因素、发展限制问题和策略,并对今后根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究的发展和方向进行了展望。     

根癌农杆菌法转化康乃馨的条件探索

[目的]为构建高效的康乃馨遗传转化体系奠定基础。[方法]以康乃馨叶片为受体材料,通过抗G418筛选,探讨预培养时间、根癌农杆菌菌液浓度、共培养时间等因素对根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的影响。[结果]20 mg/ml G418是康乃馨叶片转化的适宜浓度。随着预培养时间的增加,康乃馨叶片的存活率降低,预培养2~3 d时抗性芽分化率较高。当根癌农杆菌OD600为0.5~0.8时,抗性芽分化率较高,适合康乃馨转化。共培养2~3 d时,康乃馨叶片生长状态好,抗性芽分化率最高。[结论]预培养、共培养各2~3 d,菌液浓度OD600为0.5~0.8是根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的适宜条件。     

农杆菌介导的中华补血草遗传转化体系的建立

[目的]为利用转基因技术培育中华补血草新品种奠定基础。[方法]对农杆菌介导的中华补血草转化体系中的各种影响因素进行了系统研究,以构建中华补血草的遗传转化体系。[结果]中华补血草叶片对卡那霉素敏感,以50 mg/L卡那霉素作为补血草叶片转化受体较为适宜。400 mg/L特美汀能有效抑制农杆菌,而500 mg/L头孢曲松钠则不能。菌株EHA105对中华补血草的转化率达15%,远高于菌株LBA4404和GV3101。对于侵染中华补血草无菌苗叶片的重悬菌液,以OD600为0.7~1.0为宜。4 d共培养的效果较好,15.6%外植体可分化成芽。PCR检测结果表明30株卡那霉素抗性植株均为阳性,而阴性对照未扩增到条带,表明NPTⅡ外源基因已整合到受体植物基因组中。[结论]影响中华补血草转化率的关键因素是农杆菌菌株的选择。     

根癌农杆菌介导的甘蔗遗传转化体系的研究

采用根癌农杆菌介导法将苏云金氏芽孢杆菌毒蛋白B.t基因cryIA转入甘蔗胚性愈伤组织中,建立农杆菌转化甘蔗的遗传转化体系,获得13棵再生植株。经GUS及PCR检测,cryIA确实已转移到甘蔗幼苗中,GUS在再生植株中也得到瞬时表达。     

农杆菌介导的小麦遗传转化研究进展

从转化的机理、应用现状、影响因素和应用前景4个方面对农杆菌介导的小麦遗传转化方法进行了综述。