林可霉素胶体金快速检测试纸条的研制

本文利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中林可霉素的试纸条,经过测试,该试纸条的检测限为20μg/L,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0,该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制

本试验旨在研制同时检测克伦特罗(CL)和莱克多巴胺(RAC)的多残留胶体金免疫层析试纸条(Multistrip).用细胞融合技术筛选CL和RAC杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,金标抗体竞争性膜层析技术研制Multistrip.该试纸条由样品垫、偶联垫、双检测线和质控线标记的NC膜、吸收垫等几部分构成,其中偶联垫上灌注有CL和RAC两种金标单克隆抗体,双检测线由检测抗原CL-OVA和RAC-BSA喷膜构成,间距2 mm.结果表明:多残留试纸条的CL和RAC目测检测限分别为1和2 ng·mL-1,检测时间5～8 min.基质呈阳性的真实样品用单残留试纸条、ELISA和GC-MS检测,结果一致,无假阳性或假阴性案例.该试纸条具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于现场检测和筛选.     

检测4种有机磷农药胶体金免疫层析试纸条的研制

本文通过制备有机磷农药半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中有机磷农药的胶体金免疫层析试纸条,辛硫磷、对硫磷、丙溴磷、氯唑磷等有机磷农药的检测限均为200μg/kg,检测时间仅为15min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求,试纸条能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。     

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测。以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带。经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作。     

黄曲霉毒素M1胶体金快速检测试纸条的研制

本文利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中的黄曲霉毒素M1试纸条,经过测试,该试纸条的检测限为0.5ng/mL,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0,该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测.     

链霉素胶体金快速检测试纸条的研制

本研究建立了一种基于免疫胶体金技术的链霉素快速检测方法。该方法检测灵敏度10ng·ml-(101ppb),蜂蜜样本检出限是40ng·ml-(40ppb),单个样本检测时间为5～10min。所研制试纸条产品检测变异系数小,批1间、批内检测结果重复性良好,可以应用于蜂蜜样本中链霉素的快速检测和现场筛查,具有较高的市场应用前景。     

牛副结核胶体金免疫层析试纸条的研制

将提纯的牛副结核分支杆菌重组蛋白MAP0862-2154c作为硝酸纤维素膜检测线的包被抗原,兔抗羊IgG作为硝酸纤维素膜质控线的包被抗体,金标羊抗牛IgG点喷到玻璃纤维素膜上,制成用于检测牛副结核抗体胶体金免疫层析试纸条。用牛的副结核标准阳性血清与检测试纸条反应,在检测线处出现红色反应带,而滴加阴性血清的试纸条检测线处未出现反应条带,上述2种血清在质控线处均出现红色反应条带;试纸条可检出牛副结核抗体的最低抗原包被浓度为400μg/mL;试纸条不与牛结核病、牛布鲁氏菌病的阳性血清发生反应;试纸条37℃保存9d后的检验结果与4℃保存的检验结果相同。所制备的试纸条具有灵敏、特异的优点,稳定性良好;10min左右即出结果,操作简便,可用于临床诊断。     

牛奶中庆大霉素胶体金试纸条检测方法的研究

采用胶体金免疫层析法检测牛奶中庆大霉素残留。制备得到了庆大霉素半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫原和包被原,用免疫原制备特异性单克隆抗体,建立了一种简单、快速和高通量的检测牛奶中庆大霉素残留量的胶体金免疫层析法。试纸条对牛奶样品的检测限为20μg/L,假阳性率为0,假阴性率为0,重复性较好,牛奶样品可直接检测,检测时间只需5min,适合在基层抽检、乳品企业质控、原料奶站现场大量筛查使用。     

检测莱克多巴胺胶体金免疫层析试验的建立

采用混合酸酐法制备莱克多巴胺-OVA偶联抗原,胶体金标记莱克多巴胺单克隆抗体,建立了检测莱克多巴胺的胶体金免疫层析试验。该试验具有较好的敏感性和特异性,最低可检测10ng/mL的莱克多巴胺,而与克伦特罗和沙丁醇胺无交叉反应。胶体金免疫层析试验对尿液和饲料样品中莱克多巴胺的最低检测量分别为10ng/mL和0.01mg/kg。     

鹿布鲁菌病免疫胶体金检测试纸条的研制

利用SUMO-BCSP31重组大肠杆菌表达并纯化了布鲁菌BCSP31重组蛋白,并利用该蛋白研制了布鲁菌免疫胶体金检测试纸条。以BCSP31蛋白作为检测抗原,通过间接法研制胶体金试纸条检测鹿血清抗体。该试纸条与大肠杆菌、沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌和绿脓杆菌无交叉反应;检测阳性血清最大稀释倍数为1∶640,证明试纸条具有良好的特异性和敏感性。临床上对420只鹿进行检测,比对试纸条与虎红平板凝集试验(RBT)检测结果:阳性符合率为100%,阴性符合率为96%,Kappa值为0.73,两种方法符合率较高;比对试纸条与cELISA检测结果:阳性符合率为81%,阴性符合率为100%,Kappa值为0.88,两种方法符合率高。该试纸条简便快捷,具有较高准确性,可用于鹿布鲁菌病的现场初筛检测。     

检测犬瘟热病毒的单克隆抗体胶体金试纸条的制备

将从水貂中分离的犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）HB株经培养和纯化后免疫小鼠,制备分泌抗CDV-HB的杂交瘤细胞株,分别命名为2E1和7F3,ELISA测定腹水效价均大于107。亚类鉴定结果表明单抗2E1的分子亚类为IgM,7F3的分子亚类为IgG1,间接免疫荧光试验表明,这两株单抗均可以与CDV-HB特异性结合。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒并标记2E1单克隆抗体,获得检测貂犬瘟热病毒抗原的胶体金免疫层析试纸,且鉴定证明制备的检测CDV的胶体金试纸条具有良好的的特异性。     

银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究

本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。     

胶体金免疫层析条诊断家畜日本血吸虫病的现场应用

为评估快速胶体金免疫层析条(colloidal gold imunochromatography assay,GICA)诊断现场家畜日本血吸虫病的价值,以GICA法对来自湖南血吸虫病流行区和非流行区的山羊、水牛、黄牛血清进行栓测,并和间接血凝法(indirect haemagglutination test,IHA)及粪便孵化法的诊断结果进行比较.结果显示,GICA对流行区284只山羊、172头水牛和145头黄牛血清检测,阳性率分别为10.21%、8.14%、8.28%;对非流行区的30只山羊、25头水牛、17头黄牛检测,假阳性率分别为10%、12%和11.76%.GICA和IHA的诊断结果相比,阳性符合率分别为93.8%、100%、100%,阴性符合率分别为99.7%、98.9%、98.7%;GICA与粪便孵化法的诊断结果相比,阳性符合率均为100%,阴性符合率分别为94.6%、96.9%、94.3%.可见,GICA法快速、简便,可以代替现行的IHA和粪便孵化检查法,用于疫区家畜血吸虫痛的筛查.     

动物性食品兽药残留的快速筛选方法

在人类消费的可食性动物组织或产品中出现兽药和其代谢物残留可能将对消费者造成不同程度的毒害,这迫切要求开发具有快速、简易、敏感性好等特征的检测方法。本文对动物性食品中兽药和其代谢物残留的微生物学、免疫学、生物感应器、色谱学等快速筛选方法的检测原理、现状及研究进展作一综述。     

胶体染料试纸条法快速诊断家畜血吸虫病的研究

为了适应现场家畜血吸虫病的筛查需要,设计了简便快速的胶体染料试纸条诊断技术用于检测家畜血清中的抗血吸虫抗体,以该方法检测血吸虫病牛、猪血清83份,其结果为阳性检出率100%,健康牛、猪血清73份的检测结果为阴性符合率分别为95.3%和94.0%,与感染肝片形吸虫的牛、羊血清16份的交叉反应率为18.8%.表明本方法敏感性高,特异性较强.     

快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价

为建立一种能快速鉴定炭疽杆菌的检测技术,本研究根据炭疽杆菌染色体上的TJHP和BA5345 2个靶点,分别设计4对引物和2个探针,对10份已知浓度的炭疽杆菌DNA和阴性对照菌株DNA进行检测,将浓度最大的炭疽杆菌DNA进行10倍倍比稀释,用于检测4对引物及其探针的灵敏度,并选出2个针对TJHP和BA5345靶点的特异性强及灵敏度高的引物和探针进行重复性实验。结果显示,4对引物及其探针特异性较强,FP2/RP2和FP4/RP4 2对引物的灵敏度为4.513×10^-5 ng/μL;该荧光定量PCR方法重复性好(t=1.178,P=0.332)。FP2/RP2和FP4/RP4 2对引物及其探针可用于炭疽杆菌感染初期的快速筛查以及临床辅助诊断。     

仙台病毒核酸快速检测方法的建立和应用

仙台病毒(Sendai virus,SeV)是一种常见的可引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,感染迅速,并且隐性感染率高,一旦感染较难从鼠群中清除,从而影响动物健康。为满足对入境噬齿类实验动物和野生动物仙台病毒快速检测的需要,本研究针对SeV编码基质蛋白和融合糖蛋白基因的保守序列设计引物和荧光探针,建立了仙台病毒RT-PCR和Real-time RT-PCR检测方法。将建立的方法应用于仙台病毒感染鼠不同临床样品和组织培养物的检测,证实两种核酸检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适合应用于出入境口岸实验和野生噬齿类动物仙台病毒疫情的快速检测。     

犬细小病毒实时荧光RPA检测方法的建立

由犬细小病毒(CPV)引起的犬细小病毒病是我国出入境口岸宠物检疫的重要疫病。为了提高检疫效率,本研究拟建立检测CPV的实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)方法并进行评价。本研究根据CPV衣壳蛋白基因序列设计RPA引物,以GB/T 27533-2011中的PCR方法作为参照,通过检测其他4种犬病毒和3种其他种属的细小病毒来分析实时荧光RPA的特异性、检测不同浓度的模板分析实时荧光RPA的灵敏度、检测CPV阳性或阴性犬的不同组织、血液、尿、粪便等样本以及7株CPV野毒株来分析实时荧光RPA的稳定性。结果显示,本研究建立的实时荧光RPA特异性好、灵敏度高,检测临床组织、体液、粪便样本以及野毒株时都具有良好的稳定性。结果表明,本研究建立的实时荧光RPA可满足CPV快速检测要求。     

间接ELISA对鸡猪空肠弯曲菌快速检验的实验研究

以方阵滴定法确定了空肠弯曲菌抗血清、酶结合物的最佳工作浓度和孵育时间,从而立了快速检测空肠弯曲菌的间接ELISA。该试验可检出含8～10个空肠弯曲菌经24h培养的标本(含30万个菌/ml的肉汤培养物);不与沙门氏菌等15种对照菌及其混合液发生交叉反应。以鸡源和猪源空肠弯曲菌抗血清分别作为ELISA的第一抗体,对144份鸡泄殖腔粪便标本和116份猪直肠粪便标本的选择性增菌肉汤培养物进行了检测。其阳性率分别为83.3％和79.3％,可于28h内报告结果;常规法对上述标本的阳性检出率分别为85.4％和81％,但程序繁琐,需5～7d方能获得最终检查结果。两种方法对鸡、猪粪便标本检测结果的阳性符合率,分别为97.5％与97.9％。     

幼虫发育试验对羊毛圆科线虫抗药性的检测

目的了解内蒙古部分地区散养户羊群毛圆科线虫的抗药性。方法将丙硫咪唑、伊维菌素配制成不同浓度的药液,利用幼虫发育试验对羊毛圆科线虫进行检测,统计数据,建立直线回归方程,计算出幼虫发育半数抑制量(LD50)。结果包头土右旗羊伊维菌素和丙硫咪唑的LD50平均值分别为0.0 039μg/mL和0.0 052μg/mL,最高值分别为0.0 055μg/mL和0.0 085μg/mL;鄂尔多斯达旗羊两者平均值0.0 034μg/mL,0.0 036μg/mL,最高值分别为0.0 078μg/mL和0.011μg/mL;同时将上述地区羊丙硫咪唑LD50最高值同宁夏地区抗苯并咪唑类虫株相应的LD50值进行了对比,前者的LD50值明显低于后者。结论上述被检地区散养户羊群毛圆科线虫尚不具有抗药性。