鸡ND—EDS—76二联油乳剂灭活苗的研究及免疫效力、保存期观察

应用NDLasotaE株和EDS－76H912株，接种鸡胚和鸭胚，当血凝价上升到大于等于1：1280和1：10000时收获，收适当的灭活剂灭活后，按一定比较加吐温85、可苯85，硬脂酸铝和白油，制成ND－EDS－76二联灭活油苗，经免疫观察证明，该苗有良好的免疫力，两种病毒之间无干扰作用，被接种鸡无任何不良反应。该苗置4℃冰箱可保存12个月，15－30℃室温可保存6个月不破乳，不分层，颜色无改变，用该苗接种5000只父母代种鸡的追踪观察，接种后15天两种抗体呈明显的动态上升，25天可达到比较稳定的高峰水平，接种后10个月，ND和EDS－76抗体效价仍分别保持在6．5Log2和5．6tog2水平上，，对18－20周龄产蛋母鸡，肌肉或皮下注射0．5ml/只，应用30万忌份的联苗证明，疫苗安全，效力确实，抗体维持时间长，保存期长，使用方便，效益显著。     

不同条件对ND、EDS—76病毒血凝性影响的观察

分别观察了不同稀释液、不同感作温度、不同红细胞浓度及不同感作时间对ND、EDS－76病毒HA效价、血凝特性及血凝解脱现象的影响。结果表明，在进行HA试验时，以PH7．2的PBS液为稀释液、0．5％鸡红细胞为指示系统、在37℃下感作20min或室温下感作30min为最适试验条件。各样品在0．5％红细胞下测得的HA效价比0．8％红细胞时平均高0．25－0．5个滴度，其它情况下测得的HA效价基本相同，但红细胞的凝集状态及观察结果的时间有所不同。其中，感作温度越高（37℃），出现结果越早，且凝集现象越明显，但解脱作用发生得也越快。ND病毒所引起的血凝现象仅可持续2h左右，而EDS－76病毒引起的血凝现象可持续至24h不发生解脱，这一特性可作为鉴别2种病毒的1个指标。     

鸡ND—EDS—76二联油乳剂灭活苗的研究及免疫效力、保存期观察

应用NDLasotaE株和EDS—76H912株，接种鸡胚和鸭胚，当血凝价上升到＞1：1280和1：10000时收获，经适当的灭活剂灭活后，按一定比例加吐温85、可苯85、硬脂酸铝和白油，制成ND—EDS—76二联灭活油苗。经免疫观察证明，该苗有良好的免疫力，两种病毒之间无干扰作用，被接种鸡无任何不良反应。该苗置4℃冰箱可保存12个月，15—30℃室温可保存6个月不破乳、不分层，颜色无改变。用该苗接种5000只父母代种鸡的追踪观察，接种后15天两种抗体呈明显的动态上升，25天可达到比较稳定的高峰水平，接种后10个月，ND和EDS—76抗体效价仍分别保持在6．5Log2和5．6tog2水平上。对18—20周龄产蛋母鸡，肌肉或皮下注射0．5ml／只，应用30万羽份的联苗证明，疫苗安全、效力确实，抗体维持时间长，保存期长，使用方便，效益显著。     

EDS76—ND二联油乳剂苗的研究

本试验以减蛋综合症(EDS76)病毒株,新城疫(ND)Laosota 株为制苗毒株,分别经鸭胚和鸡胚增殖后,甲醛灭活.灭活毒液按适当比例混合加入油佐剂中,乳化制成“二联苗”.对所研制的二联苗的安全性、保存期、免疫效力等进行测试.结果表明:1.疫苗本身安全,对鸡无副作用;乳化度、稳定性和通针性良好;易于保存,常温避光6个月以上,4℃左右12个月,免疫效力无明显下降(P>0.05).2.疫苗免疫效果良好.ND于注苗后7天即产生免疫(HI抗体效价GMT log2为 7.5);EDS76免疫产生较慢,15天可产生较强免疫(HI价为7.3log2);两种HI抗体均于免疫后21天达到高峰值(ND为10.7long2.EDS76为10.2log2);免疫期可持续一年左右,即免疫活360天时,ND、EDS76两种HI抗体分别为7.1log2和6.2log2.区域试验免疫蛋鸡100多万只,临床调查可抽检证明该苗质量稳定,效果良好.     

ND-EDS-76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可有效地预防 ND和 EDS- 76的发生。     

减蛋综合症病毒（EDS76V）VSH—23株灭活试验研究

对EDS76病毒HSH－23株进行了灭活试验研究，采用最终浓度为0．1％福尔马林在不同时间及温度条件下灭活HSH－23株病毒液，将灭活病毒液接种鸭胚以检查其灭活效果。结果表明：在37℃条件下，经过10h可将病毒完全灭活；该毒株具有较强的热稳定性，在37℃下，放置35天其HA价保持不变，灭活检验中发现，必须将灭活病毒液进行连续2次鸭胚接种。方可作出病毒是否完全灭活的判定。     

对鸡、驼鸟新城疫毒株毒力与血凝素的测定

两株新城疫（ND）病毒分别分离自发病鸡群与鸵鸟群，本实验室对两株病毒的最小致死量致死鸡胚的平均死亡时间（MDT）、3日龄雏鸡脑内接种指数、6周龄鸡静脉接指数（IVPI）、血凝解脱速率和血凝素热稳定性进行了测定。结果表明，源于发病鸡群的分离物是一株中发型的ND病毒，属快速解脱型，血凝素对热的抵抗力较强；而源于鸵鸟的分离物是一株缓发型的ND病毒，属慢速解脱型，血凝素对热的抵抗力较差。本文还对新城疫病毒的毒力与血凝解脱速率和血凝素热稳定性的关系进行了讨论。     

怎样使用鸡疫苗

肉鸡饲养期短,一般只需接种鸡马立克氏病(MD)疫苗、鸡新城疫(ND)疫苗、传染性法氏囊病(IBD)疫苗和传染性支气管炎(IB)疫苗。蛋鸡除接种上述疫苗外,还需接种减蛋综合症(EDS—76)疫苗、鸡痘苗和禽霍乱菌苗。种鸡开产前使用ND、IBD和禽脑脊髓炎(AE)等油佐剂灭活苗,可使其子代获得高水平的母源抗体。     

减蛋综合征病毒HSH23株与AV127株免疫效力比较研究

[目的]比较本室分离EDS75VHSH23毒株与AV127参考毒株的免疫效力。[方法]采用本室制备的ND—IB—EDS（HSH23株）三联灭活疫苗和市售ND—IB—EDS（AV127株）三联灭活疫苗,分别免疫海兰褐商品蛋鸡,免后采血测定EDSHI抗体,并于免后7周用AV127株强毒攻击。[结果]免后4、7周,本室三联苗EDSHI抗体分别为8．9、8．05log2,而市售三联苗分别为7．6、5．95log2,对照鸡抗体为阴性。攻毒后,疫苗免疫鸡产蛋率始终保持90％以上,而对照组鸡产蛋率急剧下降到40％左右,蛋质量变差;攻毒后第26天对照组试验鸡产蛋开始有所恢复,产蛋率达60％,攻毒后第32～42天产蛋率约75％,仍未恢复到正常水平。统计3组试验鸡攻毒后6周内平均每只鸡的产蛋个数,本室三联苗组、市售三联苗组及对照组分别为39．48、38．41和26．60枚,每只免疫组鸡比对照组多产鸡蛋12枚。[结论]EDS76VHSH23株、AV127株均具有良好的免疫原性。     

鸡新城疫和减蛋综合症异源二联油乳剂灭活疫苗的研制

将鸭源鸡新城疫（ＮＤ）病毒Ｄ１０株和鸡减蛋综合症（ＥＤＳ－７６）病毒ＧＣ２株同时接种于同一鸭胚内复制，增殖 ９６ ｈ收取尿囊液，用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ＮＤ和 ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗。简化了生产工艺、降低了制苗成本。经试用表明，该疫苗可有效地预防ＮＤ和ＥＤＳ－７６的发生。     

猪繁殖—呼吸综合征病毒上海分离株的病毒特性研究

对猪繁殖－呼吸综合征病毒（PRRSV）上海分离株（SH1）的理化特性和结构蛋白进行研究。结果表明，SH1分离株能致Marc-145细胞典型病变，TCID50为10^5.0mL^-1。对氯仿和乙醚、酸（pH5．5以下）、碱（pH8以上）、热（水浴56℃10min以上、37℃24h以上、28℃48h以上）均敏感。病毒负染可见以具囊膜的球形为主，囊膜上有纤突，大小为60－85nm。超薄切片可见病毒存在于细胞浆中。SH1分离株的病毒培养液经差速离心和非线性蔗糖密度梯度纯化，SDS－PAGE显示病毒结构蛋白的相对分子质量24000，19500，16000。免疫转印可见3条结构蛋白均能被PRRSV美洲株高免血清识别。     

包头市鸡三种流行病学调查

为了彻底摸清包头地区鸡新城疫（ND）、鸡产蛋下降综合症（EDS’76）和鸡大肠杆菌种传染病的流行状况．对包头市十几个地区、不同日龄的近十万只鸡进行了上述3种病的流行病学调查。鸡新城疫和产蛋下降综合症血凝抑制试验（HI）结果表明，鸡新城疫和产蛋下降综合症的免疫效果良好。但部分鸡场有产蛋下降综合症强毒株感染。本实验还通过对包头地区的病鸡和死鸡进行了大肠杆菌的分离和血清群鉴定，对4株大肠杆菌分离株进行生化试验、药敏试验和动物试验，结果表明，分离菌致病力较强，并且对多种抗生素存在有抗药性。     

鸡新城疫二价油乳剂灭活苗的研制及免疫效果

用NDLasota弱毒株、NDV地方分离株（F基因Ⅶ型）-HD1，分别接种鸡胚，收集尿囊液，制备病毒抗原液，福尔马林灭活后按一定比例混合，与白油佐剂乳化成油包水型乳剂疫苗，并对二价苗各项指标进行了测定，证明本疫苗安全、无副作用，接种后3周产生免疫保护，攻毒保护率为100%，接种2周后通过免疫抗体检测，NDHI抗体效价达8log2，疫苗在鸡场应用，获得了满意效果，有效的控制了ND的发生与流行。     

马传染性贫血病病毒L株前病毒全基因组核苷酸序列分析

 本实验所用的马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）Ｌ株（ＥＩＡＶ－Ｌ）是我国研制成功的ＥＩＡＶ弱毒疫苗的原始强毒株。以ＥＩＡＶ－Ｌ感染马外周血液白细胞中ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术，分４个片段扩增ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒ＤＮＡ，并分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ中，得到 ４个重组质粒ｐ２．８、ｐ２．４、ｐ３．１和 ｐ１．２，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到 ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全序列。ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全长 ８２３５ｂｐ，其中 Ｇ＋Ｃ含量为 ３８％。通过使用计算机软件ＤＮＡＳＩＳ分析，ＥＩＡＶ－Ｌ与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为９８．４％和９６．９％。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系，另外 ＥＩＡＶ－Ｌ与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性，这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为３１６ｂｐ的ＬＴＲ，其中Ｕ３为１９７ｂｐ，Ｒ为８０ＢＰ，Ｕ５为３９ｂｐ。前病毒基因组有 ３个较大的开放阅读框架（ＯＲＦ），分别编码 ｇａｇ、ｐｏｌ和 ｅｎｖ基因。ｇａｇ基因位于 ７１３～１９１２位碱基之间，全长１２００ｂｐ；ｐｏｌ基因位于 １７０８～５１０９位碱基之间，全长     

真空冷冻干燥对病毒含量的影响

分别检测一定批次的鸡传染性支气管炎（IB）、鸡新城疫（ND）和鸡痘（POX）病毒抗原在真空冷冻干燥前后的病毒含量，发现这三种病毒在经过冻干后病毒含量都有一定程度的下降，其中POX病毒下降幅度最大，ND病毒下降幅度最小。     

番鸭细小病毒弱毒疫苗的研究

应用生物技术从番鸭细小病毒菁田株（ＭｕｓｏｖｙＤｕｌｋｉｌｉｎｇＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ，ＭＰＶ－Ｐ）选育出对１日龄雏番鸭无致病力的弱毒疫苗株（ＭＰＶ－Ｐ１）。该弱毒株具有良好的兔原性和遗传稳定性；制备成疫苗，免疫注射１日龄雏番鸭，免疫后３ｄ部分鸭血清中出现抗体，７ｄ９８％以上的鸭血清中出现抗体；２１－３０ｄ抗体效价达高峰，有效免疫期在１９０ｄ以上；注苗后７ｄ攻毒，保护率１００％；当ＬＰＡＩ滴度在ｌｏ     

雏鸡新城疫疫苗三种不同免疫程序的免疫效力

新城疫（ND）油乳剂灭活苗与LaSota株弱毒疫苗,采用三种不同方法对试验雏鸡进行免疫,依据HI抗体滴度的检测和攻毒试验,比较了雏鸡三种不同免疫程序的免疫效力,结果表明,3种程序免疫的雏鸡60日龄时对强毒攻击均得到完全保护,对母源抗体HI滴度5．2（log2HI值）的雏鸡,2日龄用ND油乳剂灭活苗和LaSota疫苗免疫优于2日龄用ND油乳剂灭活苗免疫或10日和20日龄用LaSota疫苗二次免疫。     

基因探针技术检测血清1型马立克氏病病毒的研究

选用马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中ＬＤＮＡ片段，制成ＤＩＧ－标记的ＭＤＶ核酸探针，分别对Ｉ型ＭＤＶ强毒株（ＢＪ－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５ｃ株）感染材料的核酸进行ｄｏｔ ｂｌｏｔ杂交检测，结果显示均有阳性呈色反应；而对ＭＤＶ血清２型（ＳＢ－１株）、３型（Ｆｃ１２６株）及禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）和淋巴细胞性白血病病毒（ＬＬＶ）感染细胞的核酸，作上述同样检测，则均未见     

鸡新城疫抗原抗体复合物疫苗的研究

用中等毒力新城疫（ND）-Roakin株病毒作为抗原,与ND抗体配制不同比例的复合物,并在37℃感作不同的时间,分别配制复合物疫苗1和复合物疫苗2,用无特定病原菌（SPF）鸡进行免疫对比试验。试验鸡随机分为4组,饲养在隔离器中,除对照组外,试验1、2、3组分别在20日龄接种复合物疫苗1,复合物疫苗2和常规Roakin活疫苗。各组从免疫后第1周起至第7周,每周采血,用HI试验检测血清中ND抗体水平,70日龄时用北京株ND强毒进行攻毒试验,第1、2组在接种疫苗后,有个别鸡出现轻微喘气或羽毛蓬松的症状,2-3d后好转;第3组接种疫苗后,鸡群100%发病,呈典型ND症状,约1周后康复,无鸡只死亡;对照组的鸡群一直保持健康状态。第1、2、3组的抗体水平分别在免疫后的2、3、2周达到高峰,HI效价分别为1：2^9,1:2^8.5和1：2^10,在第7周分别下降为1：2^6.07,1:2^6.07和1：2^7,而对照组的HI效价一直在1：2^2左右。攻毒后,对照组死亡率为100%,第1、2、3组分别为13.3%,6.7%和6.7%。试验结果提示：用中等毒力的NDV和ND抗体配制成抗原抗体复合物疫苗,可以大大减轻疫苗的毒副作用。在保持疫苗良好免疫原性的同时,提高了疫苗的安全性。     

表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建

 【目的】重组新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒（very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV）及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21 d分别以vvIBDV Gx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV－VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120 h,脑内致病指数（ICPI）分别为0.4和0.36,静脉内致病指数（IVPI）均为0;接种后72～96 h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0 EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100％保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90％以上。 【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病－新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。