金黄色葡萄球菌快速检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌是引起人类细菌性食物中毒及奶牛乳房炎的重要细菌之一,在自然界中广泛分布。本文将重点介绍金黄色葡萄球菌的几种快速检测方法。     

免疫层析法快速检测金黄色葡萄球菌的研究

为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的新方法,本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记鼠抗金黄色葡萄球菌凝集因子A(C1fA)重组蛋白特异性抗体,从抗金黄色葡萄球茵IgG包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条.该方法可以在10min内完成对含金黄色葡萄球菌奶样的检测;敏感度为1×104 cfu/mL以上,与PCR方法进行对比检测,相差一个数量级;与大肠杆菌、链球菌、李氏杆菌、巴氏杆茵及蜡样芽孢杆菌均无交叉;稳定性和重复性较好.该试纸条检测金黄色葡萄球菌临床样品表明其具有特异性好,灵敏度较高的特点.     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素及其检测方法

金黄色葡萄球菌肠毒素属于一种致病性较强的毒素,会引起细菌性食物中毒,为此,针对此肠毒素进行检测是了解其特性,并实施有效防控的重要举措。本文分析了食源性金黄色葡萄球菌肠毒素的化学组成与理化特性,并对其生活物性及致病作用进行了解,而后分析了几种常用且有效的检测方法。     

EMA-PCR检测金黄色葡萄球菌活菌的方法

根据金黄色葡萄球菌(SA)耐热核酸酶编码基因(nuc基因)设计特异性引物,对试验菌株进行PCR检测,结果显示,金黄色葡萄球菌扩增出大小为480 bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带.由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,从而使检测结果往往出现很高的假阳性.本试验利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活的作用下能与基因组DNA共价结合,从而能抑制死菌DNA进行PCR扩增的特性,建立了一种快速、有效的检测金黄色葡萄球菌活菌的EMA-PCR方法,较传统PCR大大提高了检测的准确性和可靠性,该方法检测灵敏度可达15 CFU/mL.     

乳制品中金黄色葡萄球菌定性检测方法探讨

本方法是在国标金黄色葡萄球菌定性方法的基础上终结自己多年的经验,并论述了在检测过程中注意的事项,供同行参考探讨.     

牛源金黄色葡萄球菌间接ELISA检测方法的建立

本研究将牛源金黄色葡萄球菌按照不同梯度浓度进行包被,采用矩阵法摸索最佳包被抗原浓度及优化其他EUSA反应条件,以建立检测牛源金黄色葡萄球菌抗体间接ELISA方法,并与试管凝集试验进行了敏感性与阳性检出率的比较.结果表明,经矩阵法确定抗原的最佳包被浓度为10<'8>cfu/mL.最适包被条件为37℃,抗体的最佳使用稀释倍数为1:100.酶标山羊抗兔IgG的工作浓度为1:5000.本研究建立的牛源金黄色葡萄球菌抗体EUSA检测方法,在敏感性与特异性方面均优于试管凝集试验,是一种快速准确检测牛源金黄色葡萄球菌抗体的方法.     

食品中金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立

采用PCR技术特异性扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶编码基因(nuc基因),检测模拟样品中金黄色葡萄球菌。结果表明所建立的模拟食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测方法,特异性良好,敏感性可达61.76pg/μl。     

一种金黄色葡萄球菌核酸检测方法的建立

通过对金黄色葡萄球菌的fem A基因设计两对特异性引物,运用环介导等温扩增技术(LAMP)扩增基因的特定区域,探索出一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法。结果表明,该方法对金黄色葡萄球菌菌液检测的最低检出浓度为10~2～10~3CFU/Ml;使用不同浓度的金黄色葡萄球菌处理样品,不同样品LAMP方法检测结果与国标方法一致,两者符合率为100%。该方法中金黄色葡萄球菌的fem A基因特异性引物及建立的LAMP方法能有效检测食品中的金黄色葡萄球菌,操作简单、检测速度快、灵敏度高、特异性强,适用于不同层级的实验室及基层单位使用。     

金黄色葡萄球菌分子分型方法

目前,分子分型方法已成为研究细菌耐药性发生及传播的重要手段,常用于金黄色葡萄球菌分子分型的方法有脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)、表面蛋白A基因多态性分型(Spa)、随机扩增DNA多态性分型(RAPD)、多位点测序分型(MLST)等,本文总结了上述几种常用的金黄色葡萄球菌分子分型方法 。     

兔源强毒力金黄色葡萄球菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

为建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的快速检测方法,本实验根据GenBank中登录的金黄色葡萄球菌pvl基因保守序列设计了 2对引物,经反应条件优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.结果显示,该LAMP快速检测方法最优反应条件为:外引物和内引物的浓度比为1:7,反应温度为65℃...     

生鲜乳中金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立

针对金黄色葡萄球菌的TRAP基因设计LAMP引物,建立了金黄色葡萄球菌环介导等温扩增(LAMP)方法,进行了特异性和灵敏性试验,并对临床乳样进行初步检测。结果显示,建立的LAMP检测方法特异性良好,与生鲜乳中常见的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、无乳链球菌、粪肠球菌无交叉反应,灵敏度为10CFU/mL。分别用传统分离鉴定法与LAMP法对50个乳腺炎乳样进行检测,传统方法分离得到S.aureus 14株,LAMP法检测得到S.aureus 14株,符合率100%,阳性检出率均为28%。结果表明,成功建立了生鲜乳中金黄色葡萄球菌的快速检测方法,该方法无需特殊的仪器,有利于在临床和基层进行推广。     

金黄色葡萄球菌肠毒素ELISA检测方法的建立及应用

采用金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)和金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)免疫Balb/c小鼠制备相应的单克隆抗体(m Ab),并以此为基础建立SEA和SEB的ELISA检测方法,用于牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。SEA双抗体夹心法ELISA的曲线范围是1~16μg/L,相关系数R2=0.9996,检测牛乳的检测限是0.431μg/L,加标4μg/L和10μg/L,准确度分别为89.18%和97.62%。SEB双抗体夹心法ELISA的曲线范围是0.5~8μg/L,相关系数R2=0.9998,检测牛乳的检测限是0.335μg/L,加标4μg/L和10μg/L,准确度分别为107.83%和89.88%。     

便携式电流型葡萄糖传感器快速检测致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌的研究

为探索基于便携式电流型葡萄糖传感器对致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌(S.aureus)的快速检测新技术的可行性,本研究选择和制备了适用于该检测系统,并具有对目标菌严格选择性的培养基,优化培养物中葡萄糖(Glc)初始浓度、培养检测时间、p H值和温度等参数,依据培养前后培养物中Glc含量差值的变化直接对新鲜牛乳样品中的目标菌进行定性和定量检测分析。结果显示,对6 h培养物进行检测时,即可获得Glc消耗量与培养物中S.aureus浓度的对应线性关系,实现对菌液浓度为103cfu/m L~107cfu/m L培养物的初步快速检测,最低检出限为2.6×102cfu/m L;对不能获得判别结果的培养物需要继续培养至24 h时再测定,即可实现对菌液浓度为101cfu/m L~102cfu/m L培养物的检测;对照国标方法确定标准曲线并进行验证试验;特异性和抗干扰试验表明该方法具有良好的特异性和抗其他细菌污染干扰的特性。本研究建立的方法可以直接检测牛的新鲜乳样,具有简便、经济、快速及灵敏等方面具有显著优势,为我国中、小型奶牛场和基层兽医站提供了一种初步快速检测致奶牛乳腺炎S.aureus的方法。     

金黄色葡萄球菌研究现状

金黄色葡萄球菌是一种常见的人兽共患病原菌,在自然界分布广泛,可引起人和动物感染,也可引起细菌性食物中毒或饲料中毒.在多种动物及各种食品中均检出了该菌,且检出率不断上升,并在全球扩散,已成为医院病原感染和牛羊乳腺炎感染的重要病原菌之一,食源性细菌与临床菌株可能通过食物链产生交叉污染,能够互相传播,还可能从动物传给人类,给...     

我国牛源金黄色葡萄球菌耐药现状及药敏检测方法探讨

为调查我国牛源金黄色葡萄球菌的临床耐药现状,对2009年以来新疆、浙江、山东、内蒙古和上海五省区不同地方分离的120株金黄色葡萄球菌用纸片扩散法进行临床药敏试验。结果显示,新疆分离株对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,22%的菌株对头孢西丁耐药,43%的对氯霉素耐药,64%的对环丙沙星耐药,58%的对庆大霉素耐药;其它4地区分离株耐药情况更为严重,除头孢西丁以外,对其它9种抗生素均耐药。对菌株的多重耐药情况分析发现,新疆分离株中对5种以上抗生素耐药的占86.1%,对10种抗生素完全耐药的占17.4%;而内地分离株的数据为100%和38.2%。此外,在试验中鉴定出33株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,新疆19株,占新疆菌株的22.1%,内地四地区14株,占内地分离株的41.2%。结合2005~2009年间发表的相关耐药数据的分析结果,研究显示,我国牛源金黄色葡萄球菌呈现多重耐药,且出现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并在不同地区分离株中占有一定的比例;研究还发现,新疆分离株与浙江、山东、内蒙古和上海四地分离株的耐药情况有较大差异。此外,在整理药敏试验资料时,发现在金黄色葡萄球菌药敏试验中,药物的选择没有遵循选药规则,试验操作不规范和试验结果的报告不规范等问题,对此提出一些探讨性建议,供试验人员参考。     

金黄色葡萄球菌毒力及其免疫原性评价方法研究

为建立评价金黄色葡萄球菌毒力和用于筛选免疫保护性菌株的技术方法,选取小鼠腹腔攻毒方法确定的强毒力和弱毒力菌株各3株,经小鼠后腿肌肉注射不同剂量,比较20 d的临床病变差异,确定小鼠后腿内侧肌肉注射0.25 mL、OD600=0.6的剂量可以评价不同金黄色葡萄球菌的毒力。利用该方法比较了6株强毒力菌株的毒力差异,并用于2株免疫保护性菌株的筛选。结果证明建立的金黄色葡萄球菌毒力评价方法可以精确、客观比较不同菌株毒力差异,并可用于免疫保护性菌株的筛选。     

金黄色葡萄球菌基因分型方法研究进展

金黄色葡萄球菌是引起医院和社区感染的重要致病菌之一,也是引起奶牛乳房炎的重要致病菌。为有效控制其感染及流行,并为临床采取控制措施提供理论依据,需要对菌株进行分型。本文就金黄色葡萄球菌的基因分型方法研究进展作一综述。     

一种快速鉴定猪舍空气样品中金黄色葡萄球菌的方法

显色培养基是一种新的微生物培养检测技术,通过它与普通PCR技术的结合能够快速而准确地鉴定金黄色葡萄球菌。首先用安德森采样器采集猪舍中的空气样品,采样介质是金黄色葡萄球菌显色培养基,通过培养并继续分离后刮取菌苔并煮沸后进行PCR扩增。结果在用显色培养基分离的菌中有84.4%的菌是金黄色葡萄球菌。并通过API20E标准生化鉴定系统分析鉴定所得菌株,证明用此种方法所得结果与API20E标准生化鉴定系统分析鉴定所得菌株的符合率高达96.4%。因此显色培养基与普通PCR结合是一种快速准确地鉴定空气中金黄色葡萄球菌的方法。     

沙门氏菌现场快速检测方法的建立

为了适应基层检验检疫部门对沙门氏菌的现场快速筛查,保障食品安全,试验利用沙门氏菌inv A基因建立了可以快速检测食品中沙门氏菌污染的恒温环介导扩增(LAMP)方法,并通过添加钙黄绿素实现现场快速判定食品是否受到沙门氏菌的污染。结果表明:建立的方法具有良好的特异性和灵敏性,灵敏度可达8.37×10~(-3)ng/μL。说明建立的方法可用于沙门氏菌的现场检测。