奶牛免疫布鲁氏菌A19疫苗后的抗体变化和排菌情况监测

为探究奶牛免疫布鲁氏菌A19疫苗(以下简称A19疫苗)后的抗体变化规律及向外排菌的风险,使用A19疫苗免疫30头3月龄奶牛,在首免和加强免疫后3个月内,通过虎红平板凝集试验(RBT)和试管凝集试验(SAT)进行抗体检测,采用荧光定量PCR方法,进行血液以及口鼻、阴道拭子的布鲁氏菌核酸检测。结果显示:首免后6 d,奶牛抗体开始出现阳转,60 d后绝大部分奶牛抗体转阴,而加强免疫后3d,又出现抗体阳转;仅在首免后2 d内的阴道拭子和首免后6 d内的血液中检测到布鲁氏菌核酸,而在口鼻拭子中以及其他时间点的血液和阴道拭子中均未检测到布鲁氏菌核酸。结果表明,A19疫苗免疫奶牛抗体阳转快,排菌期短,安全性高。     

牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区推广应用

为了解牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗在阿勒泰地区牧业村免疫牛的安全性及免疫效果,分别在阿勒泰地区3个县选取6个牧业村,采用皮下注射方式5.0×10¹⁰ CFU免疫牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗,共免疫犊牛300头,在接种疫苗后第7 d,观察并记录免疫牛的健康状况,并采集免疫后15 d、20 d、30 d、90 d和180 d牛血清,按照国家标准规定布病虎红平板凝集和试管凝集试验,完成免疫抗体水平监测,对免疫后180d布病阳性血清,采用布病iELISA鉴别诊断方法,区分标记疫苗免疫抗体与布病自然感染抗体。对免疫后3d、7 d以及15 d牛采集阴道拭子并提取基因组DNA,应用实时荧光PCR(Realtime-PCR)方法,开展布病病原学检测。免疫后7 d犊牛均未出现不良反应,免疫抗体在15d达到最高,阳性率为98.36%,随后逐渐下降,免疫后180 d抗体阳性率为21.67%,阳性血清经iELISA方法检测,结果均为标记疫苗免疫抗体。免疫后3 d、7 d以及15 d牛阴道拭子提取基因组DNA经Realtime-PCR检测均未检出布鲁氏菌阳性。牛...     

羊免疫布鲁氏菌病基因缺失活疫苗(M5-90Δ26株)与弱毒疫苗(S2株)效果对比分析

为研究羊免疫布鲁氏菌病基因缺失活疫苗(M5-90Δ26株)和弱毒疫苗(S2株)效果,选取220只3～12月龄的布病阴性羊,随机分为3组,免疫48h内观察疫苗副反应,并在免疫7d、14d、30d、90d后采血进行抗体检测。结果显示：免疫48h内,M5-90Δ26注射组和S2口服组均未出现发烧症状,M5-90Δ26注射组1只试验羊出现采食量下降,S2口服组未见羊群采食量下降。M5-90Δ26注射组免疫7d抗体阳性率97%,免疫14d和30d抗体阳性率100%;S2口服组免疫后7d抗体阳性率49%,免疫30d抗体阳性率最高(81%);对照组未检测到布病抗体阳性。综上所述,布病M5-90Δ26在免疫后抗体水平上优于S2株,但可能存在副反应,建议免疫前观察羊状态,严格按照疫苗说明书进行免疫。     

布鲁氏菌S2、M5及A19疫苗免疫羊抗体消长规律研究

为评价不同商品化布鲁氏菌疫苗对小尾寒羊免疫后抗体消长规律及疫苗免疫效果,本研究选取3月龄～6月龄的羔羊随机分为5组,分别为布鲁氏菌疫苗S2口服组(70只)、A19皮下注射组(30只)、M5皮下注射组(70只)、M5口服组(70只)和对照组(30只),并采用ELISA方法检测疫苗免疫后不同时间段羊血清中IgM和IgG抗体的消长规律,用虎红平板凝集试验(RBPT)和ELISA方法检测疫苗免疫后不同时间段羊血清中抗体转阳率和抗体持续期的变化趋势,统计分析其抗体消长规律。结果显示,免疫前,所有实验羊均未检测到抗体,不同疫苗免疫后羊产生的IgM抗体水平最高的是A19皮下注射组,最低的是M5口服组,在免疫7 d～14 d内4组实验组羊的IgM抗体水平均达到峰值,其抗体持续时间在45 d～60 d。不同疫苗免疫后羊产生IgG抗体水平最高的是M5皮下注射组,最低的是M5口服组,在免疫7 d～28 d内4组实验组羊的IgG抗体水平均达到峰值,其抗体持续时间在60 d以上。M5皮下注射组、A19皮下注射组、M5口服组和S2口服组羊在免疫7 d～14 d内抗体转阳率均达到最大值:采用RBPT方法检测抗体转阳率分别为67%、56%、41%和45%,采用ELISA方法检测其抗体转阳率分别为71%、56%、37%和38%,其抗体水平持续时间约为150 d。抗体水平结果表明,A19疫苗可以用于羊布鲁氏菌病的免疫,M5疫苗皮下注射免疫羊的效果最好,口服S2的疫苗免疫效果要优于口服M5疫苗。本研究为制定羊布鲁氏菌病合理的疫苗免疫方案提供了科学依据。     

布鲁菌基因缺失活疫苗（M5-90Δ26株）临床效果评估

为评估布鲁菌疫苗（M5-90Δ26株）冻干活疫苗的安全性和有效性，选取内蒙古7个规模羊场通过免前检测评估，分别筛选A组（阳性羊群）、B组（阴性羊群）、C组（流产严重的羊群）、D组（怀孕羊群）以皮下注射免疫方式进行接种M5-90Δ26株布病疫苗，并在接种后14、21、28、35、60、120及150 d分别采集血清。用虎红平板凝集试验对A、B、C、D组抗体阳性率、阳性羊群免后治愈率、流产羊群怀孕率进行统计，同时在接种疫苗后24～48 h内观察和记录免疫羊的健康状况。结果表明：接种后24～48 h内，免疫羊只未见不良反应；A组阳性羊群接种M5-90Δ26疫苗后120 d转阴率能达到38.8%;B组阴性羊群免疫后150 d转阴率能达到91.71%;C组流产严重的羊群免疫前流产率达85%以上，使用布病M5-90Δ26疫苗半年后，羊群怀孕率达到100%，减少因布鲁菌病（简称布病）引起的流产，同时也增加了养殖户的经济收入；通过对D组怀孕羊群产下的羔羊进行检测发现，羔羊1～2月母源抗体为40%～50%,3月龄后母源抗体基本消失。从布病M5-90Δ26疫苗抗体转阴率发现，B组150 d转阴率大于A组；...     

布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)免疫绵羊试验

为掌握布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)免疫后的绵羊抗体水平、消长情况和不良反应发生情况,选择育肥羊和怀孕母羊各100只,分别用皮下注射免疫和点眼免疫法,开展了3个月的跟踪观察和定期检测。结果表明:布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)对育肥羊注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100.0%,90 d降至22.7%;点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达85.4%,90 d日降至0;个别3月龄以下育肥羊对注射免疫和点眼免疫均会发生一定程度不良反应,甚至死亡。活疫苗(M5-90株)对怀孕母羊皮下注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100%,90 d降至14%;点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达95.9%,90 d降至6.4%;注射免疫和点眼免疫均能造成一定比例的母羊流产和其他不良反应。因此,布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)不宜用于3月龄以下羔羊和怀孕母羊的免疫。     

布鲁氏菌病弱毒活疫苗经不同黏膜途径免疫奶牛的排菌程度及免疫反应

为探究布鲁氏菌病疫苗经不同黏膜途径免疫奶牛后对体液免疫与细胞免疫水平及疫苗体外排菌方面的影响,将80头10~12月龄的奶牛平均分为四组,通过眼部滴注(A组)、口腔喷注(B组)、阴道灌注(C组)三种黏膜免疫途径对奶牛接种布鲁氏菌病弱毒活疫苗(A19株),并与皮下注射免疫组(D组)进行比较,测定了免疫后7 d内黏膜免疫组的排菌情况,180 d内四组免疫奶牛的抗体效价和60 d内四组免疫奶牛的外周血淋巴细胞细胞因子分泌(IFN-γ、IL-2和IL-4)水平。结果显示:黏膜免疫组在免疫后5 d内均有不同程度的排菌,以免疫后1 d内排菌量为最高,并且在黏膜免疫组中阴道灌注组排菌量最低;各组奶牛在免疫后20 d时MSAT测定抗体效价平均值均上升至最高,之后持续下降,黏膜免疫组的抗体水平显著低于注射免疫组,且在黏膜免疫组中阴道灌注组的抗体水平最高;A组和B组奶牛在免疫后120 d RBT检测无阳性,C组在免疫后150 d RBT检测无阳性,D组在免疫后180 d RBT检测阳性率35%;B组、C组在免疫后7 d,A组、D组在免疫后20 d IFN-γ分泌量达到最高值,各组IL-2和IL-4分泌量未见明显变化,黏膜免疫组中阴道免疫组的IFN-γ分泌量为最高,仅次于注射免疫。结果表明,阴道灌注是一种较优的奶牛布鲁氏菌病黏膜免疫方式。     

牛羊布鲁氏菌疫苗免疫后抗体水平消长规律研究

通过对免疫布鲁氏菌疫苗的牛羊开展抗体检测,掌握布鲁氏菌疫苗免疫抗体变化规律,为制定牛羊布鲁氏菌病合理的免疫监测方案提供技术参考。试验选取布病阴性的牛开展S2和A19疫苗的免疫试验,免疫后第15、30、45天采血,分离血清。选取布病阴性的羊开展S2疫苗免疫,在免疫后第7、15、30、45、135天采血分离血清。应用虎红平板凝集试验(RBPT)方法检测布鲁氏菌病抗体。此外,对使用S2疫苗免疫的6个试点县牛羊开展免疫抗体检测,并应用RBPT方法和c ELISA方法进行比较研究。     

3种布鲁氏菌疫苗不同接种方式的安全性和免疫效果评估

为评估REV-1、A19、M5布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗的牛羊免疫安全性和效果,选取农区和牧区两个调查点的10组牛羊,分别以皮下注射、结膜囊点眼方式接种,并分别于接种后30、90、180、240 d采集血清样品,用国标方法进行抗体检测,比较阳转率变化,同时在接种疫苗后48 h内,观察和记录免疫牛羊的健康状况。结果显示:接种48 h内,接种牛羊未见不良反应;接种30 d后,各组牛羊均产生较高的抗体;不同饲养方式下,阳转率变化趋势基本一致,30 d最高,240 d时大多降至0;皮下接种的转阳率普遍高于点眼接种。结果表明,3种疫苗均安全有效,无论是牧区还是农区,牛羊免疫30d后都能产生较好的免疫保护效果,且皮下注射方式效果优于点眼。本研究掌握了3种疫苗在不同饲养方式、不同畜种、不同接种方式下的安全性和有效性,为不同地区布鲁氏菌病疫苗的选择提供了参考,为布鲁氏菌病免疫工作的顺利推广奠定了基础。     

布鲁氏菌活疫苗(M5)免疫试验——多浪羊抗体消长规律研究

为探究多浪羊布鲁氏菌活疫苗(M5)的免疫抗体消长规律,在新疆南疆地区某行政村,选择100只多浪羊进行皮下注射布鲁氏菌活疫苗(M5)免疫试验。免疫前,对所有试验羊只全部采血,分别于免疫后30、90、180 d,随机采集30只羊全血,分离血清,用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)进行布鲁氏菌抗体检测。结果显示:免疫前,所有试验羊只均未检测到抗体,免疫30 d后,73.33%的羊检测到抗体,90d后只有13.30%的羊还能检测到抗体,180 d后未检测到抗体。结果表明,布鲁氏菌活疫苗(M5)能够使多浪羊产生良好的免疫反应,免疫抗体持续期约为180 d。这说明对免疫180 d后的多浪羊进行布鲁氏菌抗体检测,可为区分自然感染和免疫提供参考。     

布鲁氏菌病温敏凝胶活疫苗(S2株)对小鼠不同黏膜免疫途径的免疫效果研究

为了比较布鲁氏菌病温敏凝胶疫苗经不同黏膜途径免疫的效果,本研究采用BABL/c小鼠为实验动物模型,制备了用于黏膜免疫的布鲁氏菌病温敏凝胶活疫苗(S2株),比较了该疫苗与常规疫苗黏膜免疫(阴道灌注、点眼、口服、直肠灌注)后的体表排菌,研究了黏膜免疫与注射免疫的抗体反应规律差异及保护效果。结果显示:凝胶疫苗能够在34℃～36℃完成由液态到凝胶态的相转变,适合所选小鼠黏膜途径的免疫;凝胶疫苗从免疫后第2 d开始停止排菌,常规疫苗的排菌持续到免疫后第4 d;黏膜免疫小鼠抗体效价比注射免疫低25%～80%,并且在免疫后45 d左右微量试管凝集试验(MSAT)结果显示前者抗体效价即下降至1∶50以下或接近1∶50,下降速度显著快于注射免疫;对阴道灌注、点眼、口服、直肠灌注及注射免疫的小鼠攻毒结果显示对照组小鼠的出菌指数为6.47,免疫组的单位保护(对照出菌指数-免疫出菌指数)分别为3.89、3.81、3.32、3.25、4.08,其中阴道灌注、点眼2种黏膜免疫小鼠的单位保护更接近注射免疫的单位保护(4.08)。研究结果提示,凝胶疫苗比常规疫苗在免疫后更可以显著减少体表排菌,抗体持续时间更短、使得对疫病的诊断干扰更低,此外,凝胶疫苗免疫也具有接近注射免疫的单位保护。因此,采用布鲁氏菌病凝胶疫苗进行黏膜免疫更有利于布鲁氏菌病的鉴别诊断。     

布氏杆菌病活疫苗(S2株)强制免疫绵羊抗体水平监测

为了了解布氏杆菌病活疫苗(S2株)强制免疫后的绵羊免疫抗体水平及消长变化规律,采用布病虎红平板凝集试验,对张掖市六县区布氏杆菌病活疫苗(S2株)强制免疫后的绵羊进行了免疫抗体抽样检测。结果表明,免疫后15 d抗体阳性率平均为29.3%,免疫后30 d抗体阳性率平均为18.0%,免疫后60 d抗体阳性率平均为7.5%,免疫后90 d抗体阳性率平均为1.8%。     

S2株布氏杆菌减毒活疫苗免疫效果观察

2010年初,某规模养殖场奶牛群发生布氏杆菌病流行和蔓延,能繁母牛出现流产、死胎的症状。根据检疫结果对布病阳性牛隔离淘汰处理,对布病阴性牛（假定健康牛）进行免疫接种。奶牛群口服接种S2株活疫苗后15d,即可检出疫苗诱导的布氏杆菌抗体,30d抗体水平达到高峰（36%）,45～90d抗体阳性率呈现缓慢下降的趋势。免疫接种能有效控制布病感染牛群流产、死胎率,减少由此导致的经济损失。本试验还对鲜乳样本中布氏杆菌核酸开展了PCR检测,对疫苗接种奶牛是否存在乳汁排菌风险进行了讨论。     

奶牛接种布鲁氏菌A 19疫苗后血清循环抗体检测报告

为了掌握奶牛接种布病A19疫苗之后抗体的消长规律,笔者采用布病平板凝集初筛+试管凝集复核定性联合试验、布鲁氏菌c ELISA抗体试验这2种方法,分别对50头奶牛进行了布病A19疫苗免疫抗体测定。结果显示,在免疫6个月之后,2种方法检测均表明,牛群中24%(12/50)的牛只布病抗体为阳性;免疫8个月之后,布病平板凝集初筛+试管凝集复核定性联合试验结果表明,牛群中10%(5/50)的牛只抗体为阳性,而c ELISA抗体检测试验结果则为0;免疫之后10个月,2种方法的检测结果均显示牛群布病阳性率均为0。本试验初步证明,布鲁氏菌c ELISA抗体检测试剂盒在奶牛群免疫布病A19疫苗8个月后才具有区分布病感染抗体和免疫抗体的特性。     

布鲁氏菌A19株菌影疫苗的构建及其免疫效果评价

为开发一种安全有效的布鲁氏菌疫苗,解决现有A19、S2和M5等弱毒疫苗存在较强毒力可感染人,且无法通过血清学方法将其免疫抗体与野毒感染抗体进行鉴别区分的问题,本试验将含有噬菌体PhiX174裂解酶基因E的质粒转化至A19疫苗株,构建菌影疫苗(A19-BG)菌株,并检验其遗传稳定性及对小鼠的安全性、免疫效果和保护效果。结果显示,构建成功的A19-BG菌株传代20代仍稳定,热诱导48 h后可完全灭活,菌体穿孔明显。A19-BG疫苗免疫小鼠7 d后免疫部位无不良反应,14 d后脾脏无可见病理变化,与空白对照组相比脾脏重量无显著差异(P>0.05)。一免和二免后14 d,免疫小鼠的布鲁氏菌抗体、白细胞介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平持续升高,产生了良好的体液和细胞免疫反应。布鲁氏菌2308强毒株攻毒免疫小鼠,免疫保护率可达87.5%,保护效果良好。结果表明,构建的A19-BG疫苗具有良好的稳定性、安全性、免疫效果和保护效果,有望成为一种极具潜力的布鲁氏菌新型疫苗。     

不同厂家猪O型口蹄疫疫苗免疫效果对比

为评估不同厂家猪O型口蹄疫疫苗的免疫效果,试验将150头猪分为三组,分别使用A、B、C厂家的猪O型口蹄疫疫苗免疫,每组50头,包含怀孕前期母猪、怀孕中期母猪、怀孕后期母猪、45d保育猪、90d育肥猪各10头。记录母猪免疫前、免疫后2h、免疫后20h的体温,记录所有猪只接种过程中疫苗的通针性,应激头数,应激程度,以及免疫后三餐的采食量。测定每组免疫前、一免后30d、二免后30d的血清抗体。结果:一免后2h母猪体温升高数值,C组B组A组;二免后2h母猪体温升高数值,C组A组B组;保育猪应激反应严重程度,A组B组C组;母猪一免后30d和二免后30d的FMDV-O型抗体平均值,C组A组B组;母猪一免后30d和二免后30d的FMDV-O型抗体合格率(抗体效价=64),C组A组B组;保育猪免疫后30d的FMDV-O型抗体平均值,C组A组B组;保育猪免疫后30d的FMDV-O型抗体合格率(抗体效价=64),C组B组A组。结论:综合三种疫苗的安全性和猪群FMDV-O型抗体水平结果,疫苗C的免疫效果最佳,疫苗A次之;三种疫苗的免疫效果差距不大。     

布鲁菌在豚鼠和奶牛体内诱导的抗体水平和变态反应强度的相关性

为探索布鲁菌在豚鼠和奶牛体内所引起的抗体水平和变态反应强度的相关性,分别用1×104,3×104CFU牛种布鲁菌强毒2308株各感染12只豚鼠,30 d后测定抗体滴度和变态反应强度。感染后35 d,扑杀豚鼠,取脾脏测定每克脾脏含菌量。用布鲁菌A19疫苗,以5×1010CFU皮下注射布病阴性荷斯坦奶牛50头,分别于免疫后15,30,60 d测定抗体滴度,并于免疫后45 d测定变态反应强度。运用SPSS 17.0-Analyze-Correlate-Bivariate Corre-lations程序分析试验数据,结果显示,不同剂量布鲁菌2308感染豚鼠后30 d所诱导的抗体水平、变态反应强度和克脾脏含菌量三者之间均无相关性。A19疫苗免疫奶牛后60 d的抗体水平与免疫45 d的变态反应强度呈正相关,免疫15 d和30 d的抗体水平和变态反应强度无相关性。豚鼠试验结果表明,抗体水平、变态反应强度与个体对布病的抵抗力均无相关性。     

布鲁氏菌S2疫苗阴道途径免疫羊的安全性初步研究

布鲁氏菌病(简称布病)是一种由布鲁氏菌引起的严重危害人和动物健康的人兽共患病。疫苗免疫是畜间布病流行率较高地区控制该病的重要手段。辽宁省建昌县经过多年实践,创新出一套免疫保护效果较好的阴道途径免疫S2疫苗的新型家畜免疫技术。为了解该技术对家畜的安全性,本研究采用该技术免疫了3只山羊,在免疫1个月后检测其抗体滴度、体内含菌量,观察脾脏和肝脏的病理变化。结果显示,3只免疫山羊均抗体阳转,所有采集的脏器均未分离到布鲁氏菌,且脾脏和肝脏未出现布病相关病理变化。初步研究表明,通过阴道途径对羊进行S2疫苗免疫是安全的。     

含硒型牛副伤寒活疫苗对牦牛免疫效果及免疫持续期的研究

依据都柏林沙门氏菌弱毒株对硒制剂的耐受性、亚硒酸钡对牦牛的安全剂量试验结果,以牛副伤寒活疫苗,含硒型牛副伤寒活疫苗给6月龄左右牦犊牛经颈部或臀部肌肉注射,于注射后24 h、30 d、60 d、180 d分别在试验牦牛的颈静脉采血,进行血硒含量及血清中的抗体检测;并于免疫后6、13个月攻毒。结果表明,Se 6 mg 15亿活菌的含硒型牛副伤寒活疫苗免疫牦牛后,牦牛精神状况、被毛光泽和营养状况有所改善,血硒浓度在0.05 μg/ml以上,可维持90 d,第7 d可产生坚强的免疫应答,免疫后6、13个月攻毒,均产生100%的保护。     

M5和S2株布鲁氏菌活疫苗对羔羊的免疫效果及对其生长性能的影响

为探究当前我国常用的布鲁氏菌病活疫苗（M5、S2株）对羔羊免疫后血清抗体产生以及早期生产性能的影响，将90只1月龄湖羊羔羊随机均分为3组（M5免疫组、S2免疫组、对照组），M5免疫组皮下注射M5株疫苗，S2免疫组口服S2株疫苗，对照组肌内注射生理盐水。免疫后观察疫苗免疫副反应，并于免疫前及免疫后7、14、21、28、90、120 d采集血液样品进行抗体检测，首先通过虎红平板凝集试验（RBT）初检，再采用试管凝集试验（SAT）复核。参试羊群于免疫前及免疫后30、60、90、120 d称重，分析判断M5、S2株疫苗对羔羊生长性能的影响。结果显示：M5株疫苗免疫羔羊引起的免疫副反应较大，S2株疫苗相对较小；M5株疫苗免疫后7 d即可检测到血清抗体，血清抗体阳性率为42.86%,14 d达到峰值（96.43%）,120 d降至29.63%;S2株疫苗免疫羔羊后7 d同样可检测到血清抗体，阳性率为34.48%,14 d血清抗体阳性率达93.10%,120 d降至27.59%。免疫M5、S2株疫苗均会对羔羊早期生长发育产生影响，导致生长发育缓慢，其中M5株疫苗影响较大，羔羊在各阶段的体重指标以及阶...