日本鳗鲡的生物学特征及人工养殖技术

日本鳗鲡的生物学特征及人工养殖技术郑建平（广东省肇庆市粮食局科技发展中心美国青蛙养殖场２５６０２０）日本鳗蛹（Ａｎｇｕｉｌｌａｊａｐｏｎｉｃａ）属脊索动物队脊椎动物亚门、鱼纲、鳗鲡目、鳗鲡科、鳗鲡属．日本鳗鲡（以下简称鳗鲡）肉质细嫩鲜美，内含多种维生...     

4种鳗鲡同工酶的比较研究

以日本鳗鲡（Anguilla japonica）、澳洲鳗鲡（A．australis）、欧洲鳗鲡（A．anguilla）和美洲鳗鲡（A．rostrata）成体为试验材料,应用垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对4种鳗鲡的眼球、肌肉、肝脏、心脏和。肾脏5种组织的8种同工酶（酯酶EST、乳酸脱氢酶LDH、苹果酸脱氢酶MDH、葡萄糖脱氢酶GCDH、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶G6PD、醇脱氢酶ADH、超氧化物歧化酶SOD和谷氨酸脱氢酶GDH）进行比较研究。结果表明：GDH在5种组织中均没有表达,7种同工酶（EST、LDH、MDH、GCDH、G6PD、ADH、SOD）在4种鳗鲡均表现出很强的组织特异性。4种鳗鲡的同工酶谱表型非常相似,在同一组织中同工酶的存在位点、表达形态、活性等方面是类似的,但也表现出一定的种间差异性。应用酶谱差异指数D对4种鳗鲡进行聚类分析,结果提示日本鳗鲡和澳洲鳗鲡有较近的亲缘关系、而欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡有较近的亲缘关系,这与4种鳗鲡的形态特征和生物学特征相吻合。     

日本鳗鲡消化道肥大细胞组织化学的研究

研究日本鳗鲡（Anguilla Japonica）消化道组织中的肥大细胞组织化学性质,观察肥大细胞胞浆颗粒的异质性。采用改良甲苯胺蓝（MTB）、阿利新蓝-沙黄O（AB／SO）、甲基绿-派洛宁（MG—P）、和天青Ⅱ-伊红-瑞氏混合液等4种组化染色法。用阿利新蓝-沙黄O染色法显示日本鳗鲡消化道的肥大细胞效果较好;甲基绿-派洛宁（MG—P）、和天青Ⅱ-伊红-瑞氏混合液染色效果一般,被染的肥大细胞数量很少;改良甲苯胺蓝甚至观察不到肥大细胞。日本鳗鲡肥大细胞数量不多,主要分布于食管、胃和肠道等部位黏膜层的黏膜上皮下方、固有层结缔组织,少量分布在黏膜下层结缔组织,并且有沿血管周围分布的特点;肥大细胞体积小,且多呈圆形、椭圆形、梭形及不规则形。AB／SO染色法效果最好,适用于日本鳗鲡肥大细胞的鉴定;改良甲苯胺蓝染色法不适合于日本鳗鲡肥大细胞的鉴定。     

氟苯尼考在两种鳗鲡体内残留及消除规律的研究

研究了氟苯尼考在日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内的残留消除规律.在25℃下,以30 mg/kg的剂量多次口灌给药后1、2、3、5、8、12、20、30 d,取鳗鲡的血浆和肌肉、肝脏、肾脏等样品,加入内标氯霉素混合,经萃取过滤后采用反相高效液相色谱法检测,测定的平均回收率在97.8%～101.3%之间,日内变异系数为（3.23±0.49）%,日间变异系数为（4.08±0.85）%.氟苯尼考在鳗鲡体内消除较慢,在日本鳗鲡和欧洲鳗鲡血浆中的半衰期分别达7.8 d和8.3 d.氟苯尼考的最高残留限量,如规定为0.2μg/g,则日本鳗鲡和欧洲鳗鲡用药后的最大休药期分别是38.7 d和28.5 d;如规定为1μg/g,则最大休药期分别是19.0 d和11.2 d.     

基于16S rDNA序列和RFLP分析的病鳗分离菌株鉴定

结合16S rDNA基因序列和限制性片段长度多态性（RFLP）的分析方法,通过与GenBank库中已递交的细菌16S rDNA基因序列进行同源性比较,对分离自发病鳗鲡（欧洲鳗鲡,日本鳗鲡和美洲鳗鲡）的30株细菌进行初步鉴定和分类.结果表明,这些细菌可大致分为气单胞菌属（Aeromonas sp.）、假单胞菌属（Pseudomonas sp.）、邻单胞菌属（Plesiomonas sp.）、克雷伯氏菌属（Klebsiella sp.）、柠檬酸杆菌属（Citrobacter sp.）、不动杆菌属（Acinetobacter sp.）和肠杆菌属（Enterobacter sp.）等7个菌属.分析认为,部分分离菌株可能是引起鳗鲡病害的疑似致病性菌株.     

欧洲鳗鲡与日本鳗鲡的染色体组型比较

采用ＰＨＡ体内注射法,以肾组织为材料,结合扫描电镜研究,对区洲鳗鲡、日本鳗鲡的染色体组进行了比较,结果是：欧洲鳗鲡２ｎ＝３８,中部着丝点染色体为６对,近中部着丝点染色体为３对,端部着丝点染以体为１０对,染色体总臂数（ＮＦ）为５６,ｔ３染爸体上有随体。日本鳗鲡２ｎ＝３８,中部着丝点染色体数为５对,近中部着丝点染色体为５对,端产着丝点染色体为９对,染色体总臂数（ＮＦ）为５８。对欧洲鳗鲡、日本鳗鲡的染色     

世界鳗鲡属的种类与渔业

世界鳗鲡属的种类多，分布广，产量颇高，其肉质鲜美，在商品市场上享有很高的声誉．目前，世界各地鳗鲡渔业的发展甚为迅速，尤其是养鳗业的开拓，使其产量大幅度上升．当今世界上饲养鳗鲡的国家，主要有中国、日本．韩国、以养殖日本鳗鲡(Anguilla japonica)为主；意大利，以色列、埃及、匈牙利等国养殖欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)为主；新西兰等国也在从事鳗鲡饲养业的开展。     

世界鳗鲡属的种类与渔业

世界鳗鲡属的种类多，分布广，产量颇高，其肉质鲜美，在商品市场上享有很高的声誉．目前，世界各地鳗鲡渔业的发展甚为迅速，尤其是养鳗业的开拓，使其产量大幅度上升．当今世界上饲养鳗鲡的国家，主要有中国、日本．韩国、以养殖日本鳗鲡(Anguilla japonica)为主；意大利，以色列、埃及、匈牙利等国养殖欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)为主；新西兰等国也在从事鳗鲡饲养业的开展。     

四羟甲基硫酸鏻对日本鳗鲡的急性毒性及杀菌性能试验

[目的]探讨四羟甲基硫酸鏻（THPS）作为一种新型季鏻盐杀生剂对日本鳗鲡的毒性作用以及杀菌效果。[方法]在室内常温静水条件下,进行THPS对日本鳗鲡（Anguilla japonica）急性毒性试验,以及THPS对柱形屈绕杆菌（F.columnaris）的杀菌性能试验。计算THPS的半致死浓度（LC50）、24 h安全浓度（Sc）、对柱形屈绕杆菌的最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）以及杀菌率。[结果]THPS的24、48和96 h的LC50分别为11.9、9.9和9.1 mg/L;Sc为2.1 mg/L;MIC和MBC分别为0.36和0.72 mg/L;浓度为0.7 mg/L,作用12 h的杀菌率达100.0%,药效持久,且受pH值影响极小。[结论]新型季鏻盐杀生剂对防治鳗鲡细菌性疾病安全、有效,值得推广。     

氟苯尼考在日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内的药代动力学

[目的]研究氟苯尼考在日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内的药代动力学特征。[方法]氟苯尼考以混饲口灌方式给药,剂量为30mg／kg,药时数据利用DAS软件进行药动学分析。[结果]日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内药动学的房室参数：吸收速率常数（K）分别为0．329和0．4491／h,消除相半衰期（t1／2β）为44．266和12．690h。非房室参数：药时曲线下面积（AUC0-∞。）分别为257．099和285．945mg·h／L,平均滞留时间（MRT0-∞）为18．370和14．227h,半衰期（t1/2）为12．341和9．919h,达峰浓度（Cmax）为15．92和20．39μg/ml,达峰时间（Tmax）均为4h。[结论]建议在鳗鲡中使用氟苯尼考进行治疗时可采用30mg／kg体重的剂量,给药间隔为12h,即每天2次。     

摄食水平和温度对日本鳗鲡耗氧率与ETS活性的影响

分别在不同温度（22、27、32℃）以及不同摄食水平（饥饿、1%、2%、饱食）条件下对日本鳗鲡的ETS活性（AETS）和耗氧率（R）进行测定。研究结果表明,在饱食状态下,鳗鲡的耗氧率、ETS活性随着温度升高而增加,但R/AETS值基本恒定,保持在0.38左右;同时,在27℃温度下,随着摄食水平（LR）的增高,鳗鲡的耗氧率、ETS活性也随之增高,并且R/AETS值也呈现出相应增高的趋势,其具体关系如下：R/AETS=0.046 3 LR+0.249 5（r2=0.823 2）。     

鳗鲡属6种鱼类线粒体COⅠ和COⅡ基因序列分析和分类的有效性

对鳗鲡属（Anguilla）的美洲鳗鲡（A. rostrata）、欧洲鳗鲡(A. anguilla)、太平洋双色鳗鲡(A. bicolor pacifica) 、花鳗鲡(A.marmorata)、澳洲鳗鲡(A. australis )、日本鳗鲡（A.japonica）6种鱼类54个体COⅠ和COⅡ基因片段中1 179 bp和633 bp的序列特征、分子分类的有效性、以及构建的系统关系进行了比较分析,结果表明：（1）COⅠ和COⅡ基因可变位点、简约信息的百分比分别为17.98%、16.45%和12.16%、10.11%,COⅠ较COⅡ基因的变异率高;（2）两种基因序列均表现出明显的反G偏倚(在COⅠ和COⅡ中G的百分含量分别为18.45%,16.67%);（3）基于COⅠ基因种间遗传距离均高于COⅡ基因,且均大于2%（欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡基于COⅡ基因序列的种间遗传距离为1.8%除外）,种内遗传距离都小于1%;（4）以两序列构建的系统树,各物种所有个体均形成独立、高支持率单系,但两序列构建的系统关系并不完全一致。由此说明,COⅠ和COⅡ都能对鳗鲡属鱼类进行有效的物种分子鉴定,但在探讨鳗鲡属鱼类系统进化关系上还需要联合其它基因。     

诱食信息素对日本鳗鲡的诱食效果研究

[目的]探讨诱食信息素对日本鳗鲡诱食的效果,筛选日本鳗鲡诱食信息素的适宜添加量。[方法]以体重为(31.89±8.95)g的日本鳗鲡为试验对象,采用行为观察法探讨3种浓度(7%、14%、21%)的日本鳗鲡信息素溶液对日本鳗鲡的诱食效果。[结果]浓度变化对日本鳗鲡第1反应时间有显著影响,3个浓度组均能显著降低日本鳗鲡第1反应时间,其中14%浓度组效果显著,鳗鲡第1反应时间仅24.67 s,与对照组相比减少了178.00 s。诱食信息素能显著增大日本鳗鲡咬饵率,诱食信息素浓度对日本鳗鲡咬饵率也有显著影响,其中14%浓度组诱食效果最佳,显著高于其他2种浓度组。[结论]诱食信息素能显著加快日本鳗鲡的摄食反应时间,提高摄食率;该试验中浓度为14%是适宜添加量。     

养殖鳗鲡拟指环虫病的研究与控制现状

拟指环虫在鳗鲡的寄生呈全球性分布，已成为日本鳗鲡、欧洲鳗鲡、美洲鳗鲡、澳洲鳗鲡等养殖鳗鲡的主要寄生虫之一，虫体大量寄生及驱虫药物大量使用导致鱼体应激，进而引发其他疾病，给鳗鱼养殖业带来巨大经济损失。文章通过综述鳗鲡寄生拟指环虫的分类地位、主要种类及感染宿主，在鳗鲡养殖过程中的流行趋势及虫体寄生宿主出现的主要症状和病理变化，以及驱虫药物的驱虫效果研究和拟指环虫病防控技术现状，发现在鳗鲡拟指环虫病有效防控方面仍然困难重重，尤其缺乏特效的防治药物，药物使用应激性产卵后导致二次感染的现象普遍存在，且拟指环虫对美洲鳗鲡、欧洲鳗鲡等的特异性选择机制及药物使用后耐药性产生的机制尚不清楚，虫体体外培养技术也未成熟，因此亟待研究拟指环虫离体培养模型，建立拟指环虫人工感染和传代系统，开展鳗鲡拟指环虫低毒性、低残留等安全控制药物的研制及口服驱虫药物的研发，并基于水体温度、pH、水流速、生物天敌等进一步加强拟指环虫生态防控技术和免疫防控技术研究，为鳗鲡产业的可持续健康发展提供有力技术保障。     

应用RAPD技术对6种玻璃鳗的种质鉴定和遗传多样性分析

运用随机多态性扩增DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术对日本鳗鲡(Anguilla japonica)、欧洲鳗鲡(A. anguilla)、美洲鳗鲡(A. rostrata)、花鳗鲡(A. marmorata)、莫桑比克鳗鲡(A. mossambica)和西里伯斯鳗鲡(A. celebesensis)的遗传多样性进行研究,分析比较6种鳗鲡的种间特异性、种间相似性和遗传距离.筛选出14个重复性好的RAPD随机引物,分别用于6种鳗鲡基因组DNA的分析,其中,引物S21、S28、S42在6种鳗鲡中所产生的条带均有所差异,可单独或组合作为6个鳗鲡品种鉴别的分子标记.应用DPS数据处理系统中的聚类分析软件包分析6种鳗鲡的遗传差异和亲缘关系,结果表明,6种鳗鲡群体间的遗传相似系数在0.076 9～0.461 5,差异显著(P<0.05),美洲鳗鲡与欧洲鳗鲡之间的遗传距离最小,为0.538 5.依据群体间的遗传距离,绘制鳗鲡遗传关系图谱,6种鳗鲡分为2类,其中,美洲鳗鲡与欧洲鳗鲡首先聚类,西里伯斯鳗鲡与这两种鳗鲡聚为一类;同时,莫桑比克鳗鲡与花鳗鲡的亲缘关系较近,而与日本鳗鲡的亲缘关系渐远,这3种鳗鲡聚为一类.结果证实这6种鳗鲡进化分布主要受到地理结构和洋流的影响,而并非只是单纯的地理位置上远近关系的影响,为鳗鲡品种的快速鉴定和种质资源的研究奠定基础.     

嗜水气单胞菌感染对美洲鳗鲡血液和生化指标的影响

为研究自发病美洲鳗鲡分离的嗜水气单胞菌对该鱼的致病性,试验将60尾美洲鳗鲡平均分为对照组、浸泡组和注射组3组,3组鳗鲡分别注射PBS、以1．0×10^8cfu／mL的嗜水气单胞菌浸泡和1．0×10^8efu／mL嗜水气单胞菌注射感染．各组鳗鲡分别于处理后6h和30h断尾采血并分离抗凝血和血清,抗凝血由血常规检测分析仪检测7项血液指标,血清由全自动生化分析仪检测13项与免疫相关的生化指标,数据用SAS软件进行统计学分析．结果表明,鳗鲡注射感染后6h,与浸泡组相比,血清谷草转氨酶（fiST）与谷丙转氨酶（ALT）的比值显著（P〈0．05）升高,其他指标在三组间均无显著（P〉0．05）差异．鳗鲡注射感染后30h,同对照组和浸泡组相比,血清总蛋白和血糖极显著（P〈0．01）下降,Na^＋和Cl^-浓度显著（P〈o．05）下降,而AST和ALT则均极显著（P〈0．01）上升．     

日本鳗鲡肝肾病原菌及其防治中药的研究

从发病日本鳗鲡（Anguilla japonica）的肝脏和肾脏分离到优势菌并命名为AJL01,经人工感染试验证实该菌为引起日本鳗鲡肝肾病的病原菌,其半数致死量为2.6×103 cfu/g;通过菌体、菌落形态特征、GYZ-15EV鉴定系统和16S rDNA同源性等综合鉴定分析,确认AJL01为迟钝爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）;采用五倍子、大黄、石榴皮、虎杖、黄芩5种中药单用及其两两配伍组成的10种复方对该菌进行抑菌试验,结果显示：单用时均可抑（杀）该菌,抑菌浓度（MIC）和杀菌浓度（MBC）相同,均为0.5～3.0 mg/mL;10种复方中6种呈现显著协同或协同作用,其中大黄＋石榴皮、石榴皮＋虎杖、五倍子＋大黄3种复方可显著协同抑制该菌生长,FIC〈0.5,MIC和MBC均不大于0.47 mg/mL.     

三种不同的养殖模式对日本鳗鲡生长性能及养殖水质的影响

以精养日本鳗鲡为研究对象,设计投放光合细菌单养(组1)、安装生物浮床单养(组2)、投放鲫鱼鳙鱼混养(组3)、空白组(对照组)等不同模式对日本鳗鲡精准养殖水体水质和生长等方面进行了研究。结果显示,在70d的养殖周期内,除混养组合和对照组间的平均增重率无显著差异外(P0.05),光合细菌和生物浮床对日本鳗鲡的生长和成活率有显著提高(P0.05);三种养殖模式对试验周期内日本鳗鲡精养水体中磷酸盐和中亚硝酸盐浓度均具有不同程度的降低作用,光合细菌组的作用尤其显著(P0.05),其后依次是生物浮床组、混养组和空白对照组;三种养殖模式对硝酸盐的浓度无显著差异影响(P0.05),三种养殖模式对氨氮含量在养殖周期内均呈现先升高后降低的规律,整个养殖周期内,光合细菌组水体中的氨氮含量均显著低于其他组(P0.05),对照组水体中的氨氮含量始终高于其他组(P0.05)。结果表明,三种不同养殖模式在改善日本鳗鲡养殖水质的前提下,对日本鳗鲡的生长和成活率有显著提高(P0.05)作用。本试验结果为日本鳗鲡养殖提供了可参考的生态健康养殖模式。     

基于AFLP标记研究长江靖江段日本鳗鲡群体遗传多样性

为探索长江靖江段日本鳗鲡Anguilla japonica种群遗传结构,通过AFLP分子标记技术首次对靖江71尾日本鳗鲡的种群遗传多样性结构进行研究,筛选了9对选择性扩增引物对不同月份、不同规格的日本鳗鲡样本进行分子标记。结果表明:筛选的9对选择性扩增引物共获得216个多态位点,比例最高为98.15%,最低为91.20%,日本鳗鲡不同月份间的多态位点比例平均为95.06%,Nei's基因多样性指数平均为0.277 2,Shannon多样性指数平均为0.433 2;小规格组A组(体长400 mm)有效等位基因数、Nei's基因多样性指数和Shannon多样性指数均高于大规格组B组(体≥400 mm)。采用AMOVA分析组间和个体间的变异成分组成,以确定该江段日本鳗鲡的遗传结构变异来源,结果显示,本研究中80%以上的变异主要来源于个体间。研究表明,靖江段日本鳗鲡群体遗传多样性水平较高,群体间的分化程度相对较弱,个体间存在基因交流。     

人工诱导日本鳗鲡成熟过程中血清及性腺内类固醇激素含量的变化

为分析日本鳗鲡(Anguilla japonica)经过多次注射鲤鱼脑垂体和人绒毛膜促性腺激素后,血清及性腺组织中性类固醇激素的含量及变化,采用超高效液相色谱-串联质谱联用(UPLC-MS/MS)对血清内6种类固醇激素[睾酮(Testosterone,T)、17α-羟基孕酮(17α-hydroxyprogesterone,17α-OHP)、17α,20β-二羟基-4-孕烯-3-酮(17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,DHP)、雌酮(estrone,E_1)、雌二醇(estradiol-17β,E_2)、雌三醇(estriol,E_3)]以及性腺中4种类固醇激素(T、DHP、E_2、E_3)进行研究。结果表明,血清及性腺组织样品平均回收率分别为86.9%~98%、75.6%~88.1%;方法检出限(S/N10)分别为0.1 ng/g、0.1 ng/m L。对样品进行测定,结果表明,随着日本鳗鲡性腺发育,实验组日本鳗鲡血清及性腺中类固醇激素的含量呈逐步增加的趋势,其中,实验组日本鳗鲡血清中除E_3(难产时含量最高)外,其他5种类固醇激素均在产卵时含量最高;实验组日本鳗鲡性腺内E_2及DHP在难产时含量最高。对照组日本鳗鲡血清内E_1、E_3以及性腺内E_2、E_3在整个实验周期均未检测到。应用本方法对日本鳗鲡血清及性腺内类固醇激素进行定量分析,具有灵敏、高回收率、准确、稳定等特点,研究结果不仅对日本鳗鲡性腺发育过程中性类固醇激素的研究有了初步的认识,更对其他硬骨鱼类性腺发育过程中体内激素变化的研究具有重要参考意义。