旋毛虫单克隆抗休特性鉴定

将两株将抗旋毛虫单克隆抗体杂交瘤细胞所分泌的ＭｃＡｂ,经纯化后电泳分析,其重链分子质量为５５ｋｕ,轻链分子质量为２９ｋｕ,符合ＩｇＧ抗体的特点。两株ＭｃＡｂ与旋毛虫阳性血清所针对的旋毛虫抗原决定簇相同,都不与猪的其它寄生虫发生交叉反应,与抗原的相对亲和力Ｅ２〉Ｄ４,ＭｃＡｂ亲和层析纯化抗原的分子质量为４９ｋｕ,经免疫斑点染色证明为糖蛋白。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

分泌抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为制备犬细小病毒(CPV)单克隆抗体,用F81细胞繁殖CPV,病毒液经二乙烯亚胺(BEI)灭活、纯化后免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经筛选获得2株分泌抗CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为F1和B6.F1和B6分泌的单克隆抗体Ig亚类均为IgG1;以F1和B6制备的腹水,经检测,间接ELISA效价均为1×105,免疫荧光效价分别为1:3200和1∶6400;F1和B6培养上清的抗体中和效价分别为1∶1024和1∶2048,血凝抑制效价分别为1∶2048和1∶4096;免疫印迹(Western-blotting)和抗原表位分析结果显示,F1和B6分泌的单克隆抗体可能分别针对CPV的空间表位和线性表位.2株分泌抗CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立可进一步用于开发CPV特异性诊断制剂和治疗制剂.     

分泌抗猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将猪细小病毒（ＰＰＶ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞在聚乙二醇作用下融合，用血凝抑制试验（ＨＩ）筛选，以有限稀释法克隆３次，得到５株分泌抗ＰＰＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ），选择抗体分泌较高的４Ｆ４、Ａ４或Ｅ８进行较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９３和８７，抗体属性为ＩｇＧ１，其中１株为Ｋ轻链，用交叉ＨＩ法对２株ＭｃＡｂ作特异性分析，该ＭｃＡｂ只特异地与ＰＰＶ发生反应，而不与日本乙     

分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

通过3次sp2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞间的融合试验,筛选出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中2G_6细胞株作了进一步的检定分析,用2G_6上清液对T.e抗原进行ELISA试验,显示出高度的特异性,与血吸虫、弓形虫均未出现交叉反应。效价为1∶5.1×10~3,诱生腹水抗体的效价为1∶1.6×10~7,免疫球蛋白类型属IgG_1亚美。该细胞株在外培养下,稳定地分泌特异性抗体已达6个月之久,在液氮冻存近8个日之后仍深持分泌抗体的能力。     

抗旋毛虫循环抗原单克隆抗体的制备及初步应用

为评价单克隆抗体用于检测旋毛虫循环抗原（ＣＡ）的应用价值，作者利用淋巴细胞杂交瘤技术制备了４个抗旋毛虫ＣＡ的杂交瘤细胞系，建立了以单克隆抗体双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＣＡ的方法，并初步应用于动物血清中ＣＡ的检测。应用该法检测旋毛虫病猪血清的阳性率为７２．１％（３１／４３）。６０头健康猪、３０头感染猪囊虫和３０头感染弓形虫的猪均为阴性。对流行地区河南邓县３４头和湖北囊樊１３４头屠宰猪进行流行病学调查，     

旋毛虫53kuES重组蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制

为建立一种简易、快速检测动物血清中的旋毛虫排泄分泌(Excretory-secretory,ES)抗原的胶体金免疫层析试纸法,本研究选用旋毛虫53 ku ES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(MAb).利用辛酸-饱和硫酸铵法和亲和层析柱联合法纯化MAb及兔抗旋毛虫53 ku ES多克隆抗体,利用枸橼酸三钠还原法制备的胶体金颗粒标记MAb,制备免疫金标试纸条.结果表明,获得的2株IgG1型杂交瘤细胞系4D10和5A2能够稳定分泌抗体,且效价高;胶体金标记MAb 4D10所制备的试纸条具有重复性好、灵敏性和特异性高的优点;该试纸条4℃条件下可密封保存6个月以上.     

分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

按katendel氏法用伊氏锥虫JG株制备全虫抗原,以其免疫BALB/C小鼠。以50％PEG(MW4000,pH8.0)作融合剂。使免疫鼠脾细胞与S P2/0 Ag14(简称S P2/0)骨髓瘤细胞融合。经系统筛选和克隆化,建立了9个分泌抗伊氏锥虫抗体的杂交瘤细胞株。他们分泌的McAb,4株为IgG1、1株为IgG3、另4株为IgM。9株McAb在琼脂免疫双扩散试验中均不形成沉淀线。用ELISA检测,这些细胞系培养上清和腹水与同源伊氏锥虫虫株抗原的滴度分别为1:64-1:1024和1:6.4×103-1:6.4×105;与泰氏锥虫和弓形虫抗原则全为阴性。用2个异源伊氏傩虫虫株抗原检测时,8株无任何交叉反应,8株与2个异源株均有交叉反应,另3株则只与1个异源株有交叉反应。用增值反应检查了5株IgG类McAb识别抗原决定簇的特异性,除2株共同识别一种抗原决定簇外,另8株各自识别不同的抗原决定簇。     

阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立

试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D_{450 nm}值及P/N值选择1：20000稀释的5C10作为包被抗体,1：40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。     

马立克氏病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

以马立克氏病毒814株(MDV-814)作为免疫用抗原,建立了2个MDV特异性单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株—4A6、3D7。鉴定结果表明;两株细胞所分泌的McAb均为IgM类免疫球蛋白,具有MDVⅠ型病毒特异性,无中和反应特性和沉淀反应特性。利用两种McAb对国内标准强毒MDV-京1株进行鉴定,肯定其为MDV-Ⅰ型毒株。     

马绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

本研究采用马绒毛膜促性腺激素(equine chorionic gonadotropin,eCG)纯品免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按1∶10融合,间接酶联免疫吸附法(ELISA)筛选阳性克隆和有限稀释法克隆,扩大培养后于小鼠腹腔制备腹水,共得到8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用间接ELISA测定抗体效价,效价均达10^-5以上。用获得的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体,为eCG分泌水平的ELISA检测方法的建立确立了条件。     

树突状细胞甘露糖受体在旋毛虫感染中的变化研究

应用流式细胞术(FCM)检测旋毛虫感染后小鼠肠系膜淋巴结(MLN)中树突状细胞(DC)上甘露糖受体(MR)的影响。培养小鼠骨髓源树突状细胞(BMDC)并负载旋毛虫排泄/分泌抗原(ES抗原),FCM检测BMDC上MR的变化情况。结果显示,感染第7天MLN中DC表面MR出现下调,但在14 d后出现上调,差异显著(P0.05)。体外实验发现,BMDC负载ES抗原后MR出现下调,直到第48小时出现上调,差异显著(P0.05)。本研究证明旋毛虫感染后可以引起树突状细胞上MR的变化,表明MR可能是ES抗原的识别受体。这为研制旋毛虫树突状细胞疫苗提供了支持,并对寄生虫免疫逃避机制的研究提供了思路。     

Preparation and Identification of Monoclonal Antibody Against Swainsonine

In this test,BALB/c mice were immunized by SW-OVA for the preparation of monoclonal antibody against swainsonine (SW). Hybridoma cells that could secrete specific antibody against SW were prepared by hybridoma technique,and then the strain that secreted monoclonal antibody against SW designated 1F10 was prepared,and the chromosome average number of 1F10 cell was 45 to 50 couples. The ELISA titers of cell supernatant were 1:25 600, and that of ascites were 1:80 000.The subclasses of monoclonal antibody was IgG1,and the affinity constant was 1.14×10¹⁰,the purity of ascites antibodies was up to 98%,and the recovery rate was 80%.The result of sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis proved that purified antibody had been obtained that the molecular weight of H-chain and L-chain of antibody was about 50 and 25 ku. The monoclonal antibody against SW specifically bound to SW determined by Western blotting. The linear range was 4 to 128 μg/mL (R²=0.9969) and no cross-reactivity was detected with BSA,gelatin,polylysine,me-Gal,etc. The result laid the foundation for immunodetection on SW and immunological prevention of animal toxic disease.     

苦马豆素单克隆抗体的制备与鉴定

本试验采用苦马豆素（swainsonine,SW）人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1：25 600,诱生腹水效价为1：80 000。单克隆抗体的亚型为IgG1,亲和力解离常数为1.14×10¹⁰,腹水抗体纯化后纯度可达98%,回收率80%,SDS-PAGE凝胶电泳可见单克隆抗体的轻链、重链分子质量分别为25和50 ku,Western blotting检测抗体能特异性的识别SW。其线性检测范围为4~128 μg/mL（R²=0.9969）,与BSA、明胶、多聚赖氨酸、α-甘露糖苷等无交叉反应。本试验制备的SW单克隆抗体为免疫学检测SW和免疫学防制家畜疯草中毒奠定基础。     

分泌抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

利用超速离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合,经筛选及克隆,成功地建立了６株可分泌抗ＩＢＶＤ４１株的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞：Ｂ５、Ｂ８、Ｃ７、Ｄ８、Ｄ９、Ｇ１１。其中Ｂ８、Ｃ７、Ｇ１１的稳定性最好,腹水ＭｃＡｂ效价高达１０１０,无血清培养上清ＭｃＡｂ（浓缩３０倍）效价达４×１０４以上。６株杂交瘤细胞的特异性均很好。