不结球白菜Pol胞质雄性不育系和其保持系的RAPD分析及分子标记的筛选

对不结球白菜Pol胞质雄性不育系(CMS)及其保持系基因组 DNA 进行 RAPD 分析,共使用了386条随机引物,其中有346条引物在两系之间都得到了扩增产物,64条引物扩增结果在两系之间表现出了遗传多态性.在其不育系中获得了1条稳定扩增的片段 OPAY1000,序列测定结果表明,OPAY序列全长为 1 053 bp,在GenBank中的登录号为DQ320101.根据序列测定结果设计了1对特异引物,将OPAY1000转化为更稳定的SCAR 标记.     

不结球白菜Pol胞质雄性不育系及其保持系的部分生理生化指标分析

对不结球白菜Pol胞质雄性不育系及其保持系的可溶性糖、可溶性蛋白质和脯氨酸含量及其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性的变化进行研究,结果表明:不育系不同时期的蕾和花中可溶性糖、可溶性蛋白质和脯氨酸含量均低于其保持系;SOD、POD和CAT活性则是不育系高于其保持系;POD同工酶电泳分析发现不育系和保持系也存在差异,这说明上述物质含量和酶活性变化可能与不结球白菜Pol胞质雄性不育有关。     

不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选

[目的]构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库,筛选与细胞色素C还原酶铁硫蛋白(BcRISP1)互作的蛋白.[方法]从不结球白菜Pol胞质雄性不育花中提取总RNA,通过长距离PCR,扩增双链cDNA(ds cDNA).采用SMART建库技术构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花全长cDNA文库.利用BcRISP1基因的开放阅读框,构建诱饵表达载体pGBK T-7-BcRISP1转化AH109酵母菌,根据酵母双杂交技术筛选出与BcRISP1互作的片段,并进行质粒共转化验证.[结果]经检测,文库的转化率为每μg pGADT7-Rec 1.80× 106转化子,文库滴度为1.21×107 CFU·mL-1,重组率为94％,成功构建可以用于酵母双杂交的cDNA文库.酵母双杂交技术获得了与BcRISP1互作的阳性克隆,试验表明诱饵载体表达产物对酵母无毒性作用,质粒共转化试验初步验证了BcRISP1与CYP81G、PIP2蛋白的互作关系.[结论]cDNA文库的成功构建为后期互作蛋白的顺利筛选奠定了基础,利用酵母双杂交技术成功获得与BcRISPl互作的蛋白CYP81G和PIP2,为明确不结球白菜Pol胞质雄性不育相关基因的信号传递通路提供更多的依据,以期从分子水平上进一步阐明不结球白菜Pol胞质雄性不育的机制.     

不结球白菜胞质雄性不育系数量性状配合力分析

以不结球白菜2个细胞质雄性不育系04277、04288为母本,5个自交系为父本,按不完全双列杂交的方法配成10个杂交组合,随机区组设计,2次重复,对F1代性状进行差异显著性测验,以及配合力和其它生物学性状分析比较。配合力分析结果表明,母本04278的一般配合力正效应最大,父本04292、04297的一般配合力较大;特殊配合力较高的04277×04297、04278×04292、04278×04314可作为优良的杂交组合。遗传力分析表明,性状叶宽、叶长、叶片数的遗传主要受加性效应控制;性状株高、叶柄宽和小区产量的遗传主要是显性效应和非等位基因的互作效应起作用。     

不结球白菜SRAP标记体系的建立与作图亲本筛选

SRAP标记是遗传作图和分子辅助育种的重要技术之一,为了建立具有通用性的不结球白菜SRAP标记体系,选用国家种质资源重点实验室的不结球白菜作为试材,利用正交设计方法对、模板DNA、引物、Taq酶和缓冲液6个因素进行了优化,获得了不结球白菜SRAP标记反应体系的最佳组合:10 μL反应体积中包含40 ng的DNA模板、75 ng引物、0.2 mmol·L-1的的、0.15 U的Taq酶和1倍体积的缓冲液.筛选不结球白菜的作图杂交亲本是构建遗传连锁图谱的基础,以12份不结球白菜亲本为试材,利用70对SRAP引物组合共扩增出了382条多态性带,平均每个引物组合扩增出5.46条,由聚类分析图确定了杂交亲本为相似系数最小的2个组合,Q06-2和Q06--4或Q06-2和Q06-6,同时验证了SRAP标记体系的通用性.     

不结球白菜雄性不育新种质不育系和保持系的同工酶差异表达分析

利用聚丙酰胺凝胶垂直板电泳技术,研究了不结球白菜雄性不育新种质不育系与保持系在营养生长期和盛花期的叶片、花蕾及花朵的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和酯酶(EST)同工酶谱带的差异.结果表明:在生长发育的不同时期不育系与保持系的POD、SOD及EST同工酶表达种类及表达活性之间均存在差异.在盛花期,不育系花蕾和花朵的POD均比保持系多1条特征带,叶片的SOD比保持系少2条特征带;EST同工酶的表达谱带无论是在叶片、花蕾还是花朵中均比保持系少.     

不结球白菜Ogu胞质雄性不育新种质及其保持系的生理生化分析

以新育成的不结球白菜(Brassica campestris L．ssp．chinensis Makino var．communis Tsen et Lee)新种质及其保持系为试材，对不育基因表达过程中叶片的色素含量及花药组织的游离氨基酸、脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量以及α、β-淀粉酶活性进行测定，结果发现不育新种质的脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量及α、β-淀粉酶活性均远远低于保持系，表明这些生化指标与小孢子发育有密切的联系，而游离氨基酸总量差异不大，可能它对小孢子发育的影响不大。新不育种质与保持系叶片色素含量差异不大，表明新种质达到了细胞质和细胞核的协调一致，从而克服了原不育材料的低温黄化现象。     

不结球白菜RAPD反应体系的优化

对影响RAPD扩增的各个因子,如TaqE,dNTP和Mg2+的浓度,模板DNA的浓度与纯度等进行研究,建立并优化了适于不结球白菜的RAPD反应体系:dNTP(0.19mmol/L)+Mg2+(1.95mmol/L)+TaqE(1U)+DNA(25ng/μL)+TM(50μmol/L)+甘油(φ=50%)+Primer(0.24μmol/L)+10×Buffer+H2O,总反应体系为25μL。     

茎芥菜胞质四倍体不结球白菜雄性不育系杂种优势利用研究

以4xMtCMS为母本,6个四倍体不结球白菜自交系为父本配制杂交组合,测定其杂种优势。结果表明:与相应父母本相比,四倍体杂交组合杂种6个F1产量均表现正的中亲和超标优势,以4xMtCMS×07P-10和4xMtCMS×07P-8的产量杂种优势最强,中亲优势、超亲优势及超标优势最大分别达18.90%、15.27%和12.61%,株高、开展度、叶片数、叶面积和单株产量等农艺性状杂种优势普遍存在;品质性状显著高于父母本,平均中亲优势均表现为正向优势,但优势率较小,平均超亲优势、超标优势杂种优势不明显。     

温度对不结球白菜波马胞质雄性不育系育性的影响

采用田间试验和人工控温处理相结合的方法，并结合花药发育的细胞形态学研究结果，对不结球白菜波里马南雄性不育系（Ｐｏｌｃｍｓ）Ａ３，Ａ１１育性与温度的关系进行了研究，结果表明：温度以育性的影响为生在花蕾发育早期，６℃左右的日均温Ａ３，Ａ１１温度敏感的临界低温，温度作用至花期育性发生变化的间间隔与花蕾发育所处时期的温度条件有关，生长适温（２０℃左右）下这一时间间隔为１２～１６ｄ而自然低温下可长达６０～７     

不结球白菜种质资源遗传多样性RAPD分析

为挖掘不结球白菜种质资源的遗传潜力以及为不结球白菜的起源和演化提供分子证据,用RAPD分子标记对国内外64份不结球白菜种质资源的DNA遗传多样性进行了分析。结果表明：23个引物共检测出147个位点,其中71个为多态性位点,多态性位点比例达48．30％,平均每个引物产生6．39个位点和3．09个多态性位点。不结球白菜各类型中以普通白菜的Nei’s基因多样性和Shannon信息指数为最高,分别为0．1269和0．1946;各生态区域中以江淮流域不结球白菜的Nei’s基因多样性和Shannon信息指数为最高,分别为0．1237和0．1888;中国不结球白菜的这2项指数高于国外材料。不结球白菜的遗传分化系数为59．05％,说明大部分变异主要存在于种群间;基因流为0．4995,说明群体间基因流动较少。     

不结球白菜波里马胞质雄性不育系花药发育的细胞形态学研究

以不结球白菜波里马胞质雄性不育系及相应保持系为试材，从显微和亚显微结构两个层次对花药发育进行对比研究。结果表明：不结球白菜Ｐｏｌ ｃｍｓ花药发育受阻于孢原细胞分化期，没有孢原细胞分化，不形成药室。不育系经低温作用后，能产生微量花粉，部分花分能形成隐原细胞，并且能经过造孢细胞，花粉母细胞，四分体，单胞花粉，二胞花粉等阶段而发育成成熟花粉。     

不结球白菜胞质雄性不育新材料90-2花器特点及分子鉴定

不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis)起源于中国,在全国各地区尤其是南方广泛栽培,是国内重要的绿叶菜之一[1].由于不结球白菜杂种优势非常明显,目前国内外主要推广的品种大多数为F1.不结球白菜杂种一代的生产过去主要采用自交不亲和,但自交不亲和系繁殖成本较高,亲本生活力易下降,制种时杂交率很难达到100%,容易出现假杂种;雄性不育系不仅亲本繁殖容易、杂种一代纯度高,而且有利于新品种的自身保护.     

茎芥菜胞质四倍体白菜雄性不育系及其保持系光合特性比较

以茎芥菜胞质四倍体白菜雄性不育系4xMtCMS及其保持系为材料,采用Li-6400型便携式全自动光合测定系统测定叶片的光合特性.结果表明,4xMtCMS和保持系叶片叶绿素含量、净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、胞间CO2浓度(Ci)、水分利用率(WUE)均有差异,但两者的日变化趋势一致.保持系的Pn、Gs、Ci、光饱和点(LSP)、光补偿点(LCP)、CO2饱和点(CSP)、CO2补偿点(CCP)均高于4xMtCMS,而表观量子效率(AQY)、羧化效率(CE)低于4xMtCMS.4xMtCMS的叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素含量和叶绿素/类胡萝卜素比值均低于其保持系,而叶绿素a/b、类胡萝卜素含量高于保持系.     

不结球白菜抗根肿病遗传规律和分子标记

[目的]探讨不结球白菜根肿病抗性的遗传规律。[方法]该研究利用引进的结球白菜与不结球白菜进行杂交,以双亲、F1、F2和BC14个世代联合群体为试材,采用苗期接种鉴定法进行抗性鉴定,并进行 ISSR分子标记筛选。[结果]不结球白菜根肿病抗性受1对显性基因控制。利用ISSR分子标记结合 BSA法获得了与不结球白菜根肿病抗性连锁的分子标记,命名为CR-873。该标记与抗性基因间的连锁遗传距离为9.72 cM。[结论]研究结果可为不结球白菜分子标记辅助育种奠定基础。     

四倍体不结球白菜Pol CMS及其保持系的农艺性状和杂种优势

对二、四倍体不结球白菜Pol CMS及保持系进行农艺性状比较及所配四倍体F1杂种优势分析。结果表明,四倍体株高、开展度、菜头粗、叶厚、叶片重、叶片宽、叶柄上宽、叶柄下宽、单株重极显著高于相应二倍体,小区产量显著高于相应二倍体;四倍体杂交组合主要农艺性状中亲、超亲、超标优势明显。     

茎芥菜胞质四倍体白菜雄性不育系及保持系生理生化特性研究

对茎芥菜胞质四倍体不结球白菜雄性不育系4x MtCMS及其保持系不同发育阶段的花蕾、花和薹叶生理生化特性进行研究。结果表明:4x MtCMS花及花蕾中可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量均显著低于相应保持系;而丙二醛(MDA)含量高于保持系,为保持系的1.72倍;花蕾中SOD活性4x MtCMS高于保持系;除大花蕾中4x MtCMS CAT活性显著低于保持系外,其它花蕾中POD、CAT活性均是4x MtCMS高于相应保持系;4x MtCMS薹叶中可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量与保持系无显著差异,MDA含量、POD、SOD、CAT活性4x MtCMS均低于保持系;POD、SOD、EST同工酶电泳结果显示4x MtCMS与保持系间存在8条差异带,保持系同工酶酶谱条带比4x MtCMS丰富。     

不结球白菜新型雄性不育系HGMS应用潜势分析

花器官发育B组基因缺失导致花瓣萼片化、雄蕊心皮化的同源异型突变,由此引起的雄性不育性稳定、彻底,是一种极为理想的雄性不育类型。不结球白菜新型雄性不育系HGMS(Homeotic Genic Male Ster-ile line)就是利用雄蕊心皮化突变性状选育的新型细胞核雄性不育系。本文以HGMS系内可育株和不育株分别与4个优良自交系配制组合,研究了雄蕊心皮化性状对F1代杂种产量以及农艺性状的负效应;以包括HGMS在内的5个不育系与4个优良自交系配制5×4不完全双列杂交组合,用GGE双标图分析法对各不育系产量和农艺性状进行综合评价。结果表明,HGMS雄蕊心皮化性状并未引起F1代杂种产量和农艺性状的显著负效应;HGMS不育系在产量性状上具有较高的一般配合力(GCA)和特殊配合力(SCA),是一个优良的雄性不育系,可用于强优势组合的选配。另外,HGMS较好的亲本区分能力和代表性,表明它还是很好的测试亲本。