淫羊藿多糖醇沉工艺优化及其对巨噬细胞释放NO的影响

旨在优化淫羊藿多糖醇沉条件并研究不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖对巨噬细胞释放NO的影响。采用乙醇沉淀法从淫羊藿多糖提取物中获得淫羊藿多糖,在单因素试验基础上,选择浓缩比、乙醇浓度、乙醇体积倍数、醇沉时间为自变量,采用L9(34)的正交试验设计,优化淫羊藿多糖最佳醇沉条件。用浓度为400、500、600、700、800mL/L乙醇醇沉的淫羊藿多糖,采用体外培养法,测定淫羊藿多糖对巨噬细胞释放NO的影响。结果表明,淫羊藿多糖最佳醇沉条件为浓缩比为1∶2,乙醇浓度为800mL/L,乙醇体积倍数为4倍,醇沉时间为12h;每个乙醇浓度醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,500mL/L乙醇醇沉的多糖活性最好。结果显示,淫羊藿多糖对巨噬细胞具有良好的刺激作用。     

不同桑叶提取物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力的影响

试验旨在比较不同桑叶提取物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖作用的影响。用不同浓度乙醇醇沉桑叶水提物,制备桑叶粗多糖MLP-1、MLP-2、MLP-3、MLP-4、MLP-5,采用苯酚硫酸法测定各提取物多糖含量。以5种桑叶粗多糖和桑叶水提物（MLAE）为试验药物,采用MTT法比较多糖含量分别在15.625、31.25、62.5、125、250 μg/mL浓度时各提取物单独刺激及协同LPS、PHA共同刺激小鼠脾脏B、T淋巴细增殖的变化。结果显示,多糖浓度在15.625~250 μg/mL范围内,各提取物无论单独还是协同LPS和PHA时均能促进小鼠脾脏B、T淋巴细胞的增殖,其中,MLP-1多糖含量在低浓度时能显著刺激脾脏B淋巴细胞增殖（P<0.05）;MLP-3和MLP-5在低浓度时表现出较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力;MLAE协同LPS在大部分浓度点的脾脏B淋巴细胞的增殖能力均显著高于细胞对照组和LPS对照组,可显著提升体液免疫功能（P<0.05）。     

3种植物多糖对鸡外周血和脾脏淋巴细胞体外增殖作用的影响

本试验旨在比较3种植物多糖对鸡外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞体外增强免疫活性的研究.通过酶学检测法测定3种植物多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度,MTT法比较3种植物多糖单独刺激和PHA协同刺激对鸡外周血T淋巴细胞增殖指数的影响,同时比较3种植物多糖单独刺激及与LPS协同刺激对鸡脾脏B淋巴细胞增殖率的影响.结果显示,黄芪多糖和桑叶多糖具有较高的细胞安全浓度,在64~512 μg/mL时,3种植物多糖对鸡外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞的增殖作用较强.结果表明,3种植物多糖对鸡外周血和脾脏淋巴细胞都有不同程度的体外增殖作用,其中黄芪多糖的增殖作用最强,桑叶多糖其次,山药多糖最差.     

分级醇沉刺五加多糖不同浓度对小鼠脾细胞增殖和IL-2表达的影响

为了研究不同醇沉浓度刺五加多糖对脾细胞增殖和细胞因子IL-2表达的影响,试验采用分级醇沉的方法对刺五加多糖进行醇沉得到粗糖,并去蛋白得到精制糖,研究分级醇沉刺五加多糖不同浓度对小鼠脾细胞增殖、ConA和LPS诱导的脾淋巴细胞的增殖反应和脾细胞产生细胞因子表达的影响。结果表明:40%醇沉组多糖浓度为7.8～125μg/mL时均能促进脾细胞增殖,并且其促进脾细胞增殖作用与多糖浓度呈剂量依赖性,促增殖作用增强;40%醇沉组多糖浓度为15.62～125μg/mL时能促进ConA诱导的脾淋巴细胞的增殖反应;各醇沉组多糖浓度为15.62～125μg/mL时均能显著促进LPS诱导的脾淋巴细胞的增殖反应;20%、40%、60%醇沉组多糖浓度为3.9～7.81μg/mL时IL-2的表达水平呈上升趋势;并且随药物浓度的增大细胞因子表达量先增多后减少。说明以40%醇沉刺五加多糖免疫增强效果优于其他醇沉多糖。     

MTT法测定自制多糖注射剂对鸡胚成纤维细胞和鸡脾淋巴细胞增殖的最适浓度

为探讨自制多糖注射剂（板蓝根、黄芪、淫羊藿的混合多糖注射剂）促进鸡胚成纤维细胞和鸡脾淋巴细胞增殖的最适浓度,用MTT法分别检测加入不同浓度的混提多糖注射剂的鸡胚成纤维细胞和鸡脾淋巴细胞的OD值。结果表明,自制多糖注射剂促进鸡胚成纤维细胞和鸡脾淋巴细胞增殖的最适浓度分别是25μg／ml、50μg／ml。     

蛹虫草多糖对鸡脾脏淋巴细胞的影响

试验将7种浓度蛹虫草多糖(CMP)单独或与刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)同时加入鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖(A570值)的变化;将5种浓度的CMP 40%乙醇提取物(CMP40)、CMP 50%乙醇提取物(CMP50)分别与ConA加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)的含量。结果显示,CMP在31.25~2 000μg/mL时,CMP40+ConA组的A570值显著高于ConA对照组;CMP在31.25~500μg/mL时,CMP50+ConA组A570值显著高于ConA对照组,CMP40+LPS组、CMP50+LPS组的A570值显著高于LPS对照组;CMP40在125~1 000μg/mL时、CMP50在500μg/mL时,各多糖组的A570值显著高于细胞对照组;CMP40和CMP50在250~1 000μg/mL时,各多糖组的IL-2和IFN-γ浓度显著高于对照组。结果表明,CMP40和CMP50在合适的剂量能单独或协同ConA、LPS刺激鸡的T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫能力。     

九种中药成分对体外培养小鼠淋巴细胞功能的影响

为进一步探索黄芪多糖等9种中药成分免疫增强活性的作用机理并比较各成分之间免疫增强活性的强弱，在体内试验的基础上，用脾淋巴细胞增殖反应和抗体夹心酶联免疫吸附试验测定了它们对体外培养的小鼠淋巴细胞功能的影响。结果表明，人参皂甙、蜂胶黄酮、黄芪多糖、淫羊藿黄酮、淫羊藿多糖都能显著地直接或协同ConA刺激脾和外周血淋巴细胞增殖，也能显著增加LPS诱导的脾淋巴细胞增殖活性和显著升高体外培养的小鼠脾淋巴细胞产生的IgG水平；当归多糖能协同ConA和LPS的诱导活性，提高小鼠脾淋巴细胞体外培养系统的IgG水平；黄芪皂甙能直接和协同LPS刺激淋巴细胞增殖，板蓝根多糖则仅能促进LPS的诱导活性，蜂胶多糖的作用则均不明显。     

阿魏根粗多糖对鸡脾脏和外周血淋巴细胞体外增殖作用的影响

为研究新疆阿魏多糖（FSP）对鸡外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖作用的影响。本研究用水提醇沉法得到阿魏总多糖（FSP_t）和3种分级多糖（FSP₃₀、FSP₅₀、FSP₇₀）,并通过苯酚-硫酸法和红外光谱对FSP进行检测。通过MTT法测定各级FSP的安全浓度及其对鸡外周血T淋巴细胞及脾脏B淋巴细胞的增殖能力。结果显示,提取的FSP均具有多糖的特征峰,为多糖类化合物。外周血T淋巴细胞增殖试验表明,除FSP₅₀外,所有多糖在一定浓度下均能单独和协同PHA刺激T淋巴细胞增殖,其中FSP_t的增殖作用较强。脾脏B淋巴细胞增殖试验表明,除FSP₅₀外,所有多糖在一定浓度下均能单独和协同LPS刺激B淋巴细胞增殖,其中FSP₇₀和FSP_t增殖作用较强。综上所述,各级FSP中,FSP_t对脾脏B淋巴细胞和外周血T淋巴细胞的增殖作用最强,可以作为进一步研究的材料。     

中药成分对培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响

为筛选增强免疫作用较好的中药成分和研制新型复方中药成分免疫增强剂，比较了4种浓度的当归多糖（CAPS）、黄芪多糖（APS）、板蓝根多糖（IRPS）、淫羊藿多糖（EPS）、蜂胶多糖（PPS）、淫羊藿黄酮（EF）、蜂胶黄酮（PF）、黄芪皂苷（AS）和人参皂苷（GS）9种中药成分对培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响。结果表明，多数中药成分能促进淋巴细胞增殖，其中APS、EPS、GS和AS等在一定浓度既能单独又能协同ConA或LPS刺激淋巴细胞增殖，以EPS和APS作用最强。同时根据浓度试验结果，选出各药的合适浓度，进一步比较它们作用的差异，发现EPS和GS效果最好。这些中药成分可以作为复方中药成分免疫增强剂的组分药。     

几种中药成分的免疫增强活性及其作用效果

测定了黄芪多糖等9种中药成分对正常小鼠脾和外周血淋巴细胞增殖反应的影响，并观察了这些中药成分对兔瘟组织灭活疫苗的增强免疫效果。结果表明，人参皂甙、黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖和蜂胶黄酮能显著增强伴刀豆球蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠淋巴细胞增殖，提高免疫兔抗体水平和延长抗体持续时间；板蓝根多糖能增强ConA和LPS的诱导活性，蜂胶多糖能促进ConA的诱导活性，黄芪皂甙和淫羊藿黄酮能促进LPS诱导的淋巴细胞增殖，但它们都不能提高兔瘟组织灭活疫苗的免疫抗体水平。     

硫酸化酵母葡聚糖对鸡淋巴细胞的影响

为研究硫酸化酵母葡聚糖(SCG)对鸡细胞免疫的影响,将7种浓度SCG单独或与Con A、LPS加入到鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化;将5种浓度的SCG分别与Con A加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定IL-2和IFN-γ的含量。结果显示,SCG浓度在在250~2 000μg/m L时,SCG+Con A、SCG各剂量组随着多糖浓度的增加其A570值先增加后降低(P0.05);SCG+LPS各剂量组的A570随着多糖浓度的增加而降低,2 000μg/m L剂量组显著低于其他三组(P0.05);均具有显著的量效关系。SCG浓度在62.25~1 000μg/m L时,多糖组脾脏淋巴细胞体外培养上清液中IL-2与IFN-γ浓度,随着多糖浓度的增加其促进淋巴细胞分泌细胞因子的能力先增加后降低,具有明显量效关系;且均在250μg/m L时效果最好。结果表明,SCG在合适剂量能单独或协同Con A、LPS刺激鸡T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫。     

列当多糖对鸡淋巴细胞体外增殖能力的影响

为探讨列当多糖(OSP)对鸡脾脏淋巴细胞和外周血淋巴细胞增殖作用的影响,试验用水提醇沉法提取列当多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对列当多糖进行检测,采用MTT法测定列当多糖的安全浓度及对鸡淋巴细胞的增殖能力。结果显示:试验所提取的列当多糖均具有多糖的特征峰为多糖类化合物。外周血T淋巴细胞增殖试验表明,OSP30和OSP80的增殖作用强且对T淋巴细胞增殖的浓度范围最大。脾脏B淋巴细胞增殖试验表明,OSP30和OSP80的增殖作用强且对B淋巴细胞增殖的浓度范围最大。结果表明,OSP30及OSP80对脾脏淋巴细胞和外周血T淋巴细胞的增殖作用最强。     

茶树菇多糖对小鼠脾脏淋巴细胞免疫调节的影响

【目的】试验旨在揭示茶树菇多糖(Agrocybe aegerita polysaccharid, AAP)对小鼠脾脏淋巴细胞免疫调节的影响,为阐明AAP的作用机制及其临床应用提供依据。【方法】以小鼠脾脏淋巴细胞为研究对象,用噻唑蓝(MTT)比色法测定AAP对淋巴细胞的安全浓度,以安全浓度进行后续试验;用MTT法检测不同浓度AAP对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响,同时设置细胞、脂多糖(LPS)和植物血凝素(PHA)3个对照组,筛选出对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力较强的浓度,用流式细胞仪检测其对T淋巴细胞亚型CD4⁺/CD3⁺和CD8⁺/CD3⁺比值的影响,利用ELISA法检测其对淋巴细胞上清液中白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)含量的影响。【结果】低于1 000μg/mL AAP对小鼠脾脏淋巴细胞不产生毒性作用。与对照组相比,不同浓度AAP均可极显著协同LPS和PHA刺激淋巴细胞增殖(P<0.01);125和250μg/mL AAP可极显著提高...     

5种硫酸化多糖刺激鸡外周血淋巴细胞增殖的效果比较

比较了硫酸化黄芪多糖(sAPS)、硫酸化淫羊藿多糖(sEPS)、硫酸化香菇多糖(sLNT)、硫酸化当归多糖(sCAPS)和硫酸化枸杞多糖(sLBS)体外对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响。首先测定5种硫酸化多糖对淋巴细胞的安全浓度,然后取安全浓度范围内的各硫酸化多糖分别单独或与ConA一起加入到淋巴细胞的培养体系中,用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明,5种硫酸化多糖在合适的剂量均可单独或协同ConA刺激淋巴细胞增殖,且有一定的量效关系,以sAPS60效果最好,sEPS5次之。     

铁皮石斛对免疫抑制模型小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

为了探究不同浓度的铁皮石斛对环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cy)所致免疫抑制模型小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响,选取6周龄清洁级KM小鼠50只,体重18~22 g,全为雌性,随机分为对照组、免疫抑制组。每组各设5个重复,每个重复5只小鼠。免疫抑制组给予腹腔注射环磷酰胺(100 mg/kg·bw),对照组给予腹腔注射等量的生理盐水。1日1次,隔天注射,连续15 d。结果:铁皮石斛在终质量浓度5~135μg/mL范围内促进效果显著,其中作用48 h增殖幅度明显。对于小鼠脾脏T淋巴细胞而言,铁皮石斛浓度为20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL均能促进免疫抑制小鼠T淋巴细胞的增殖(P0.05),尤以浓度为20μg/mL时最佳。铁皮石斛浓度为80μg/mL时对于正常小鼠脾脏T淋巴细胞分裂增殖显著(P0.05)。对于小鼠脾脏B淋巴细胞而言,铁皮石斛浓度为40μg/mL时对免疫抑制小鼠脾脏B淋巴细胞增殖效果最佳。各浓度铁皮石斛OD值均高于单纯LPS刺激,且细胞增殖情况差异显著(P0.05),但对照组中3个铁皮石斛浓度差异不显著(P0.05)。结论:铁皮石斛浓度在40μg/mL、80μg/mL时能有效协同Con A、LPS刺激小鼠脾脏T、B淋巴细胞的增殖。     

紫锥菊多糖对鸡淋巴细胞体外增殖影响

为了评价紫锥菊多糖免疫增强效果,将4种浓度的紫锥菊多糖分别加入体外培养的鸡脾脏淋巴细胞中,培养44 h后,用MTT法测定淋巴细胞增殖变化。结果表明,4种浓度的紫锥菊多糖对鸡淋巴细胞均有促进增殖及协同的作用,其中在50-100μg/mL浓度范围内效果最为显著。     

淫羊藿多糖对雏鸡免疫器官及新城疫疫苗免疫效果的影响

疫苗免疫接种是预防和控制传染病的重要措施,而佐剂是疫苗研究的重要组成部分.选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力.本研究将50、100、150 g/L等不同浓度的淫羊藿多糖与灭活的鸡新城疫病毒乳化,制备疫苗免疫雏鸡,通过检测抗体效价和免疫器官指数,探讨淫羊藿多糖作为免疫佐剂对鸡免疫功能的影响.结果表明,100 g/L和150 g/L的淫羊藿多糖作为免疫佐剂均可促进抗体的产生,提高脾脏指数,但对法氏囊指数的促进作用不明显.     

淫羊藿苷对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞免疫功能的影响

为探讨淫羊藿苷对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞的免疫功能,体外分离小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞,以淫羊藿苷进行刺激,同时设空白对照组和阳性对照组,采用MTT法检测淫羊藿苷对巨噬细胞吞噬功能和淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测淫羊藿苷对淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的影响。结果显示,淫羊藿苷能够提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能,促进脾淋巴细胞增殖,刺激淋巴细胞细胞因子的分泌。结果表明,淫羊藿苷能够提高小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞的免疫功能。     

几种天然药物成分在体外CEF中最大安全浓度的测定

采用组织细胞培养方法，测试了板蓝根多糖、当归多糖、黄芪多糖、黄芪皂甙、人参皂、淫羊藿多糖、蜂胶多糖、蜂胶黄酮、黄芪黄酮、羊藿黄酮共10种天然药物成分在鸡胚成纤维细胞（CEF）体外培养中的最大安全浓度。结果表明：黄芪多糖、当归多糖对鸡胚成纤维细胞毒性最低，最大安全达1562.5μg/mL，其后依次是板蓝根多糖、人参皂甙、黄芪黄酮、黄芪皂甙、蜂胶黄酮的毒性最大，其最大安全浓度仅4.883μg/mL。多糖成分的毒性较黄酮成分小。     

硫酸化银耳多糖和党参多糖对鸡T淋巴细胞增殖及白细胞介素-2mRNA表达水平的影响

为研究硫酸化银耳多糖(sTPS_(70c))和硫酸化党参多糖(sCPPS_(50c))增强免疫作用机理,本试验以未修饰银耳多糖(TPStp)为对照,采用噻唑蓝(MTT)法和实时荧光定量PCR法测定了sTPS_(70c)和sCPPS_(50c)对鸡T淋巴细胞增殖及白细胞介素-2(IL-2)mRNA表达水平的影响。结果表明,多糖单独加入到外周血淋巴细胞时,sTPS_(70c)和sCPPS_(50c)几乎所有浓度均可显著刺激T淋巴细胞的增殖(P0.05),而TPStp仅在浓度为3.125μg/mL时显著刺激T淋巴细胞增殖(P0.05);多糖与植物血凝素P(PHA-P)同时加入到外周血淋巴细胞时,sCPPS_(50c)在浓度为0.3911.563μg/mL时显著刺激T淋巴细胞增殖(P0.05);sTPS_(70c)和sCPPS_(50c)在浓度为1.563μg/mL时可提高T淋巴细胞IL-2 mRNA的表达水平(P0.05),其中sTPS_(70c)对IL-2 mRNA的促表达作用显著强于TPS_(tp)(P0.05),且在浓度为1.563μg/mL时的作用最强。结果提示,硫酸化修饰可以提高多糖的淋巴细胞增殖活性及显著增强IL-2 mRNA的表达,且以sTPS_(70c)的作用较强,这与取代度有一定的相关性。